• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    新加糖腎康對高糖環(huán)境下HK-2細胞TGF-β/Smads信號通路的影響*

    2015-06-01 12:33:32楊麗霞田廣芳張定華劉銅華
    西部中醫(yī)藥 2015年11期
    關(guān)鍵詞:腎康高糖腎小管

    程 濤,權(quán) 卓,楊麗霞,田廣芳,張定華,劉銅華

    1甘肅省中醫(yī)藥研究院,甘肅 蘭州 730050;2中國解放軍第十醫(yī)院;3甘肅省中醫(yī)院;4北京中醫(yī)藥大學

    新加糖腎康對高糖環(huán)境下HK-2細胞TGF-β/Smads信號通路的影響*

    程 濤1,權(quán) 卓2,楊麗霞1,田廣芳3,張定華3,劉銅華4

    1甘肅省中醫(yī)藥研究院,甘肅 蘭州 730050;2中國解放軍第十醫(yī)院;3甘肅省中醫(yī)院;4北京中醫(yī)藥大學

    目的:通過觀察新加糖腎康(TSK)對高糖環(huán)境培養(yǎng)下人腎小管上皮細胞(H K-2)TG F-β/Sm ads信號通路的影響,探討其防治糖尿病腎病的作用機制。方法:體外培養(yǎng)H K-2細胞,培養(yǎng)基為含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基,實驗分為6組:空白對照組、高糖組(30 m m ol/LD-葡萄糖)、空白血清對照組(30 m m ol/LD-葡萄糖+10%空白血清)、新加糖腎康低劑量組(30 m m ol/L D-葡萄糖+5%TSK藥物血清)、新加糖腎康中劑量組(30 m m ol/LD-葡萄糖+10%TSK藥物血清)、新加糖腎康高劑量組(30 m m ol/LD-葡萄糖+20%TSK藥物血清)。ELISA法檢測轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TG F-β1)、轉(zhuǎn)化生長因子-β受體I(TG F-βRⅠ)、轉(zhuǎn)化生長因子-β受體Ⅱ(TG F-βRⅡ)、Sm ad2、Sm ad3的表達。結(jié)果:H K-2細胞經(jīng)高糖環(huán)境培養(yǎng)后TG F-β1、TG F-βRⅠ、TG F-β RⅡ、Sm ad2、Sm ad3的含量顯著增加,與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。但經(jīng)新加TSK干預后其含量下降,與高糖組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論:中藥復方TSK能夠抑制腎小管上皮細胞TG F-β/Sm ads信號通路,具有防治糖尿病腎間質(zhì)纖維化的作用。

    新加糖腎康;高糖;人腎小管上皮細胞;TG F-β/Sm ads通路

    糖尿病腎病(DN)是糖尿病最常見的并發(fā)癥之一,其發(fā)病率高,危害大,在糖尿病所有并發(fā)癥中占主要地位,直接關(guān)系著糖尿病患者的生活質(zhì)量。截至目前,國內(nèi)外進行了大量DN的研究,但對其發(fā)病機制尚未完全解釋清楚。近年研究發(fā)現(xiàn),腎間質(zhì)纖維化與DN密切相關(guān)[1]。因此,通過干預腎間質(zhì)纖維化預防DN的研究逐漸興起,特別是有關(guān)中醫(yī)藥的研究越來越多。

    中藥復方新加糖腎康是在甘肅省中醫(yī)院劉國安和張定華主任醫(yī)師研究的基礎(chǔ)上,結(jié)合北京中醫(yī)藥大學劉銅華教授治療DN的學術(shù)思想[2-3],經(jīng)過組方優(yōu)化,最終確立的臨床經(jīng)驗方,全方具有“益氣養(yǎng)陰,清熱祛濕,活血化瘀”的功效。前期臨床研究發(fā)現(xiàn),糖腎康對2型糖尿病患者血液流變學指標具有一定的改善作用,并能減少尿微量白蛋白,對DN患者具有較好的臨床療效。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),新加糖腎康能夠減少高糖環(huán)境培養(yǎng)下人腎小管上皮細胞的細胞外基質(zhì)成分Ⅰ型膠原(ColⅠ)、Ⅲ型膠原(ColⅢ)和纖連蛋白(FN)的分泌與沉積,并能調(diào)控纖維化因子基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9)及其抑制劑-1(TIMP-1)的分泌與釋放[4-5]。本課題在此研究基礎(chǔ)上,繼續(xù)觀察其對高糖環(huán)境下培養(yǎng)的人腎小管上皮細胞TGF-β/Smads信號通路的影響,進一步揭示其治療DN的分子機制。

