八角楓莖中的新齊敦果烷型三萜成分*

馬啟珍，楊亞南，蔣少青，劉 信，尹 勝，唐貴華

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院藥劑科，寧夏銀川750004;2.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州510006)

八角楓 Alangium chinense(Lour.)Harms 隸屬八角楓科Alangiaceae八角楓屬Alangium植物，在我國(guó)主要分布于長(zhǎng)江流域及以南各地，生長(zhǎng)于海拔2500 m以下的森林、林緣或疏林中［1］。其根、葉及花均可入藥，在民間有祛風(fēng)、理氣、通絡(luò)、散瘀、鎮(zhèn)痛等功效［2］。目前關(guān)于八角楓的化學(xué)成分研究主要集中在根和葉上，對(duì)八角楓的莖研究較少。前期研究發(fā)現(xiàn)八角楓的根和葉主要含有酚苷、生物堿、倍半萜等成分［3－8］。為了挖掘傳統(tǒng)中藥材的活性成分，開(kāi)展了八角楓莖的乙醇提取物的化學(xué)成分研究，從中分離鑒定了2個(gè)新的齊敦果烷型三萜(1和2)和2個(gè)已知化合物(3和4)，見(jiàn)圖1。本文報(bào)道新化合物分離及結(jié)構(gòu)鑒定。

1 結(jié)果與討論

1.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

圖1 從八角楓莖中分離鑒定的4個(gè)化合物結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1，2，3，4 from the stems of Alangium chinense

化合物1，白色無(wú)定形粉末。根據(jù)高分辨ESI質(zhì)譜數(shù)據(jù)并結(jié)合其13C NMR數(shù)據(jù)推斷出化合物的分子式為C48H60O9，不飽和度為19。其IR圖譜所示的吸收值3315，1689，1631，1604，1515 cm－1表明有羥基、羰基、雙鍵和苯環(huán)等官能團(tuán)存在?；衔?的1D NMR數(shù)據(jù) (表1)顯示的信號(hào)表明結(jié)構(gòu)中存在1個(gè)反式對(duì)羥基桂皮?；郐腍7.58(1H，d，J=15.9 Hz)，7.43(2H，d，J=8.3 Hz)，6.80(2H，d，J=8.3 Hz)和6.30(1H，d，J=15.9 Hz);δC168.76，161.1，146.5，131.2(C × 2)，127.2，116.8(C×2)和115.5］，1個(gè)反式咖啡?；郐腍7.55(1H，d，J=15.9 Hz)，7.04(1H，s)，6.91(2H，d，J=8.0 Hz)，6.77(1H，d，J=8.0 Hz)和 6.25(1H，d，J=15.9 Hz);δC168.83，149.6，147.1，146.8，127.7，123.0，116.5，115.3和115.0］，6個(gè)單峰甲基［δH1.13(3H，s)，1.02(3H，s)，0.97(3H，s)，0.93(3H，s)，0.89(3H，s)和 0.89(3H，s)］，1個(gè)羥甲基［δH4.08(1H，d，J=11.6 Hz)和3.84(1H，d，J=11.6 Hz);δC66.6］，1個(gè)羧酸羰基［δC182.1］，1個(gè)三取代的雙鍵［δH5.23(1H，br.s);δC145.3和123.4］，1個(gè)連氧次甲基［δH4.96(1H，t，J=7.7 Hz);δC76.2］，10個(gè)sp3雜化的亞甲基，3個(gè)sp3雜化的次甲基和6個(gè)sp3雜化的季碳。根據(jù)以上的信息分析，推測(cè)化合物應(yīng)該是一個(gè)連有1個(gè)對(duì)羥基桂皮?；?個(gè)咖啡酰基的五環(huán)三萜類成分。又與從該種分離得到的已知齊敦果烷型三萜成分 (3)的NMR數(shù)據(jù)比較，發(fā)現(xiàn)化合物1的結(jié)構(gòu)與其非常類似，其主要不同點(diǎn)在于化合物1的3位羥基被一個(gè)咖啡酰基所取代，并由H－3與C－9'的HMBC相關(guān)得到確證。分析化合物1的1H－1H COSY和HMBC相關(guān) (圖2)確定化合物1的其它結(jié)構(gòu)片段與3一樣。另外，通過(guò)比較1D NMR數(shù)據(jù)和ROESY相關(guān)確定化合物1的相對(duì)構(gòu)型與3一致，如圖1所示。由此，化合物1的結(jié)構(gòu)鑒定為(3E，23E)-3-caffeoyl-23-coumaroylhederagenin(1)。

