紅景天苷在急性壞死性胰腺炎缺血病理過(guò)程中的作用研究

李杰清，牛桂芬，孫健波

紅景天苷在急性壞死性胰腺炎缺血病理過(guò)程中的作用研究

李杰清，牛桂芬，孫健波

目的 通過(guò)觀(guān)察大鼠胰腺缺血模型中紅景天苷的作用，探討紅景天苷對(duì)胰腺炎缺血改變的機(jī)制。方法 200只Wistar大鼠隨機(jī)分為3組，假手術(shù)組(50只)、對(duì)照組(75只)及試驗(yàn)組(75只)，通過(guò)血管阻斷方法建立胰腺缺血模型。假手術(shù)組行開(kāi)腹關(guān)腹手術(shù),對(duì)照組建立大鼠胰腺急性缺血模型，試驗(yàn)組建立缺血模型后給予靜脈注射紅景天苷。檢測(cè)各組血淀粉酶、血栓烷素B2(TXB2)、白細(xì)胞介素8(IL-8)的水平。結(jié)果 大鼠缺血模型建成后，試驗(yàn)組4 h血淀粉酶水平開(kāi)始下降，在8 h及12 h時(shí)點(diǎn)與對(duì)照組對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在8 h及12 h時(shí)點(diǎn)，試驗(yàn)組TXB2水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組12 h內(nèi)TXB2水平呈現(xiàn)持續(xù)升高趨勢(shì)，試驗(yàn)組4 h后TXB2呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，與對(duì)照組對(duì)比，在12 h時(shí)點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)照組12 h內(nèi)IL-8水平持續(xù)升高，試驗(yàn)組在12 h時(shí)點(diǎn)開(kāi)始下降，與對(duì)照組對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 中藥紅景天苷對(duì)大鼠ANP缺血損傷有明顯改善作用，能夠降低炎性因子及胰酶水平。

紅景天苷；急性壞死性胰腺炎；血栓烷素B2；白細(xì)胞介素8

0 引言

急性壞死性胰腺炎(Acute necrotizing pancreatitis,ANP) 發(fā)病兇險(xiǎn)，病情進(jìn)展迅速，其發(fā)病病理學(xué)基礎(chǔ)是胰酶在胰腺內(nèi)激活后誘發(fā)胰腺組織的自身消化，導(dǎo)致水腫、出血及壞死等炎癥反應(yīng)[1]。由于A(yíng)NP過(guò)程中炎癥因子的釋放，導(dǎo)致患者心臟、肺、腎臟等多器官的損害，死亡率可達(dá)20%～25%[2-3]。對(duì)ANP發(fā)病機(jī)制及治療研究的焦點(diǎn)集中在改善缺血胰腺血運(yùn)及毒素清除方面。紅景天苷提取自紅景天根莖，具有抗氧化、改善微血管循環(huán)、提高氧自由基活性等藥理作用[4]，臨床目前應(yīng)用于心腦血管病及腫瘤治療方面，在胰腺炎中的研究較少，但有研究報(bào)道紅景天對(duì)急性重癥胰腺炎腎損傷中具有保護(hù)作用。本研究采用動(dòng)物試驗(yàn)，建立大鼠急性重癥胰腺炎模型，觀(guān)察紅景天苷在改善胰腺血運(yùn)、降低胰酶活化物水平的相關(guān)作用，探討其機(jī)制，并指導(dǎo)臨床用藥。

1 材料和方法

1.1 儀器及試劑 超微量分光光度計(jì)(NanoPhotometer Pearl)(德國(guó)Implen)、125I-血栓烷素B2(TXB2)放射免疫分析試劑盒購(gòu)自南京凱基生物公司、125I-白細(xì)胞介素8放射免疫分析試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。紅景天苷采用微波破壁法自高山紅景天根莖提取(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供)。

1.2 研究方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 雄性Wistar大鼠(購(gòu)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)200只，體重(243.2±7.4)g，隨機(jī)分為3組，假手術(shù)組(50只)、對(duì)照組(75只)及試驗(yàn)組(75只)。假手術(shù)組行開(kāi)腹手術(shù)，顯露胰腺及腹主動(dòng)脈，對(duì)照組及試驗(yàn)組通過(guò)血管阻斷方法建立胰腺缺血模型。

