HPLC法測(cè)定四逆清帶口服液中芍藥苷的含量

樊建霜，王家員，林方芬，岳顯可

HPLC法測(cè)定四逆清帶口服液中芍藥苷的含量

樊建霜1，王家員1，林方芬1，岳顯可2*

目的 建立HPLC法測(cè)定四逆清帶口服液中芍藥苷的含量。方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫25 ℃。結(jié)果 芍藥苷進(jìn)樣量在0.31～93.00 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(R2=0.999 9)，平均回收率為98.67(RSD%=1.19，n=6)。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性良好，可用于四逆清帶口服液中芍藥苷的質(zhì)量控制。

四逆清帶口服液；HPLC；芍藥苷

0 引言

四逆清帶口服液由四逆清帶湯改劑型而來，由柴胡、白芍、枳實(shí)、甘草、蒲公英、紅藤、敗醬草、大薊、小薊、椿根皮、綿萆薢、土茯苓、半枝蓮各按一定量配伍而成。四逆清帶湯是溫州市中醫(yī)院國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)馬大正主任醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)方，主治慢性盆腔炎的輕癥。該方由四逆散(柴胡、枳殼、白芍、甘草)加味而成。具有透邪解郁、疏肝理氣之功[1-2]。大薊、小薊、敗醬草、紅藤、半枝蓮、蒲公英具有清熱解毒、消癰排毒之功。土茯苓、椿皮、萆薢具有清熱、利濕、去濁之功。諸藥合用共奏疏調(diào)氣機(jī)、清理濕熱之效[3]，氣機(jī)暢，濕熱清，故氣阻濕熱型慢性盆腔炎得以治。且該方由溫州市中醫(yī)院馬大正主任醫(yī)師沿用數(shù)十年，療效確切，能治愈、緩解慢性盆腔炎癥狀，值得推廣使用。目前臨床上僅有其湯劑，而口服液具有濃度高、體積小、便于服用、攜帶及貯藏的優(yōu)點(diǎn)，故將本方制備成口服液，本研究為四逆清帶口服液質(zhì)量控制提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Ultimate3000型高效液相色譜儀(美國(guó)戴安公司)。梅特勒XS-105電子分析天平(0.01 mg，METTLER TOLEDO，Switzerland)，KS-80中草藥粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；R-201恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司)。

四逆清帶口服液由溫州市中醫(yī)院制劑室制備提供(批號(hào)：131201、131202、131203)。芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)：110736-201136)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱；乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫：25 ℃；流速：1 mL/min。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000，重復(fù)性、分離度、托尾因子及保留時(shí)間如表1所示。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品12.4 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液的制備 取四逆清帶口服液0.5 mL，于10 mL容量瓶中，加5 mL甲醇超聲30 min，超聲頻率40 Hz。放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取適量溶液至離心管中，于12 000 r/min條件下離心10 min后，過濾，取濾液，即得。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

2.4 線性關(guān)系考察 取芍藥苷儲(chǔ)備液依次稀釋成濃度為0.31、1.55、15.50、62.00、93.00 μg/mL的線性系列溶液，分別精密吸取5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液各10 μL進(jìn)行測(cè)定。以待測(cè)物濃度(X)為橫坐標(biāo)、待測(cè)物峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，采用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=6.773 7 X+1.626 7，R2=0.999 9。結(jié)果表明，芍藥苷在0.31～93.00 μg/mL范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度考察 取“2.4”項(xiàng)中62.00 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按以上色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.51%(n=6)。

2.6 回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批均勻的四逆清帶口服液(批號(hào)：131201)，精密量取0.5 mL，置10 mL容量瓶中，平均量取6份，分別精密加入濃度為93.00 μg/mL的對(duì)照品溶液1 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2，平均回收率為98.67%，RSD為1.19%(n=6)。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批均勻的四逆清帶口服液(批號(hào)：131201)，精密量取0.5 mL，共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行分析。芍藥苷含量RSD為(n=6)。

表3 供試品重復(fù)性考察結(jié)果

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批均勻的四逆清帶口服液(批號(hào)：131201)，精密量取0.5 mL，照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，在0、6、12、18、24、30 h進(jìn)行測(cè)定。芍藥苷峰面積的RSD為1.23%(n=6)。

表4 供試品穩(wěn)定性考察(h)

2.9 樣品測(cè)定 取3批樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定芍藥苷含量，色譜圖見圖1。結(jié)果3批樣品(131201、131202、131203)中芍藥苷的含量分別為84.32、75.61、86.84 μg/mL。故以每支口服液10 mL計(jì)，含芍藥苷總量分別為16.86、15.12、17.37 mg。

圖1 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品與口服液樣品芍藥苷色譜圖

3 討論

3.1 本試驗(yàn)以甲醇為溶劑對(duì)口服液樣品進(jìn)行再處理，芍藥苷能得到很好的轉(zhuǎn)移，且供試品在該色譜條件下，分離度好，靈敏度高，為控制四逆清帶口服液的質(zhì)量提供了一種較好的分析手段[4]。

3.2 四逆清帶湯是治療濕熱型慢性盆腔炎的臨床經(jīng)驗(yàn)方，因其療效確切，值得推廣使用，故將本方制備成口服液。組方中的白芍是四逆清帶口服液中的主要味藥，芍藥苷也是口服液的主要功效成分，故以芍藥苷作為質(zhì)量控制指標(biāo)[5]。

[1] 暢洪昇,王慶國(guó),關(guān)玲.中藥抗抑郁復(fù)方分析和證治規(guī)律研究[J].中國(guó)民間療法,2004,12(2):60-62.

[2] 盧嫏環(huán),肖勇,丁舸.試論四逆散之核心藥組的合理性[J].光明中醫(yī),2013,28(9):1768-1769.

[3] 馬大正.馬大正中醫(yī)婦科醫(yī)論醫(yī)案集[M].北京:中醫(yī)古籍出版社,2006:1.

[4] 張穎,王偉麗,朱明偉.高效液相色譜法測(cè)定丹參益坤口服液中芍藥苷含量[J].中國(guó)藥業(yè),2012,23(21):15-16.

[5] 涂鳳蓮.四逆散中芍藥苷含量的HPLC法測(cè)定[J].中外健康文摘,2011,8(13):405-406.

Determination of paeoniflroin in Sini Qingdai oral liquid by HPLC

FAN Jian-shuang1,WANG Jia-yuan1,LIN Fang-fen1,YUE Xian-ke2*

(1.Wenzhou Hospital of TCM,Wenzhou 325007,China;2.Zhejiang Chinese Medical University Chinese Medicine Yinpian Co.,Ltd.,Hangzhou 311400,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of paeoniflroin in Sini Qingdai oral solutions.Methods The analysis was performed on a Agilent Eclipse XDB-C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm) with a mobile phase of Acetonitrile-0.1%Phosphoric acid solution(14∶86).The flow rate was 1.0 mL/min.The column temperature was 25 ℃.The detection wavelength was 230 nm.Results The calibration curve of paeoniflroin was liner within the range of 0.31～93.00 μg/mL(R2=0.999 9).The average recovery rate was 98.67%(RSD%=1.19,n=6).Conclusion The method is accurate,simple,sensitive and reproducible.It can be used as the quality control method for Sini Qingdai oral solutions.

Sini Qingdai oral solutions;HPLC;Paeoniflroin

2014-09-02

1.溫州市中醫(yī)院，溫州 325007；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司，杭州 311400

溫州市醫(yī)藥衛(wèi)生科研項(xiàng)目(2012ZA006)

10.14053/j.cnki.ppcr.201503017

*通信作者