M uc15基因在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素之間的關(guān)系

楊國(guó)棟 趙樂(lè)▲

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，洛陽(yáng)471003

M uc15基因在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素之間的關(guān)系

楊國(guó)棟 趙樂(lè)▲

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，洛陽(yáng)471003

目的檢測(cè)Muc15基因在卵巢癌組織中的表達(dá)情況及其在卵巢癌組織發(fā)生、發(fā)展中所起的作用。方法應(yīng)用Western blot、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)本院2012年9月～2014年3月收治的65例正常卵巢組織、30例良性卵巢腫瘤組織及65例卵巢癌組織中Muc15蛋白相對(duì)表達(dá)量及mRNA相對(duì)表達(dá)量，分析其在三種組織中表達(dá)的差異。結(jié)果Muc15蛋白相對(duì)表達(dá)量、mRNA相對(duì)表達(dá)量在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織及卵巢癌組織中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Muc15蛋白相對(duì)表達(dá)量、mRNA相對(duì)表達(dá)量在臨床分期為0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌組織中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Muc15蛋白相對(duì)表達(dá)量、mRNA相對(duì)表達(dá)量在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組的卵巢癌組織中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Muc15蛋白相對(duì)表達(dá)量、mRNA相對(duì)表達(dá)量在不同年齡和腫瘤直徑卵巢癌組織中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論Muc15基因在卵巢癌組織中的表達(dá)量升高，其高表達(dá)水平可能與卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。

Muc15基因；卵巢癌；W estern blot；RT-PCR

黏蛋白是一類由黏膜組織產(chǎn)生的糖蛋白，具有多種生物學(xué)功能[1]。從結(jié)構(gòu)和功能上分為分泌型和跨膜型兩型，Muc15是跨膜型黏蛋白中的一種[2]。近年來(lái)對(duì)Muc15的研究逐漸成為熱點(diǎn)[3-6]，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，Muc15在食管癌、直腸癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中出現(xiàn)高表達(dá)，但是Muc15在卵巢癌中的表達(dá)還未見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)檢測(cè)Muc15在卵巢癌中的表達(dá)，探討其與卵巢癌臨床病理因素的關(guān)系，以期有助于卵巢癌發(fā)病機(jī)制及診斷治療的后續(xù)研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院2012年9月～2014年3月手術(shù)切除卵巢癌新鮮組織標(biāo)本65例，年齡43～68歲，中位年齡56.4歲；組織學(xué)分期Ⅰ期16例、Ⅱ期21例、Ⅲ期28例；有淋巴轉(zhuǎn)移者39例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者26例。另同時(shí)收集卵巢良性腫瘤30例及正常卵巢組織65例，所有患者術(shù)前均未接受過(guò)放療和化療及等其他治療，均經(jīng)病理證實(shí)。

1.2 方法

1.2.1 卵巢組織Muc15 Wes ter n b l o t檢測(cè)①蛋白提?。簭囊旱腥∵m量組織標(biāo)本于勻漿器中，按照蛋白提取試劑盒的說(shuō)明提取蛋白，BCA法測(cè)定其蛋白濃度。②電泳：取蛋白60μg及等量上樣緩沖液95℃5min后冷卻上樣，進(jìn)行電泳。③轉(zhuǎn)膜及封閉：經(jīng)10% SDS-PAGE凝膠電泳后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，加封閉液及一抗（1︰500稀釋）4℃過(guò)夜，TBST洗滌4次，10 min/次，將膜與HRP標(biāo)記的二抗（1︰5000稀釋）室溫孵育2 h，TBST洗滌4次，10 min/次。④蛋白檢測(cè)：將顯影液加到膜上，曝光顯影，用Band Scan圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。

1.2.2 卵巢組織Muc15 RNA提取及RT-PCR①總RNA的提取：嚴(yán)格按照RNA提取試劑盒的操作步驟提取總RNA。②cDNA的制備：二步法PCR試劑盒逆轉(zhuǎn)錄cDNA。③RT-PCR方法：擴(kuò)增Muc15mRNA，反應(yīng)結(jié)束后，取5μl產(chǎn)物進(jìn)行電泳，用圖像分析軟件進(jìn)行灰度掃描，Muc15與內(nèi)參的PCR灰度值之比為mRNA水平的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)或方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Muc15基因的蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較

Muc15在正常卵巢組織、良性卵巢組織中的蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯低于卵巢癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.152、2.106，P<0.05）；Muc15mRNA在卵巢癌組織中的相對(duì)表達(dá)量高于良性卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.230、2.146，P<0.05）（圖1、表1）。

圖1 Muc15基因Western blot的表達(dá)情況

表1 各組Muc15基因的蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表1 各組Muc15基因的蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

組別n Muc15的蛋白相對(duì)表達(dá)量Muc15mRNA相對(duì)表達(dá)量正常卵巢組織良性卵巢腫瘤組織癌組織P值65 30 65 0.195±0.035 0.351±0.027 0.769±0.030＜0.05 0.236±0.023 0.363±0.021 0.786±0.027＜0.05