圖2 化合物1的關(guān)鍵1H－1H COSY和HMBC相關(guān)Fig.2 Key1H－1H COSY and HMBC correlations of compound 1

化合物2，白色無(wú)定形粉末。其高分辨ESI質(zhì)譜數(shù)據(jù)顯示化合物2的相對(duì)分子質(zhì)量比1少16，推出分子式為C48H60O8，提示該化合物比1少了1個(gè)氧原子。比較它們的NMR數(shù)據(jù) (表1)發(fā)現(xiàn)2與1非常相似，差異僅存在3位的取代基上。化合物2出現(xiàn)的2個(gè)反式對(duì)羥基桂皮?；男盘?hào)并結(jié)合解析其HMBC相關(guān)推斷2的3位和23位的取代基均為反式桂皮酰基。化合物2的相對(duì)構(gòu)型由ROESY和1D NMR數(shù)據(jù)分析確定與1一致。因此，化合物2的結(jié)構(gòu)鑒定為 (3E，23E)-dicoumaroylhederagenin(2)。

通過(guò)比較文獻(xiàn)報(bào)道的核磁數(shù)據(jù)，已知化合物3和4的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［9］基本一致，因而確定它們的結(jié)構(gòu)分別為 (23E)-coumaroylhederagenin和(23Z)-coumaroylhederagenin。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 材料與儀器

Bruker-AvanceIII-400核磁共振儀 (TMS內(nèi)標(biāo));Bruker Tensor 37紅外光譜儀;AutopolⅠ旋光儀;Finnigan LCQ Deca液質(zhì)聯(lián)用儀;Micromass QTOF液質(zhì)譜聯(lián)用儀;島津高效液相色譜儀 (LC-20AT，PDA SPD-M20A檢測(cè)器);EYELA N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;循環(huán)水多用真空泵;超聲波清洗儀;暗箱紫外分析儀;RP-C18硅膠 (日本YMC);YMC液相色譜柱 (250×10 mm，S-5 μm，12 nm);菲羅門(mén)液相色譜柱 (Phenomenex Lux，cellulose-2，250×10 mm，5 μm);Sephadex LH-20(美國(guó) GE 公司);TLC硅膠板 (GF254)和柱層析硅膠 (100～200，300～400目)(青島海洋化工)。

分析純?cè)噭?甲醇、無(wú)水乙醇、φ=95%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷和石油醚;HPLC色譜級(jí)試劑:甲醇和乙腈;氘代試劑:氘代甲醇。

表1 化合物1和2的氫譜 (400 Hz)及碳譜 (100 Hz)數(shù)據(jù) (Methanol-d4溶劑)Table 11H NMR(400 Hz)and13C NMR(100 Hz)data of compounds 1 and 2(in Methanol-d4)

植物材料購(gòu)自云南大理，經(jīng)由中山大學(xué)唐貴華博士鑒定為八角楓 Alangium chinense(Lour.)Harms的莖。憑證標(biāo)本 (No.BJF2012001)存于中山大學(xué)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