    1 材料與方法

    1.1 動物與細胞株 SPF級雄性Wistar大鼠20只,體質(zhì)量(200±20)g,購于甘肅中醫(yī)學院動物中心,許可證號:SCXK(甘)2011-0001,飼養(yǎng)于甘肅省中醫(yī)藥研究院中藥研究所動物室。人腎小管上皮細胞株(HK-2)購于上海斯信生物科技有限公司,培養(yǎng)于甘肅省中醫(yī)藥研究院中心實驗室細胞培養(yǎng)室中。

    1.2 藥品與試劑 1640培養(yǎng)基(Gibco公司,批號:1237579);胎牛血清(Gibco公司,批號:12657-029)。人TGF-β1ELISA試劑盒(批號:E9372Hu);TGF-β RⅠELISA試劑盒 (批號:E3571Hu);TGF-β RⅡELISA試劑盒(批號:E3572Hu);Smad2 ELISA試劑盒(批號:E2911Hu);Smad3 ELISA試劑盒(批號:E2912Hu),生產(chǎn)廠家均為上海晶天生物科技有限公司。D-葡萄糖(汕頭西隴化工廠有限公司,批號:0810142),用時配成30 mmol/L的濃度[6]。新加糖腎康所用中藥材購于甘肅省中醫(yī)院藥劑科,主要組成有黃芪、生地黃等藥材,用時水提醇沉,冷藏備用。

    1.3 主要儀器 二氧化碳培養(yǎng)箱(型號:MCO-18AIC,廠家:SANYO,日本);超凈生物安全柜(型號:SW-CJ-2FD,廠家:蘇凈安泰,中國);倒置顯微鏡(型號:IX51,廠家:Olympus,日本);酶標儀(型號:MS 352,廠家:Labsystems,芬蘭);-80℃超低溫冰箱(型號:MDF-U53V,廠家:SANYO,日本);立式滅菌器(型號:LMQ.CV,廠家:山東新華,中國)。

    1.4 方法

    1.4.1 新加TSK藥物血清制備方法 20只雄性Wistar大鼠隨機分為:空白組和藥物組,每組10只。藥物組采用新加TSK灌胃,劑量為成人臨床用量的6.5倍;空白組采用同體積生理鹽水灌胃。每次灌胃體積為0.01 mL/g(體質(zhì)量)。早、晚各1次,持續(xù)3天。最后1次灌胃前禁食,不禁水,在灌胃30分鐘后,大鼠股動脈無菌采血,冷凍離心吸取血清,裝入EP管中,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4.2 H K-2細胞培養(yǎng)及實驗分組 HK-2細胞培養(yǎng)于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)基為含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基。每天在顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài),及時更換新鮮培養(yǎng)基,待細胞生長融合達到80%以上,用含0.25%胰蛋白酶、0.05%EDTA的消化液消化,顯微鏡下觀察細胞消化程度,及時拍落消化的細胞,用完全培養(yǎng)基終止消化,低速離心5分鐘,用新鮮培養(yǎng)基將細胞吹打均勻后進行傳代培養(yǎng)。實驗分為6組,空白對照組:1640培養(yǎng)液培養(yǎng);高糖組:在1640培養(yǎng)液中加入30 mmol/L D-葡萄糖,對細胞進行高糖環(huán)境下培養(yǎng);空白血清對照組:在高糖組的基礎(chǔ)上,加入10%空白血清,對細胞進行干預性培養(yǎng);新加糖腎康低、中、高劑量組:在高糖組的基礎(chǔ)上,分別加入5%、10%、20%新加TSK藥物血清,對細胞進行干預性培養(yǎng)。

    1.4.3 指標檢測 采用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清中TGF-β1、TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ、Smad2和Smad3的含量。

    1.4.3.1 樣本制備 將傳代培養(yǎng)的細胞吹打均勻,接種在24孔細胞培養(yǎng)板中,劑量為1 mL,每組3孔,接種2板。2小時后在顯微鏡下觀察細胞貼壁狀態(tài)。培養(yǎng)24小時后吸棄上清。每組加入1 mL含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)24、48小時,仔細吸取每孔細胞上清于1.5 mL的EP管中,4℃離心,取上清,低溫保存待測。

    1.4.3.2 指標檢測方法 按照ELISA試劑盒說明書進行。檢測前將樣本置室溫慢慢融化,在反應條孔中加入標準品或待測標本,每孔劑量為100μL。在空白對照孔加入100 μL稀釋液。在37℃培養(yǎng)箱中孵育,孵育后洗滌反應板,最后加酶標抗體進行酶聯(lián)免疫反應。反應終止后,以空白對照孔調(diào)零,在酶標儀450 nm處測定各孔OD值。

