中風(fēng)顆粒處方藥材的醇提工藝研究*

張 麗，姜 華，郭 敏

1甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2甘肅省中醫(yī)藥研究院;3甘肅省中醫(yī)院

中風(fēng)顆粒處方藥材的醇提工藝研究*

張 麗1，姜 華2△，郭 敏2,3

1甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2甘肅省中醫(yī)藥研究院;3甘肅省中醫(yī)院

目的：優(yōu)選出中風(fēng)顆粒處方中藥材的最佳醇提條件。方法：以乙醇用量、回流時(shí)間和乙醇濃度為實(shí)驗(yàn)因素，按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以得膏率和阿魏酸含量為指標(biāo)。結(jié)果：最佳提取工藝為6倍量70%的乙醇回流1.5小時(shí)。結(jié)論：該工藝設(shè)計(jì)合理，穩(wěn)定可行。

腦中風(fēng)；乙醇；工藝研究

腦中風(fēng)［1］是一組以腦部缺血及出血性損傷癥狀為主要臨床表現(xiàn)的疾病，又稱(chēng)腦卒中或腦血管意外，主要分為出血性腦中風(fēng)(腦出血或蛛網(wǎng)膜下腔出血)和缺血性腦中風(fēng)(腦梗塞、腦血栓形成)兩大類(lèi)，以腦梗塞最為常見(jiàn)。腦中風(fēng)是世界上最重要的致死性疾病之一，多發(fā)生于中老年人群，且病情纏綿，后遺癥多。中風(fēng)膏是在古方“佛手散”的基礎(chǔ)上，按辨證論治的治療原則，結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)篩選參合而成，方中重用當(dāng)歸為君藥，起養(yǎng)血、活血之作用，配川芎、羌活加強(qiáng)其祛風(fēng)通絡(luò)的作用；黃芪益氣固表為臣藥，輔水蛭增強(qiáng)其活血通絡(luò)之力；甘草調(diào)和諸藥，全方合用，共奏益氣養(yǎng)血、添精補(bǔ)髓、化瘀通絡(luò)之功效。但是患者在服用中風(fēng)膏時(shí)發(fā)現(xiàn)，有服用劑量不準(zhǔn)確，口感不適，服用、攜帶不便等問(wèn)題，基于此本研究將中風(fēng)膏開(kāi)發(fā)為顆粒劑以克服以上缺點(diǎn)。本研究對(duì)方中的當(dāng)歸、川芎、丹參和羌活的提取方法及檢測(cè)方法，通過(guò)查閱文獻(xiàn)，采用乙醇為溶劑，以得膏率和阿魏酸含量為指標(biāo)，按正交實(shí)驗(yàn)的方法優(yōu)選出最佳提取方法。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀 (檢測(cè)器：W aters 2487；進(jìn)樣器：W aters 1525)；O D S C18(Ag l i e n t，5μm，4.6mm×250mm)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠提供)；電子分析天平(上海天平儀器廠提供)；超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司提供)；電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠提供)。

1.2 藥材及試劑 當(dāng)歸、川芎、丹參、羌活(甘肅省中醫(yī)院中藥房提供)；95%乙醇；甲醇(色譜純)；磷酸；阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)。

1.3 方法及結(jié)果

1.3.1 阿魏酸的含量測(cè)定

1.3.1.1 色譜條件 色譜柱：O D S C18(Ag l i e n t，5μm，4.6mm×250mm)；流動(dòng)相：0.1%，磷酸水-甲醇(72∶28)；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 n m；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL；流速:1.0m L/m in。

1.3.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取阿魏酸對(duì)照品20mg，用甲醇定容于10m L的容量瓶中，作為對(duì)照品溶液(2mg/m L)備用。

1.3.1.3 供試品溶液的制備 分別取提取的干膏2 g，加入適量甲醇，超聲5分鐘，過(guò)濾定容于10m L容量瓶中，備用。

1.3.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液 (2mg/m L)1.0、0.8、0.6、0.5、0.3m L分別定容于5m L容量瓶中，作為1、2、3、4、5號(hào)對(duì)照液，測(cè)其吸收度。以吸收度和對(duì)照品溶液濃度求得回歸方程：Y=1.5993X+0.0666，r=0.9991。在0.12～0.4mg/m L有良好線性關(guān)系。

1.3.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取4號(hào)對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積，其R S D=3.89%。表明儀器精密度良好。

1.3.1.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精密吸取3號(hào)樣品液10μL，每隔1小時(shí)進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積，其R S D=1.42%，表明樣品在6小時(shí)之內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.1.7 樣品測(cè)定 將制備好的樣品溶液在上述色譜條件下進(jìn)樣，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算阿魏酸的含量。

1.3.1.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知阿魏酸含量的1號(hào)樣品干膏約0.4g共9份，于5m L的容量瓶中，分別加入阿魏酸對(duì)照品。按“1.3.1.3”項(xiàng)操作，進(jìn)樣測(cè)其吸收度，并計(jì)算平均回收率為99.6%，R S D為3.47%(n=9)，見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率

1.3.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.2.1 因素水平確定 采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［2-4］，本實(shí)驗(yàn)以乙醇用量(A)、回流時(shí)間(B)、乙醇濃度(C)為實(shí)驗(yàn)因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平，應(yīng)用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)表2。

