兔腸艾美爾球蟲的致病性研究

彭英河

（湘西自治州動物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南湘西416000）

兔球蟲病（rabbit coccidiosis）是一種寄生性原蟲病，是由艾美耳屬的多種球蟲寄生于兔的小腸或膽管上皮細胞內(nèi)引起的，一年四季都可發(fā)生，流行很普遍，全國各地均有發(fā)生。所有種類家兔對兔球蟲都易感染，幼兔感染率通常高達90%，死亡率可達60%左右。此病對家兔及兔業(yè)的經(jīng)濟效益有著明顯的影響，對兔業(yè)的健康發(fā)展也有著嚴重的阻礙。兔球蟲病被我國列為二類動物疫病之一。在世界各地報道中兔球蟲有17個種，一般國際上公認的兔球蟲是11個種，然而通常情況下，兔球蟲病多是同時感染多個蟲種，即混合感染。

腸艾美耳球蟲是湖南省兔寄生蟲優(yōu)勢蟲種之一，其致病性自研究以來，大多是在混合感染情況下的研究，并對其致病性研究報道說法不一。本實驗針對只寄生在腸道內(nèi)單個腸艾美耳球蟲的致病性的研究，使用不同劑量組的純種卵囊去感染無球蟲兔的方式，從臨床及病理組織學等方面進行了研究。

1 材料與方法

1.1 材料

25%重鉻酸鉀溶液、飽和食鹽水溶液、0.4%氫氧化鈉溶液；麥克馬斯特蟲卵計數(shù)器、光學顯微鏡二臺、電腦一臺；10%甲醛、蒸餾水、蘇木素、鹽酸酒精、自來水、伊紅、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯；大燒杯(150mL)、小燒杯（50mL）、手術鑷子、刀、手術剪。

1.2 方法

1.2.1 無球蟲兔的培養(yǎng)。用25日齡幼兔培養(yǎng)，飼料經(jīng)過高溫消毒且添加抗球蟲成分，每日糞檢，直到檢不出球蟲為止，停藥1周后即可使用。

1.2.2 純種腸艾美耳球蟲卵囊的收集。用單卵囊分離的方法和無球蟲兔傳代的方法來獲得大量該種。

1.2.3 實驗家兔分組及蟲體感染。將18只無球蟲兔分為六組，Ⅰ～Ⅵ組感染劑量分別為 0，102，103，104，105和106個純種腸艾美耳球蟲卵囊。

1.2.4 家兔臨床觀察（a）、家兔日重變化（b）和家兔日卵囊排出量(c)的記錄。

a:每日對各組兔觀察記錄包括：飲食狀況，精神狀態(tài)，糞便狀態(tài)等；

b:每天在固定時間固定的電子秤給各組兔秤重，詳細計數(shù)統(tǒng)計成表格形式；

c:各組兔自排卵囊日起，用麥克馬斯特法逐日計數(shù)0.P.G值，直到卵囊排完為止，制表。1.2.5剖檢及切片制作與觀察。

（1）剖檢:眼觀各組兔在不同時間段腸管的變化情況。

（2）H.E染色:取卵囊后立即投入甲醛（10%）溶液48小時，不同濃度的酒精脫水，石蠟包埋，制切片并染色。

2 結果

2.1 臨床觀察

Ⅰ組(參照組):飲食正常，精神狀態(tài)較佳，糞便圓球形，顏色正常。Ⅱ組：飲食基本正常，精神及糞便形狀變化不太明顯。Ⅲ組：感染后4～8天飲食稍有減少，糞便在5～7天時稍有變稀，第9天后開始恢復，第14天時飲食和糞便基本恢復，19天時正常。Ⅳ組:在感染后第4天精神狀態(tài)有些變化，飲食不規(guī)律，第8天時食欲幾乎廢絕，稍稍飲點水，糞便在4～8天時變稀、軟且小而黑，應該是含血液的原故。Ⅴ組：兔體后軀被糞便污染，兔只呆立不動，精神沉郁，第9天出現(xiàn)死亡，死亡高峰為感染后第10～13天，死亡占總數(shù)的 11/18（62%)，持續(xù)到 16天后停止。Ⅵ組死亡率為16/18(98%)。