1.2.2 大鼠胰腺缺血模型的建立 麻醉采用乙醚吸入，麻醉成功后取腹部正中切口開(kāi)腹，顯露胰腺及腹主動(dòng)脈，血管夾完全阻斷腹腔干起始處，阻斷時(shí)間為10 min，胰腺出現(xiàn)充血、水腫、出血及壞死等改變后打開(kāi)血管夾，即建成大鼠胰腺缺血模型[4]。

1.2.3 研究方法 缺血模型建立成功45 min后給予試驗(yàn)組大鼠靜脈注射中藥紅景天苷4.5 mg/kg，對(duì)照組及假手術(shù)組分別靜脈給予生理鹽水4.5 mg/kg，各組在恢復(fù)胰腺血運(yùn)0、2、4、8、12 h各時(shí)點(diǎn)采用斷頸法分批處死大鼠,采靜脈血測(cè)血淀粉酶、TXB2、IL-8水平。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)及測(cè)定方法

1.3.1 血清淀粉酶的測(cè)定 取靜脈血2 mL，應(yīng)用超微量分光光度計(jì)，采用淀粉酶快速比色法測(cè)血清淀粉酶含量。

1.3.2 血漿TXB2及IL-8測(cè)定 取靜脈血2 mL，加消炎痛-EDTA-Na2液0.1 mL，4 ℃離心分離血漿，采用放射免疫分析方法測(cè)血漿TXB2及IL-8水平。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血淀粉酶的變化 大鼠缺血模型建成后，血清中淀粉酶含量開(kāi)始升高，0 h及2 h時(shí)點(diǎn)三組間淀粉酶水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在2～4 h對(duì)照組血淀粉酶水平繼續(xù)升高，4 h達(dá)到高峰，與試驗(yàn)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；試驗(yàn)組4 h血淀粉酶水平開(kāi)始下降，在8 h及12 h時(shí)點(diǎn)與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組不同時(shí)點(diǎn)血淀粉酶比較(U/L)

注：*與對(duì)照組比較，P<0.01

2.2 血漿TXB2含量的變化 與假手術(shù)組比較，建模2 h后，對(duì)照組及試驗(yàn)組血漿中TXB2的含量均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，0 h、2 h及4 h時(shí)點(diǎn)對(duì)照組TXB2水平與試驗(yàn)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在8 h及12 h時(shí)點(diǎn)，試驗(yàn)組TXB2水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組12 h內(nèi)TXB2水平呈現(xiàn)持續(xù)升高趨勢(shì)，試驗(yàn)組4 h后TXB2呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，見(jiàn)表2。

表2 不同時(shí)間各組TXB2值比較(pg/mL)

注：*與對(duì)照組比較，P<0.05

2.3 血漿IL-8含量的變化 在0、2、4、8 h各時(shí)點(diǎn)，對(duì)照組及試驗(yàn)組血漿IL-8與假手術(shù)組比較，均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組與試驗(yàn)組比較，在12 h時(shí)點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)組低于對(duì)照組。對(duì)照組12 h內(nèi)IL-8水平持續(xù)升高，試驗(yàn)組在12 h時(shí)點(diǎn)開(kāi)始下降，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 再灌注不同時(shí)間各組IL-8比較(pg/mL)