    1.5 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析,計量資料以(±s)表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    各組HK-2細胞經(jīng)ELISA檢測后顯示:正常培養(yǎng)的HK-2細胞經(jīng)高糖培養(yǎng)24、48小時后,TGF-β/ Smads信號通路上的蛋白分子TGF-β1、TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ、Smad2和Smad3的含量顯著增加,高糖培養(yǎng)48小時時,各蛋白分子的含量更多,與空白對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);但在新加TSK干預性培養(yǎng)后,其含量開始減少,并且隨著藥物劑量的增加及作用時間的延長,藥效逐漸加強,特別是在藥物高劑量、作用48小時時,效果更為明顯,與高糖組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而空白血清對照組則無此作用。結(jié)果表明,新加TSK能夠抑制高糖環(huán)境下人腎小管上皮細胞TGF-β/Smads信號通路,在一定程度上抑制了糖尿病腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展,見表1—5。

    表1 各組H K-2細胞不同時間TG F-β1的含量比較(±s) ng/L

    表1 各組H K-2細胞不同時間TG F-β1的含量比較(±s) ng/L

    注:*表示與空白對照組相比,P<0.05;△表示與高糖組相比,P<0.05。

    組別 只數(shù) 24 h 48 h空白對照組 3 29.344±8.770 30.866±2.616高糖組 3 94.144±5.001*111.921±2.377*空白血清對照組 3 29.942±3.218△28.093±4.625△新加糖腎康低劑量組 3 90.502±7.529*76.041±1.876*△新加糖腎康中劑量組 3 88.056±11.137*77.564±1.876*△新加糖腎康高劑量組 3 83.652±8.781*72.671±7.195*△

    表2 各組H K-2細胞不同時間TG F-β RⅠ的含量比較(±s) ng/L

    表2 各組H K-2細胞不同時間TG F-β RⅠ的含量比較(±s) ng/L

    注:*表示與空白對照組相比,P<0.05;△表示與高糖組相比,P<0.05。

    組別 只數(shù) 24 h 48 h空白對照組 3 442.954±72.263 485.661±17.491高糖組 3 848.671±101.098*1070.881±21.592*空白血清對照組 3 436.948±70.066△404.918±50.526△新加糖腎康低劑量組 3 755.916±58.342*707.204±50.048*△新加糖腎康中劑量組 3 683.848±79.506*695.192±46.174*△新加糖腎康高劑量組 3 609.111±69.722△497.005±86.268△

    表3 各組H K-2細胞不同時間TG F-β RⅡ的含量比較(±s) ng/L

    表3 各組H K-2細胞不同時間TG F-β RⅡ的含量比較(±s) ng/L

    注:*表示與空白對照組相比,P<0.05;△表示與高糖組相比,P<0.05。

    組別 只數(shù) 24 h 48 h空白對照組 3 402.842±49.284 367.093±28.694高糖組 3 712.308±25.727*845.698±61.127*空白血清對照組 3 344.684±46.457△370.828±70.212△新加糖腎康低劑量組 3 625.870±19.297*558.642±31.786*△新加糖腎康中劑量組 3 620.535±95.894*546.370±51.181*△新加糖腎康高劑量組 3 480.208±25.926△417.248±52.188*△

    表4 各組H K-2細胞不同時間Sm ad2的含量比較(±s) ng/L

    表4 各組H K-2細胞不同時間Sm ad2的含量比較(±s) ng/L

    注:*表示與空白對照組相比,P<0.05;△表示與高糖組相比,P<0.05。

    組別 只數(shù) 24 h 48 h空白對照組 3 273.212±17.254 370.347±49.673高糖組 3 657.410±13.259*841.368±56.214*空白血清對照組 3 332.361±65.145△344.300±49.163△新加糖腎康低劑量組 3 619.424±50.151*586.322±52.860*△新加糖腎康中劑量組 3 554.306±60.014*558.647±75.666*△新加糖腎康高劑量組 3 458.256±27.192*△373.603±46.589△

    表5 各組H K-2細胞不同時間Sm ad3的含量比較(±s) ng/L

    表5 各組H K-2細胞不同時間Sm ad3的含量比較(±s) ng/L

    注:*表示與空白對照組相比,P<0.05;△表示與高糖組相比,P<0.05。

    組別 只數(shù) 24 h 48 h空白對照組 3 277.418±19.498 350.608±39.562高糖組 3 692.518±57.764*837.829±35.706*空白血清對照組 3 371.443±55.527△316.417±92.657△新加糖腎康低劑量組 3 564.836±86.995*570.712±74.538*△新加糖腎康中劑量組 3 534.919±46.955*517.823±23.610*△新加糖腎康高劑量組 3 425.401±29.085△406.169±30.296△