2.2 體重變化

Ⅰ組:體重一直呈上升趨勢。

Ⅱ組:僅在感染后第7天稍下降，隨后即恢復，與對照組幾乎平行上升。

Ⅲ組:在感染后第8～9天和第11天，出現(xiàn)2次輕微下降，然后逐漸恢復。

Ⅳ組:感染后第4～8天出現(xiàn)變化，階梯式下降，從第9天開始有了回升的跡象。

Ⅵ，Ⅴ組:在感染后第4～8天明顯下降，Ⅵ組比Ⅴ組嚴重，第9天開始回升。體重變化情況詳見表1、

圖1 腸艾美耳球蟲體重變化

2.3 卵囊的動態(tài)變化

除參照組外，各組卵囊從8～9天開始出現(xiàn)，高劑量感染組卵囊出現(xiàn)的早。Ⅱ、Ⅲ組第9天即在糞便中出現(xiàn)少數(shù)卵囊。各組均在第11～12天卵囊排出達高峰，至21天時卵囊全部排出。詳見表1。

表1 卵囊排出量的動態(tài)變化

2.4 病理剖檢時觀查變化

空腸后段及回腸：Ⅰ組沒多大變化，Ⅱ組：第5～7天見腸腔微擴張，漿膜輕度充血，內(nèi)容物較稀，第8～9天腸壁開始出現(xiàn)白色小點。Ⅲ組：前3天變化不大。在第4～5天死亡的兔腸壁變薄，內(nèi)容物基本不存在，粘膜表面附著大量粘液。漿膜充血，腸管擴張、臌氣、胃內(nèi)積食。7～9天時剖檢見免腸管內(nèi)見水樣內(nèi)容物，含有大量粘液，漿膜、粘膜充血出血，腸壁內(nèi)有很多白色結點。Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組腸粘膜高度腫脹增厚，呈灰紅色，似腦回狀。腸內(nèi)容物或呈黃色奶酪狀、或為粉紅色膠凍狀，或有棒數(shù)樣覆蓋物。前兩種腸內(nèi)容物中可觀察到大量卵囊，后者中卵囊極少，屬于后期病變（見圖2、圖3）。

圖2 感染后出現(xiàn)的腸臌氣

圖3 腸內(nèi)容物抹片可見不成熟的卵囊

2.5 病理組織學變化

（1）十二指腸：各組均未見蟲體寄生。（2）空腸：各感染組的蟲體寄生都很少。（3）回腸：是大型艾美爾球蟲寄生的主要部位，感染組除Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組病理組織學變化不明顯外，其余感染組均表現(xiàn)明顯的病理組織學變化。觀察到從接種80h后微絨毛萎縮，回腸微絨毛變?yōu)槿~狀，不感染對照組為指狀或舌狀。更多的微絨毛和整個粘膜嚴重的腫脹。上皮細胞脫落和微絨毛變的不規(guī)則、加厚、變矮，接種132h在空腸、回腸腺上皮細胞、回腸絨毛中部上皮細胞及絨毛頂端上皮細胞出現(xiàn)2種類型的裂殖體及釋放出的裂殖子（圖4）；在接種206h，在空腸和回腸的上皮細胞中可觀察到卵囊（圖5）。

圖4 回腸絨毛上皮細胞出現(xiàn)2種類型的裂殖體

圖5 回腸上皮細胞中的卵囊

3 討論

3.1 感染腸艾美耳球蟲卵囊引起的部分臨床癥狀家兔被感染時常見拉稀，估計跟腸道的吸收和消化功能受損有關系。Ⅲ組6～8天時所見糞便軟，小且黑紅，這是含血的緣故。

3.2 從表1可見體重下降都是從第4天開始，可能是第二代裂殖子破壞上皮細胞所致。

3.3 從表2可知高劑量感染情況下卵囊排出的早。3.4病理剖檢的變化與組織切片結果吻合

3.5 組織切片上見到的壞死物質(zhì)，可能是球蟲所產(chǎn)生的毒素導致的。

4 結論

通過臨床癥狀、體重、卵囊產(chǎn)量的變化及光鏡對感染無球蟲兔的致病性觀察，除對照組外，每組在第6天，均出現(xiàn)臨床癥狀，感染后8，9，10天最為明顯，第9天出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。

組織學病變發(fā)生于空腸后部向下延及回腸至回盲口。腸艾美耳球蟲具有強致病性。

[1]楊森華，張曉林主編.肉用野味珍禽養(yǎng)殖[M].北京:科學技術出版社，1994.

[2]左仰賢主編.球蟲學：家禽和人體的球蟲與球蟲病[M].天津:天津出版社，1991.

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