消癌解毒方對(duì)膽囊癌患者細(xì)胞增殖及凋亡的影響

李廣林，張 勇

戶縣中醫(yī)醫(yī)院普外科，陜西 戶縣 710300

消癌解毒方對(duì)膽囊癌患者細(xì)胞增殖及凋亡的影響

李廣林，張 勇

戶縣中醫(yī)醫(yī)院普外科，陜西 戶縣 710300

目的：探討消癌解毒方治療膽囊癌與K i 67基因、Fas基因表達(dá)的關(guān)系。方法：將46例原發(fā)性膽囊癌患者隨機(jī)分為對(duì)照組23例和治療組23例。治療組口服消癌解毒方和化療藥物，2次/d；對(duì)照組入院后僅使用化療藥物，劑量與治療組一致。2組患者均連續(xù)治療6周，治療后進(jìn)行手術(shù)，術(shù)中均取瘤體。用免疫組化SP法檢測(cè)腫瘤組織中K i 67、Fas基因的表達(dá)水平。結(jié)果：治療組膽囊癌患者組織Fas陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)；治療組K i 67的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)論：消癌解毒方可抑制膽囊癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡，這可能是消癌解毒方治療原發(fā)性膽囊癌的作用機(jī)制。

消癌解毒方；膽囊癌；K i 67；Fas

消癌解毒方是在國(guó)醫(yī)大師周仲瑛教授“癌毒”理論指導(dǎo)下經(jīng)長(zhǎng)期臨床總結(jié)而成的有效抗癌方藥。周紅光等［1-2］研究表明，消癌解毒能提高中晚期惡性腫瘤近期臨床療效，明顯提高患者的生活質(zhì)量，減少化療藥物的毒副反應(yīng)。Ki67是增殖細(xì)胞核抗原，是可靠而全面的反應(yīng)細(xì)胞群體增殖活性的客觀指標(biāo)，F(xiàn)as是細(xì)胞凋亡的信號(hào)分子，以二聚體與Caspase-8結(jié)合形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體，最終激活Caspase-3而導(dǎo)致表達(dá)Fas的靶細(xì)胞凋亡［3-8］。為進(jìn)一步探討消癌解毒方治療膽囊癌的機(jī)理，近年來(lái)，筆者就消癌解毒方對(duì)原發(fā)性膽囊癌組織中細(xì)胞核增殖抗原Ki67及促細(xì)胞凋亡因子Fas表達(dá)的影響進(jìn)行了觀察，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將2011年5月至2014年5月在戶縣中醫(yī)醫(yī)院就診的46例膽囊癌患者隨機(jī)分為2組。治療組23例，其中男13例，女10例；年齡32～74歲，平均(58.7±13.1)歲；膽囊結(jié)石13例，膽管結(jié)石3例，急性膽囊炎3例，膽囊息肉6例，均有不同程度的食欲降低、肝功能異常、腹水。對(duì)照組23例，其中男12例，女11例；年齡35～78歲，平均(59.3±12.7)歲；膽囊結(jié)石8例，急性膽囊炎3例，膽管結(jié)石2例，膽囊息肉8例，均有不同程度的食欲降低、肝功能異常、腹水。2組患者年齡、性別、合并癥等臨床資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 納入：1)符合膽囊癌診斷標(biāo)準(zhǔn)者；2)符合知情同意原則。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 排除：1)不符合上述納入標(biāo)準(zhǔn)者；2)對(duì)受試藥物過(guò)敏者；3)中途退出治療者。

1.4 治療方法 對(duì)照組僅給予化療藥物治療，方案為：培他濱片(上海羅氏制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20110117)1 500 mg/m2，每日分2次口服，21天為1個(gè)周期，共觀察2個(gè)周期。治療組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上加服消癌解毒方(消癌解毒方是根據(jù)我國(guó)著名中醫(yī)藥專家周仲瑛教授的“癌毒”理論，在辨證與辨病相結(jié)合的基礎(chǔ)上組方，主要由半枝蓮、白花蛇舌草、蜈蚣、漏蘆、僵蠶、太子參等藥物組成［9］)，1劑/d，水煎300 mL，分早晚2次服用，21天為1周期，連續(xù)服用2個(gè)周期。2組患者末次服用后第2天行膽囊癌切除手術(shù)。

1.5 免疫組化及結(jié)果判定 采用SP法二步操作，具體實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行，用PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。采用雙盲法觀察陽(yáng)性反應(yīng)。以細(xì)胞被染成黃色或棕色為陽(yáng)性細(xì)胞，隨機(jī)選擇6個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占的百分比均值，當(dāng)此均值＞10%即為陽(yáng)性表達(dá)［10］。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Ki67陽(yáng)性率治療組為30.4%，對(duì)照組為86.9%，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Fas陽(yáng)性率治療組為91.3%，對(duì)照組為34.8%，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。Ki67和Fas免疫組化蛋白表達(dá)情況見(jiàn)圖1—2。

表1 2組中K i 67、Fas抗原檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果

圖1 2組中K i 67的細(xì)胞核表達(dá)情況(左：陰性表達(dá)；右：陽(yáng)性表達(dá))

圖2 2組中Fas的細(xì)胞漿表達(dá)情況(左：陰性表達(dá)；右：陽(yáng)性表達(dá))