    3 討論

    近年研究認為,糖尿病腎病(DN)的形成與發(fā)展與腎間質(zhì)纖維化密切相關(guān)。腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis,RIF)是所有腎臟疾病發(fā)展進行到終末期的共同病理改變的基礎(chǔ)。其形成與多種病理因素相關(guān),最為常見的有高血壓、高血糖、蛋白尿、氧化應激及各類纖維化因子等。這些病理因素通過特定的信號通路引起腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化,致使上皮細胞的形態(tài)發(fā)生改變,成為另一種新的細胞。腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化后,主要變?yōu)榧〕衫w維細胞,這是細胞外基質(zhì)成分的主要來源,也是纖維化形成的主要特征[7]。因此,干預腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化、抑制腎間質(zhì)纖維化成為防治DN的主要途徑。

    腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化過程中起關(guān)鍵作用的是TGF-β,已被公認為纖維化最主要的誘導因子,且其他細胞因子均通過調(diào)節(jié)TGF-β的表達來發(fā)揮作用。Yang等[8]研究報道,在大鼠單側(cè)輸尿管梗阻模型中,TGF-β1參與了纖維化的發(fā)展過程,誘導了腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化。Fan等[9]報道,在鼠腎小管上皮轉(zhuǎn)分化中,纖維化程度隨著TGF-β劑量的增加而增強。TGF-β誘導纖維化的作用主要通過Smads信號通路來實現(xiàn)[10],止消通脈寧和糖耐康干預糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化也證實了這一觀點[11-12]。本研究發(fā)現(xiàn),在高糖環(huán)境下人腎小管上皮細胞TGF-β1的含量顯著增加,其受體TGF-β RI、TGF-β RII的含量以及下游信號分子Smad2、Smad3的含量均顯著增強,與既往報道基本一致,說明Smads信號通路激活是糖尿病腎間質(zhì)纖維化的機制之一。因此,抑制TGF-β/Smads信號通路是干預腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化的關(guān)鍵。

    目前關(guān)于腎間質(zhì)纖維化的治療缺乏有效措施,許多研究仍處在初級階段,西醫(yī)研究主要集中在TGF-β中和抗體或天然拮抗劑及基因治療等方面,這些研究成本高,期限長,缺乏臨床實踐基礎(chǔ),藥物應用前景難以預測。近年來,中醫(yī)藥在該方面的研究越來越多,從化濁排毒、清熱利濕、活血化瘀等多個角度開展了很多抗纖維化的基礎(chǔ)研究及臨床研究,涉及臨床觀察、動物實驗、細胞實驗,并取得了較好的研究效果[13]。

    DN屬中醫(yī)“消渴”兼“腎病”范疇。古代醫(yī)家認為:消渴日久,臟腑氣血虛衰,水濕痰濁內(nèi)停,瘀血阻絡(luò),發(fā)為水腫尿甜?;静C特點為“本虛標實”。本課題所選中藥復方新加糖腎康,由生黃芪、地黃等中藥組成,方中黃芪、生地黃益氣養(yǎng)陰,為君藥;槐米、大黃清熱祛濕,為臣藥;益母草、山楂、水蛭活血化瘀,為佐藥。其中水蛭為新增蟲類藥,加強了組方的活血化瘀作用。全方具有“益氣養(yǎng)陰,清熱祛濕,活血化瘀”的功效,符合DN“本虛標實”的理論基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn),新加糖腎康能夠抑制高糖環(huán)境培養(yǎng)下人腎小管上皮細胞TGF-β1超表達,進而抑制了TGF-β RI、TGF-β RII的表達,繼而抑制了其信號通路分子Smad2、Smad3的表達,最終抑制了腎間質(zhì)纖維化的信號轉(zhuǎn)導,阻止了纖維化的發(fā)展,這可能是其防治糖尿病腎間質(zhì)纖維化的分子機制之一。

    [1] 李能娟,李紅.腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化與糖尿病腎?。跩].國際內(nèi)分泌代謝雜志,2006,26(4):277-279.

    [2] 張東鵬,張定華,王曉暉.糖腎康膠囊對早期糖尿病腎病患者血漿內(nèi)皮素-1、尿微量白蛋白的影響[J].中華實用中西醫(yī)雜志,2010,24(2):42-44.

    [3] 楊麗霞.劉銅華教授中醫(yī)診治糖尿病腎病的學術(shù)思想[J].國際中醫(yī)中藥雜志,2008,30(5):385-386.

    [4] 朱苗蕊,楊麗霞,薛建軍,等.新加糖腎康對高糖環(huán)境下H K-2細胞外基質(zhì)成分沉積的作用研究[J].中醫(yī)研究,2015,28(3):56-58.

    [5] 柴青春,楊麗霞,薛建軍,等.糖腎康對高糖誘導人腎小管上皮細胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制劑-1的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2014,21(10):58-60.