2.2 不同臨床病理因素卵巢癌組織中M uc15蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較

Muc15蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量在臨床分期0～Ⅱ期中明顯高于Ⅲ～Ⅳ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移組的Muc15蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；不同年齡、腫瘤直徑卵巢癌組織中Muc15蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。

表2 不同臨床病理因素卵巢癌組織中Muc15蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表2 不同臨床病理因素卵巢癌組織中Muc15蛋白及mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

臨床病理因素n Muc15的蛋白相對(duì)表達(dá)量Muc15 mRNA相對(duì)表達(dá)量年齡（歲）≥60＜60 P值腫瘤直徑（cm）≥5＜5 P值臨床分期0～ⅡⅢ～ⅣP值淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34 31 0.746±0.038 0.752±0.042＞0.05 0.796±0.026 0.748±0.031＞0.05 42 23 0.768±0.040 0.739±0.029＞0.05 0.782±0.028 0.770±0.036＞0.05 32 33 0.759±0.041 0.535±0.037 <0.05 0.789±0.032 0.525±0.021 <0.05有無(wú)P值51 14 0.769±0.034 0.510±0.035 <0.05 0.791±0.027 0.436±0.022 <0.05

3 討論

黏蛋白家族的成員以其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)保護(hù)黏膜免受外界有害物質(zhì)的侵犯，同時(shí)參與上皮細(xì)胞的更新和分化，細(xì)胞間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[7]。Muc15作為黏蛋白家族的一員，具有共同的結(jié)構(gòu)，自Pallesen等在2002年發(fā)現(xiàn)以來(lái)，其已被證實(shí)在結(jié)食管癌、直腸癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤組織中高表達(dá)，并且促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[8-9]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Western blot、RT-PCR的方法檢測(cè)Muc15在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織及卵巢癌組織中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織中Muc15表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但在卵巢癌組織中Muc15的表達(dá)明顯增高，提示Muc15基因促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，Muc15基因的激活可能導(dǎo)致卵巢癌的發(fā)生，這與相關(guān)研究結(jié)果相似[10]。Huang等[11-13]在結(jié)直腸癌中的研究表明，結(jié)直腸癌中Muc15 mRNA的表達(dá)及免疫組化陽(yáng)性率明顯高于正常結(jié)直腸組織；同時(shí)Muc15基因的過(guò)度高表達(dá)可激活ERK-MAPK通道，從而增加結(jié)腸癌細(xì)胞的致癌能力。Shyu等[12，14-15]研究發(fā)現(xiàn)，Muc15在人類胎盤組織中呈高表達(dá)，從而抑制滋養(yǎng)細(xì)胞沿體外入侵。

本研究發(fā)現(xiàn)，不同臨床分期的卵巢癌組織標(biāo)本中Muc15的表達(dá)水平有差異；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織標(biāo)本表達(dá)水平明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織標(biāo)本，說(shuō)明Muc15基因不僅參與卵巢癌的發(fā)生，而且與卵巢癌的發(fā)展有一定關(guān)系。

綜上所述，Muc15在卵巢癌組織中的表達(dá)升高，其高表達(dá)可能與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但是Muc15在卵巢癌組織中的作用機(jī)制，還需進(jìn)一步的后續(xù)研究。

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Expression of M uc15 gene in ovarian cancer tissue and its relationship w ith clinical pathological factor

YANG Guo-dong ZHAO Le▲
The First Affiliated Hospital of Henna University of Science and Technology,Luoyang 471003,China

Objective To investigate the status of Muc15 expression in human ovarian cancer and its association with the carcinogenesis and development of ovarian cancer.M ethods The expression of Muc15 protein and mRNA in sixty five ovarian normal tissues,thirty benign ovarian cancer tissues and sixty five ovarian cancer tissues in our hospital from September 2012 to March 2014 were evaluated by using Western blot,RT-PCR,and then the expression difference among three groupswas analyzed.Results There were significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA among ovarian cancer tissues,ovarian normal tissues and benign ovarian cancer tissues(P<0.05).Therewere significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA between clinical stage 0-ⅡandⅢ-Ⅳof ovarian cancer(P<0.05).There were significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA between lymph node metastasis and without lymph nodemetastasis of ovarian cancer(P<0.05).There were no significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA at different age and different tumor size of ovarian cancer(P＞0.05).Conclusion The expression of Muc15 is higher in ovarian cancer tissue compared to normal ovarian tissue and benign ovarian cancer tissue,whichmay contribute to carcinogenesis and development of ovarian cancer.

Muc15 gene;Ovarian cancer;Western blot;RT-PCR

R737.31

A

1674-4721（2015）04（c）-0063-03

2015-02-05本文編輯：李亞聰）

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趙樂(lè)，女，碩士，醫(yī)師，主要研究方向：腫瘤病理