2.2 提取與分離

干燥的八角楓莖 (2.0 kg)粉碎后用φ=95%乙醇超聲提取3次 (3 L×3)，每次2 h，合并乙醇提取液減壓濃縮得到粗提浸膏。浸膏用水懸浮后分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中乙酸乙酯萃取部位 (4.1 g)經(jīng)過(guò)正相硅膠柱 (100～200目)，洗脫體系為二氯甲烷/甲醇(V(二氯甲烷)∶V(甲醇)為 80∶1，60∶1，20∶1，10∶1，5∶1，0∶1)，得到5個(gè)組分(Fr.Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ)。組分 Fr.Ⅲ再經(jīng)過(guò)反相RP-C18柱(洗脫體系甲醇水，φ(甲醇)為50% ～100%)得到3個(gè)組分(Fr.Ⅲa，Ⅲb，Ⅲc)。其中組分Fr.Ⅲb經(jīng)過(guò)反復(fù)的正相硅膠(300～400目)和半制備HPLC純化獲得化合物1(17 mg)，2(70 mg)，3(4 mg)和4(9 mg)。

3 物理常數(shù)及波譜數(shù)據(jù)

化合物1，白色無(wú)定形粉末。 ［α］20D+92(c 0.1);UV(MeOH)λmax/nm(log ε):315(4.52)，221(4.35)，207(4.36);IR(KBr)νmax/cm－1:3315，2945，1689，1631，1604，1515，1444，1384，1362，1264，1203，1169;1H NMR 和13C NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表 1;ESIMS m/z 803［M+Na］+;HRESIMS m/z 803.4129 ［M+Na］+(C48H60O9Na，計(jì)算值為803.4135)。

化合物2，白色無(wú)定形粉末。 ［α］20D+148(c 0.1);UV(MeOH)λmax/nm(log ε)314(4.64)，229(4.27);IR(KBr)νmax/cm－1:3294，2947，1689，1632，1604，1514，1441，1384，1364，1307，1203，1169;1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表1;ESIMS m/z 787 ［M+Na］+;HRESIMS m/z 787.4181［M+Na］+(C48H60O8Na，計(jì)算值為787.4186)。

化合物3，白色無(wú)定形粉末。ESIMS m/z 641［M+Na］+;1H NMR(400 MHz，Methanol-d4)δ:7.63(d，J=15.9 Hz，1H)，7.45(d，J=8.6 Hz，2H)，6.82(d，J=8.6 Hz，2H)，6.34(d，J=15.9 Hz，1H)，5.24(d，J=3.6 Hz，1H)，4.12(d，J=11.3 Hz，1H)，4.03(d，J=11.3 Hz，1H)，3.62(dd，J=11.5，4.7 Hz，1H)，2.84(dd，J=14.0，4.6 Hz，1H)，1.10(s，3H)，0.99(s，3H)，0.93(s，3H)，0.90(s，3H)，0.82(s，3H)，0.78(s，3H);13C NMR(Methanol-d4，100 MHz)δ:181.8(C)，169.0(C)，161.3(C)，146.5(CH)，145.2(C)，131.2(CH× 2)，127.1(C)，123.6(CH)，116.9(CH ×2)，115.2(CH)，72.8(CH)，66.7(CH2)，49.4(CH)，49.1(CH)，47.6(C)，47.2(CH2)，43.2(C)，42.9(C)，42.7(CH)，40.6(C)，39.7(CH2)，38.0(C)，34.9(CH2)，33.8(CH2)，33.7(CH2)，33.6(CH3)，31.6(C)，28.8(CH2)，27.4(CH2)，26.4(CH3)，24.5(CH2)，24.03(CH2)，23.99(CH3)，19.3(CH2)，17.7(CH3)，16.3(CH3)，12.8(CH3)。

化合物4，白色無(wú)定形粉末。ESIMS m/z 641［M+Na］+;1H NMR(400 MHz，Methanol-d4)δ:7.55(d，J=8.6 Hz，2H)，6.89(d，J=12.8 Hz，1H)，6.76(d，J=8.6 Hz，1H)，5.79(d，J=12.7 Hz，1H)，5.21(t，J=3.2 Hz，1H)，4.05(d，J=11.4 Hz，1H)，3.99(d，J=11.4 Hz，1H)，3.45(dd，J=11.6，4.6 Hz，1H)，2.83(dd，J=14.0，4.6 Hz，1H)，1.00(s，3H)，0.938(s，3H)，0.935(s，3H)，0.91(s，3H)，0.77(s，3H)，0.73(s，3H)。

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