    [6] 凌光輝,唐文彬,孫林,等.Sm ad錨著蛋白在高糖誘導人腎小管上皮細胞細胞外基質(zhì)沉積中的作用[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2012,21(4):346-352.

    [7] 劉海軍,劉麗秋,于俊生.腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生機制及其中藥防治進展[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2005,6(11): 677-680.

    [8] Y ang J,Li u Y.D i ssect i on ofkey event s i n t ubul ar epi t hel i al t o m yofi brobl ast t ransi t i on and i t s i mpl i cat i ons i n renali nt erst i t i alfi brosi s[J].A m J of pat hol,2001,159(4):1465-1475.

    [9] Fan JM,N g Y Y,H i l l PA,et al.Transfor m i ng grow t h fact orbet a regul at es t ubul ar epi t hel i al-m yofi brobl ast t ransdi fferent i at i on i n vi t ro[J].K i dney Int,1999,56(4):1455-1467.

    [10]楊麗霞,劉銅華,黃宗濤,等.轉(zhuǎn)化生長因子-β1誘導人腎小管上皮細胞增殖的實驗研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2010,11(10):912-913.

    [11]楊麗霞,舒暢,吳麗麗,等.糖耐康對TG F-β1誘導的H K-2細胞Sm ads信號通路的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2014,20(20):160-163.

    [12]楊麗霞,李曉東,程濤,等.止消通脈寧干預轉(zhuǎn)化生長因子-β1誘導人腎小管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化的研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2013,20(1):37-39.

    [13]楊麗霞,黃宗濤,劉銅華,等.中藥復方防治腎纖維化的實驗研究概況[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(9):211-213.

    Influence of XinJia TangShenKang on TGF-β/Smads Signal Channel of HK-2 Cells in High Concentrations of Glucose

    CHENG Tao1,QUAN Zhuo2,YANG Lixia1,TIAN Guangfang3,ZHANG Dinghua3,LIU Tonghua4
    1 Gansu Provincial Academy of Chinese Medicine,Lanzhou 730050,China;
    2 The Tenth Hospital of Chinese PLA;
    3 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine;4 Beijing University of Chinese Medicine

    Objective:To explore the mechanism of XinJia TangShenKang (TSK)in treating diabetic nephropathy by observing its effects on TGF-β/Smads signal channel of human renal tubular epithelial cells HK-2 in high concentrations of glucose.Methods:HK-2 cells were cultivated in 1640 culture media containing 10%fetal bovine serum,they were randomized into six groups:blank control group,high glucose group (30 mmol/L D-glucose),the control group of blank serum (30 mmol/L D-glucose+10%blank serum),low dose (30 mmol/L D-glucose+5%TSK medicated serum),moderate dose(30 mmol/L D-glucose+10%TSK medicated serum)and high dose(30 mmol/L D-glucose+20%TSK medicated serum)groups of TSK.ELISA method was used to detect the expressions of TGF-β1,TGF-β RⅠ,TGF-β RⅡ,Smad2 and Smad3.Results:The contents of TGF-β1,TGF-β RⅠ, TGF-β RⅡ,Smad2 and Smad3 increased significantly after HK-2 cells cultivated in high concentrations of glucose, it had significant difference compared with blank control group(P<0.05).The contents of these indexes decreased after intervened with XinJia TSK,and it had significant difference compared with high glucose group(P<0.05). Conclusion:The compound TSK could inhibit TGF-β/Smads signal channel of HK-2,it could prevent and treat diabetic renal interstitial fibrosis.

    XinJia TangShenKang;highglucose;humanrenaltubularepithelialcells;TGF-β/Smadssignalchannel

    R587.1

    A

    1004-6852(2015)11-0013-04

    2015-05-07

    甘肅省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科學技術(shù)研究課題(編號G ZK-2011-13)。