表2 提取溶劑及時(shí)間的因素水平

1.3.2.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 為綜合考量提取工藝對(duì)2個(gè)指標(biāo)的影響，本試驗(yàn)對(duì)測(cè)得的得膏率和阿魏酸含量2個(gè)指標(biāo)用權(quán)重法進(jìn)行評(píng)分，將2個(gè)指標(biāo)中測(cè)得的最大值定為100分，其他數(shù)據(jù)與最大值的比值計(jì)算得分。將得膏率與阿魏酸含量的權(quán)重系數(shù)定為0.6和0.4，綜合評(píng)分=得膏率×0.6/43.57+阿魏酸含量×0.4/0.76，見(jiàn)表3。

采用S P SS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到方差分析結(jié)果，見(jiàn)表4。

表3 提取溶劑及時(shí)間的正交實(shí)驗(yàn)

表4 提取溶劑及時(shí)間綜合評(píng)分的方差分析

通過(guò)表3和4的綜合分析，3個(gè)因素對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均沒(méi)有顯著性影響(P＞0.05)，三因素的影響大小為：A3＞A1＞A2，B2＞B1＞B3，C3＞C2＞C1。確定的最優(yōu)組合為A3B2C3，即6倍量70%的乙醇回流1.5小時(shí)。

3 討論

當(dāng)歸、川芎藥典規(guī)定測(cè)定其中的阿魏酸，丹參藥典中測(cè)的是丹參酮ⅡA，而且阿魏酸和丹參酮ⅡA是本組方的主要藥效成分，研究以阿魏酸含量和得膏率為檢測(cè)指標(biāo)。當(dāng)歸、川芎中阿魏酸的提取，報(bào)道的有雙提取、醇提及超臨界流體萃取等［5-9］。但是，水回流提取時(shí)溫度太高，阿魏酸不耐熱，且水煎液中含糖量較醇提液中要高，不利于后續(xù)工序的處理，故本研究采用醇提工藝。

多指標(biāo)的正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)分析方法有綜合平衡法和綜合評(píng)分法。綜合平衡法就是對(duì)測(cè)得的各個(gè)指標(biāo)，先逐一分別按單指標(biāo)計(jì)算分析，找出其因素水平的最優(yōu)組合，再根據(jù)各項(xiàng)指標(biāo)重要性及其各項(xiàng)指標(biāo)中因素主次、水平優(yōu)劣等進(jìn)行綜合平衡，最后確定整體最優(yōu)組合。綜合評(píng)分法是將每個(gè)實(shí)驗(yàn)所得各指標(biāo)實(shí)測(cè)值轉(zhuǎn)化成一個(gè)總評(píng)分，然后以此評(píng)分作為單指標(biāo)來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。本實(shí)驗(yàn)采用綜合評(píng)分法優(yōu)選出最佳組合。

由主觀分析可知三因素對(duì)本實(shí)驗(yàn)的影響順序?yàn)橐掖加昧俊⒒亓鲿r(shí)間和乙醇濃度，確定的最優(yōu)組合為A3B2C3，即6倍量70%的乙醇回流1.5小時(shí)。

［1］ 徐偉峰，錢(qián)小剛.中藥治療腦中風(fēng)的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(35)：5389-5391.

［2］ 張玲莉，彭燕，涂毅.正交試驗(yàn)法優(yōu)選丹參的提取工藝［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25(11)：1093-1094.

［3］ 倪力軍，史曉浩，高秀蛟，等.提取時(shí)間、溶劑對(duì)丹參提取物質(zhì)量的影響研究［J］.中成藥，2003，25(10)：780-782.

［4］ 劉雪平.當(dāng)歸有效成分分離純化工藝的研究進(jìn)展［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2011，30(13)：93-95.

［5］ 金城汝，李貴文，馬素麗，等.當(dāng)歸中阿魏酸提取工藝的優(yōu)化研究［J］.中成藥，2008，30(4)：516-519.

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［8］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：2134-2135.

［9］ 趙飛，胡燕月，陳益萍，等.川芎中阿魏酸的提取分離［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25(1)：8-10.

Study on A lcohol Extraction of the Herbs in ZhongFeng Granu les

ZHANG Li1,JIANG Hua2△,GUOMin2,3
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China; 2 Gansu Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine; 3 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective:To optimize the best conditions for alcohol extraction of the herbs in ZhongFeng granules.Methods:The experimentwas carried out as orthogonal test,the amount of alcohol,reflux time and the density of alcoholwere taken as experimental factors,and the resultsweremeasured by the indexes of yield and the contents of ferulic acid.Results:The optimal extraction technology is:six times of 70%alcohol refluxed for 1.5 hours.Conclusion:The technology isstableand feasiblew ith reasonabledesign.

stroke;alcohol;technology study

R282.4

A

1004-6852(2015)04-0036-03

2013-12-05

甘肅省中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究課題(編號(hào)GZK-2011-76)。

張麗(1988—)，女，在讀碩士研究生。研究方向：中藥制劑工藝研究。

△通訊作者：姜華(1959—)，女，博士學(xué)位，碩士研究生導(dǎo)師，主任藥師，研究員。研究方向：中(藏)藥有效成分篩選及質(zhì)量分析。