注：*與對(duì)照組比較，P<0.05

3 討論

ANP病程進(jìn)展迅速，病死率高，有研究認(rèn)為，微循環(huán)障礙及毛細(xì)血管通透性改變?cè)贏(yíng)NP發(fā)病過(guò)程中起到重要作用[5]，其病理過(guò)程的后果是胰腺自身消化，胰酶及炎性因子釋放，導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)的一系列綜合征[6-8]。血淀粉酶是診斷胰腺炎的最主要指標(biāo)，血淀粉酶升高是由于主胰管阻塞或微胰管阻塞反流入血，微血管灌注障礙也是血淀粉酶升高的主要原因[9]。血淀粉酶入血后導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)及胰腺自身消化破壞，進(jìn)而誘發(fā)環(huán)氧化酶通過(guò)TXA2和PGI2合成酶激活TXA2、PGI2大量釋放[10]。TXA2激活后導(dǎo)致血管痙攣加重，微小血栓形成加速，導(dǎo)致胰腺進(jìn)入充血壞死階段。紅景天苷(Salidroside)是中醫(yī)臨床上的常用中藥，具有活血祛疲，通經(jīng)止痛的功效。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)中藥紅景天苷在心、肝、肺、腦等多種組織器官的缺血再灌注損傷中的作用做了大量的研究[11-12]。但對(duì)于紅景天能否減輕急性胰腺炎腎臟的缺血損傷尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究顯示，大鼠缺血模型建成后，血清中淀粉酶含量開(kāi)始升高，2 h之內(nèi)三組間淀粉酶水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在2 h后，胰腺炎模型組血淀粉酶水平繼續(xù)升高，4 h達(dá)到高峰，而應(yīng)用紅景天苷組4 h血淀粉酶水平開(kāi)始下降，在8 h及12 h時(shí)血淀粉酶明顯低于未干預(yù)組，未干預(yù)組血淀粉酶仍在持續(xù)升高，給予紅景天苷后試驗(yàn)組血淀粉酶下降明顯，在急性發(fā)作期有明顯的改善胰腺微循環(huán)作用。建模2 h后，對(duì)照組及試驗(yàn)組血漿中TXB2的含量均顯著增高，在8 h及12 h時(shí)點(diǎn)，給予紅景天苷后，試驗(yàn)組TXB2水平明顯下降，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明紅景天苷能夠降低TXB2水平，從而減輕胰腺及外周組織微血管痙攣，改善胰腺血運(yùn)，清除炎性因子及氧自由基[13-14]。試驗(yàn)組IL-8及TXB2均較對(duì)照組下降，淀粉酶的下降幅度更為明顯，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示中藥紅景天苷可能通過(guò)拮抗氧自由基，改善TXB2/IL-8比例失調(diào)，減輕胰腺炎的缺血損傷，證明中藥紅景天苷對(duì)急性胰腺炎期間的組織細(xì)胞具有保護(hù)作用。

綜上所述，紅景天苷作為重要的擴(kuò)血管及抗氧化劑在A(yíng)NP進(jìn)程的早期發(fā)揮重要的改善微循環(huán)、降低胰酶及清除炎性因子的作用，對(duì)ANP的治療作用可以進(jìn)一步研究。

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Effect of salidroside on ischemia in acute necrotizing pancreatitis

LI Jie-qing,NIU Gui-fen,SUN Jian-bo

(Department of General Surgery,The Fourth People′s Hospital of Shenyang,Shenyang 110021,China)

Objective To observe the effect of salidroside on ischemia in rats with acute necrotizing pancreatitis (ANP) model and discuss the mechanism.Methods Two hundred Wistar rats were divided into three groups randomly: sham operation group(n=50),control group(n=75) and experiment group(n=75).Rats in control group and experiment group were made to acute necrotic pancreatitis model by artery blocking and the sham operation group were treated by abdominal incision,and the rats in experiment group were treated with salidroside i.v .Blood sample was drawn at 0,2nd,4th,8th,12th h after reperfusion,and the levels of blood amylase,TXB2,IL-8 were detected.Results At the 4th h,blood amylase began to decrease in experiment group,compared with control group at the 8th and 12th h,the differences were significant(P<0.05);At 8th h and 12th h, TXB2in experiment group was significantly lower than that in control group (P<0.05);TXB2in control group increased at 12th h and TXB2in experimental group began to decrease at 4th h,compared with control group,the difference was significant at the 8th h(P<0.05);IL-8 in control group increased in 12 h and IL-8 began to decrease at 12th h,compared with control group IL-8 decreased significantly at the 12th h(P<0.05).Conclusion Salidroside could protect ischemia injury in rats with ANP and decrease the levels of amylase,TXB2and IL-8.

Salidroside;Acute necrotizing pancreatitis;TXB2;Interleukin 8

2014-10-24

沈陽(yáng)市第四人民醫(yī)院普外科,沈陽(yáng) 110021

10.14053/j.cnki.ppcr.201503014