    程濤(1971—),男,副主任醫(yī)師。研究方向:中醫(yī)內(nèi)科學。

    猜你喜歡
    腎康高糖腎小管
    Meta-analysis of the efficacy and safety of Shenkang injection combined with Western medicine in the treatment of chronic glomerulonephritis
    葛根素對高糖誘導HUVEC-12細胞氧化損傷的保護作用
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:04
    丹紅注射液對高糖引起腹膜間皮細胞損傷的作用
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:21
    海昆腎喜膠囊聯(lián)合腎康注射液治療慢性腎衰42例療效觀察
    依帕司他對早期糖尿病腎病腎小管功能的影響初探
    IgA腎病患者血清胱抑素C對早期腎小管間質(zhì)損害的預測作用
    細胞因子在慢性腎缺血與腎小管-間質(zhì)纖維化過程中的作用
    張掖市甜菜高產(chǎn)高糖栽培技術(shù)
    長江蔬菜(2015年3期)2015-03-11 15:10:29
    腎康注射液聯(lián)合西醫(yī)治療慢性腎衰竭療效及對脂代謝紊亂的影響
    腎康注射液不良反應特征分析
    九九久久精品国产亚洲av麻豆| 在现免费观看毛片| 纯流量卡能插随身wifi吗| 中国美白少妇内射xxxbb| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲自偷自拍三级| 2021少妇久久久久久久久久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| av国产精品久久久久影院| 女性被躁到高潮视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲熟女精品中文字幕| 天美传媒精品一区二区| 香蕉精品网在线| av专区在线播放| 不卡视频在线观看欧美| 人妻一区二区av| 国产av一区二区精品久久 | 国产男女超爽视频在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 中文天堂在线官网| 国产精品成人在线| av在线观看视频网站免费| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲成人中文字幕在线播放| www.色视频.com| 国产精品欧美亚洲77777| 成人漫画全彩无遮挡| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品久久久久成人av| 在线免费观看不下载黄p国产| 香蕉精品网在线| 亚洲人成网站高清观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 少妇 在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 国产熟女欧美一区二区| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 天美传媒精品一区二区| 老熟女久久久| av.在线天堂| 少妇人妻久久综合中文| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品伦人一区二区| 国产在线免费精品| www.色视频.com| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 中国三级夫妇交换| 各种免费的搞黄视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久鲁丝午夜福利片| 大陆偷拍与自拍| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲自偷自拍三级| 免费观看性生交大片5| 我要看黄色一级片免费的| 青春草国产在线视频| 97在线人人人人妻| 99久久精品一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 久久久午夜欧美精品| av国产免费在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 91aial.com中文字幕在线观看| 视频中文字幕在线观看| 国产乱人偷精品视频| 国产av码专区亚洲av| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美zozozo另类| 国产爽快片一区二区三区| 看十八女毛片水多多多| 亚洲av福利一区| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩国内少妇激情av| 亚洲天堂av无毛| av在线播放精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 精品视频人人做人人爽| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久久久久久精品精品| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲电影在线观看av| 大码成人一级视频| 三级国产精品片| 欧美人与善性xxx| 欧美日韩视频精品一区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 内地一区二区视频在线| 高清午夜精品一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产成人a区在线观看| 我的老师免费观看完整版| 亚州av有码| 好男人视频免费观看在线| 国产色爽女视频免费观看| 三级国产精品欧美在线观看| 国产男女内射视频| 中文字幕亚洲精品专区| 高清黄色对白视频在线免费看 | 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲无线观看免费| 国产成人91sexporn| 毛片女人毛片| 91狼人影院| 视频区图区小说| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产乱人偷精品视频| 国产免费福利视频在线观看| 午夜免费鲁丝| 欧美 日韩 精品 国产| 成人免费观看视频高清| 五月玫瑰六月丁香| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲精品一区蜜桃| 日本黄大片高清| 男女边吃奶边做爰视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国产高潮美女av| 在线观看国产h片| 欧美日韩亚洲高清精品| 在线看a的网站| 日韩中文字幕视频在线看片 | 成人黄色视频免费在线看| 美女内射精品一级片tv| 人人妻人人看人人澡| 日本午夜av视频| 亚洲国产最新在线播放| 尾随美女入室| 日韩三级伦理在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品一二三| 国产一区二区在线观看日韩| 在线免费十八禁| 国产伦理片在线播放av一区| 99热网站在线观看| 午夜激情福利司机影院| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲成人一二三区av| 夫妻性生交免费视频一级片| 成人特级av手机在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 国产av码专区亚洲av| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲成人一二三区av| 国产高清不卡午夜福利| 伦理电影免费视频| 伊人久久国产一区二区| 亚洲精品,欧美精品| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 午夜福利影视在线免费观看| 一个人看视频在线观看www免费| www.色视频.com| 下体分泌物呈黄色| 亚洲成色77777| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲av综合色区一区| 成人亚洲欧美一区二区av| 有码 亚洲区| 亚洲精品456在线播放app| 色网站视频免费| 成人特级av手机在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲电影在线观看av| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久久久久久久久久丰满| 91久久精品电影网| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 91狼人影院| 久久久久久久久大av| 亚洲欧美一区二区三区国产| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲精品久久午夜乱码| 99久久精品一区二区三区| 最黄视频免费看| 五月天丁香电影| h视频一区二区三区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲成人中文字幕在线播放| 有码 亚洲区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 女性被躁到高潮视频| 新久久久久国产一级毛片| 网址你懂的国产日韩在线| 26uuu在线亚洲综合色| 日韩成人av中文字幕在线观看| 免费看av在线观看网站| 高清视频免费观看一区二区| 一区二区三区精品91| 国产精品一区二区在线不卡| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久热精品热| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | av免费观看日本| 久久综合国产亚洲精品| 成人二区视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 成人特级av手机在线观看| 欧美国产精品一级二级三级 | 啦啦啦啦在线视频资源| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产成人aa在线观看| 国产高清三级在线| 久久热精品热| 最近中文字幕高清免费大全6| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 99热这里只有精品一区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一本色道久久久久久精品综合| 99久国产av精品国产电影| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久国产精品大桥未久av | 亚洲av福利一区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 色5月婷婷丁香| 久久久午夜欧美精品| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲精品国产av蜜桃| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲内射少妇av| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 中国三级夫妇交换| 99热全是精品| 亚洲在久久综合| 日韩大片免费观看网站| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲久久久国产精品| 日韩伦理黄色片| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产精品久久久久久久电影| 欧美bdsm另类| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 高清在线视频一区二区三区| 日本午夜av视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 1000部很黄的大片| 午夜福利影视在线免费观看| 黄色日韩在线| av国产精品久久久久影院| av视频免费观看在线观看| 99热网站在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲真实伦在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产免费一区二区三区四区乱码| 大香蕉久久网| 国产高清有码在线观看视频| 少妇的逼水好多| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产精品蜜桃在线观看| 国产一区二区三区av在线| 在线免费十八禁| 久久国产精品大桥未久av | 晚上一个人看的免费电影| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲欧美清纯卡通| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久韩国三级中文字幕| 岛国毛片在线播放| 国产高清有码在线观看视频| 国产探花极品一区二区| 18禁在线播放成人免费| 日韩在线高清观看一区二区三区| 色哟哟·www| 丝袜喷水一区| 国产成人免费观看mmmm| 丝袜脚勾引网站| 国产成人freesex在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 成人美女网站在线观看视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 最近中文字幕高清免费大全6| 午夜精品国产一区二区电影| .国产精品久久| 国产一区亚洲一区在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 人妻一区二区av| 亚洲伊人久久精品综合| 久久久色成人| 91精品一卡2卡3卡4卡| 精品久久久久久久久亚洲| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲三级黄色毛片| 一区二区三区精品91| 六月丁香七月| 国产免费又黄又爽又色| 街头女战士在线观看网站| 一区二区三区免费毛片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 一区在线观看完整版| 亚洲精品第二区| 国产精品一区二区性色av| 一级毛片我不卡| 色综合色国产| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久精品国产亚洲av涩爱| 我要看日韩黄色一级片| 熟女av电影| 欧美另类一区| 欧美高清成人免费视频www| 2018国产大陆天天弄谢| h视频一区二区三区| 777米奇影视久久| 精品亚洲成a人片在线观看 | 亚洲精品一二三| 777米奇影视久久| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲电影在线观看av| 蜜臀久久99精品久久宅男| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 少妇人妻精品综合一区二区| 蜜桃在线观看..| 草草在线视频免费看| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲在久久综合| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 嘟嘟电影网在线观看| 1000部很黄的大片| videossex国产| 日韩在线高清观看一区二区三区| 中国三级夫妇交换| 性色av一级| 一个人看的www免费观看视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 91精品国产九色| 国产成人精品久久久久久| 国精品久久久久久国模美| 男人添女人高潮全过程视频| 最新中文字幕久久久久| 成年人午夜在线观看视频| 大香蕉久久网| 黑人猛操日本美女一级片| 国产在线一区二区三区精| 国产高潮美女av| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产黄片视频在线免费观看| 99久久精品一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜激情福利司机影院| 久久久久久久久久久免费av| 777米奇影视久久| 99热这里只有精品一区| 久久精品人妻少妇| 高清不卡的av网站| 联通29元200g的流量卡| 国产 一区精品| 欧美精品亚洲一区二区| 国产黄片美女视频| 九色成人免费人妻av| 晚上一个人看的免费电影| 人妻夜夜爽99麻豆av| 视频中文字幕在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 日本午夜av视频| 国产 精品1| 欧美日韩综合久久久久久| 免费大片18禁| 成人美女网站在线观看视频| av国产免费在线观看| 乱系列少妇在线播放| 久久久久久久久久久免费av| 精品一区在线观看国产| tube8黄色片| 黄片wwwwww| 午夜激情福利司机影院| 国产av精品麻豆| 久久综合国产亚洲精品| 国产淫语在线视频| 久久精品国产自在天天线| 狂野欧美激情性bbbbbb| av.在线天堂| 免费观看无遮挡的男女| 日韩成人伦理影院| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 一个人看视频在线观看www免费| av在线播放精品| 欧美+日韩+精品| 国产综合精华液| 亚洲欧美日韩东京热| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 三级经典国产精品| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产精品一区www在线观看| 久久热精品热| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久久久久久久久久丰满| 七月丁香在线播放| 秋霞伦理黄片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99re6热这里在线精品视频| 高清不卡的av网站| 全区人妻精品视频| 国产 精品1| 免费高清在线观看视频在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 久久99热这里只有精品18| 丝袜喷水一区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 天美传媒精品一区二区| 国产男女超爽视频在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 在线观看免费高清a一片| 久久国产精品大桥未久av | 国产日韩欧美在线精品| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久久性生活片| 国产一级毛片在线| 永久免费av网站大全| 18禁在线播放成人免费| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 五月伊人婷婷丁香| 插阴视频在线观看视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲精品色激情综合| 免费看日本二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲高清免费不卡视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产 一区 欧美 日韩| 搡女人真爽免费视频火全软件| 晚上一个人看的免费电影| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 美女内射精品一级片tv| 国产精品久久久久成人av| 黄色日韩在线| 国产黄片视频在线免费观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 综合色丁香网| 欧美日本视频| 激情五月婷婷亚洲| 国产精品人妻久久久久久| 久久影院123| 欧美+日韩+精品| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲性久久影院| 在线观看国产h片| 欧美+日韩+精品| 嫩草影院新地址| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久99热这里只频精品6学生| 国产在线视频一区二区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲久久久国产精品| 黄色怎么调成土黄色| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲,一卡二卡三卡| 成人免费观看视频高清| 六月丁香七月| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲va在线va天堂va国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲欧美清纯卡通| 在线看a的网站| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产av精品麻豆| 欧美成人一区二区免费高清观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲高清免费不卡视频| 国产男女超爽视频在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 插逼视频在线观看| 国产在视频线精品| 国产免费一级a男人的天堂| 毛片女人毛片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 熟女人妻精品中文字幕| 在线观看av片永久免费下载| 国产乱来视频区| 亚洲精品自拍成人| 国产视频内射| 哪个播放器可以免费观看大片| 久久久久久久大尺度免费视频| 日韩制服骚丝袜av| 老熟女久久久| 成人国产av品久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产精品福利在线免费观看| 久热久热在线精品观看| 日韩精品有码人妻一区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 一本色道久久久久久精品综合| 一个人免费看片子| 精品一区二区免费观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 少妇人妻久久综合中文| 在线观看人妻少妇| 在线观看三级黄色| 成年女人在线观看亚洲视频| 一边亲一边摸免费视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 尾随美女入室| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲性久久影院| 国产免费视频播放在线视频| 人妻 亚洲 视频| 一级a做视频免费观看| 精品视频人人做人人爽| 高清日韩中文字幕在线| av黄色大香蕉| 日韩大片免费观看网站| 亚洲第一av免费看| 色哟哟·www| 国产精品人妻久久久久久| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美+日韩+精品| 日本爱情动作片www.在线观看| 大香蕉久久网| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美区成人在线视频| 毛片女人毛片| 国产高潮美女av| 少妇 在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片 | 在线观看三级黄色| 精品视频人人做人人爽| 精品一区在线观看国产| 色5月婷婷丁香| 91在线精品国自产拍蜜月| 女人久久www免费人成看片| 国产免费一区二区三区四区乱码| 免费观看av网站的网址| av不卡在线播放| 国产一区二区三区av在线| 一级爰片在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 永久免费av网站大全| 亚洲人成网站在线播| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产亚洲一区二区精品| 在线观看三级黄色| 女性生殖器流出的白浆| 少妇熟女欧美另类| 日韩三级伦理在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 水蜜桃什么品种好| 日日撸夜夜添| 不卡视频在线观看欧美| 在线免费十八禁| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美高清成人免费视频www| 国产在视频线精品| av国产免费在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩欧美精品免费久久| 91aial.com中文字幕在线观看| 日韩视频在线欧美| 午夜福利视频精品| 国产极品天堂在线| 丝袜喷水一区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 观看免费一级毛片| 久久99热这里只频精品6学生| 国产爱豆传媒在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产视频首页在线观看| 大香蕉久久网| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 精品视频人人做人人爽| 男男h啪啪无遮挡| 午夜福利网站1000一区二区三区| 色视频www国产| 美女国产视频在线观看| 亚洲在久久综合| 国产黄色视频一区二区在线观看| 十分钟在线观看高清视频www | 久久人妻熟女aⅴ| 久久久久久久国产电影| 在线观看国产h片| 两个人的视频大全免费| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产黄片美女视频| 亚洲人与动物交配视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 黄色配什么色好看| 久久人人爽人人片av| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久99热6这里只有精品| 大片电影免费在线观看免费| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产一级毛片在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看|