3 討論

近年來(lái)，膽囊癌的發(fā)病率有逐年上升趨勢(shì)，是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤［11］。該病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病因尚不清楚，與飲食、細(xì)菌感染等有一定的關(guān)系。膽囊癌屬于中醫(yī)“脅痛”“腹痛”“黃疸”等范疇，肝氣郁結(jié)，脾氣虛弱，水濕不化，疏泄不利，濕熱交蒸，瘀毒內(nèi)阻，日久而形成為其主要病因病機(jī)。中醫(yī)治療以辨證施治為主，也有一些單方、驗(yàn)方，并可配合使用針刺療法［2］。西醫(yī)對(duì)膽囊癌以手術(shù)根治切除為主，術(shù)后采用化療，或放射療法及免疫療法。研究表明，消癌解毒方配合化療使腫瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+數(shù)量及NK活性明顯提高，對(duì)提高機(jī)體抗腫瘤免疫能力也具有一定的療效［12］。有學(xué)者以H22荷瘤小鼠為研究對(duì)象，消癌解毒方能顯著影響多個(gè)與腫瘤生長(zhǎng)凋亡和免疫相關(guān)的信號(hào)通路，并能下調(diào)趨化因子信號(hào)通路中CCL3、CXCL2等基因的表達(dá)，發(fā)揮抗腫瘤生長(zhǎng)和侵襲的作用［13］。

消癌解毒方能夠明顯抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的增殖，抑制核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的異常持續(xù)活化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡［4，14-15］。本研究與其結(jié)果一致，本研究用消癌解毒方治療人原發(fā)性膽囊癌，可顯著下調(diào)細(xì)胞增殖抗原Ki67的陽(yáng)性表達(dá)(P＜0.05)，表明消癌解毒方抑制膽囊癌細(xì)胞增殖，這可能是消癌解毒方治療膽囊癌的作用機(jī)理。此外，本文還研究了消癌解毒方治療膽囊癌與促細(xì)胞凋亡因子Fas的表達(dá)關(guān)系，結(jié)果表明，F(xiàn)as在膽囊癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯增大(P＜0.05)，說(shuō)明消癌解毒方可能對(duì)膽囊癌細(xì)胞的凋亡具有一定的促進(jìn)作用。還有研究報(bào)道［16］認(rèn)為，消癌解毒方能促進(jìn)肝癌細(xì)胞株H22細(xì)胞凋亡，抑制Survivin蛋白的表達(dá)，這可能是其抗癌機(jī)制之一。

綜上所述，消癌解毒方通過(guò)抑制原發(fā)性膽囊癌組織Ki67基因的表達(dá)可降低人膽囊癌細(xì)胞的增殖能力，通過(guò)上調(diào)腫瘤組織Fas基因的表達(dá)促進(jìn)人膽囊癌細(xì)胞的凋亡。然而，消癌解毒方治療膽囊癌機(jī)制的研究還需要進(jìn)一步通過(guò)大量的臨床試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，以加深對(duì)消癌解毒方治療原發(fā)性膽囊癌機(jī)理的認(rèn)識(shí)。

［1］ 周紅光，陳海彬，吳勉華，等.消癌解毒方配合化療治療中晚期惡性腫瘤臨床療效觀察［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2010，25(7): 1140-1143.

［2］ 張亞密.自擬清膽化瘀湯治療老年膽囊癌的臨床研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31(8):1810-1812.

［3］ Tam m I，W ang Y，Sausvi l l e E，et al.IA P-fam i l y prot ei n survi vi n i nhi bi t scaspase act i vi t y and apopt osi s i nduced by Fas(CD 95)，Bax，caspases，and ant i cancer drugs［J］.Cancer research，1998，58(23):5315-5320.

［4］ 趙生華.苦參堿誘導(dǎo)宮頸癌Si ha細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究［J］.西部中醫(yī)藥，2015，28(6):8-13.

［5］ 丁明明.中藥對(duì)肺癌細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)基因表達(dá)的影響［J］.西部中醫(yī)藥，2015，28(5):142-145.

［6］ 齊元富，李慧杰，顏芹.納米雄黃對(duì)皮膚鱗癌 A 431細(xì)胞 p53、Bcl-2表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制探討［J］.河北中醫(yī)，2014，36(1):109-111.

［7］ 石曉明，吳勝春，楊永賓，等.術(shù)前應(yīng)用復(fù)方苦參注射液對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的影響及機(jī)制研究［J］.河北中醫(yī)，2013，35(8): 1212-1213.

［8］ 任公平，呂正鑫.辣椒素對(duì)人大細(xì)胞肺癌N CI-H 460細(xì)胞侵襲能力及E-鈣黏蛋白、Snai l蛋白表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2015，22(8):55-58.

［9］ 吳勉華，李棟.消癌解毒方加入脂多糖及CD 284對(duì)人肝癌細(xì)胞SM M C-7721的TLRs/N F-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路TLR4等m RN A和蛋白表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(12):3047-3051.

［10］王鳳蓮，陳殿剛，孫豐翠，等.子宮肌瘤患者ki-67孕激素受體及細(xì)胞凋亡相關(guān)性研究［J］.泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，25(3): 183-184.

［11］黃年開.原發(fā)性膽囊癌的治療及預(yù)后影響因素分析［J］.實(shí)用癌癥雜志，2013，28(5):568-571.

［12］陳海彬，周紅光，程海波，等.消癌解毒方對(duì)中晚期惡性腫瘤患者免疫功能的影響［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2009(9):1257-1259.

［13］吳勉華，李黎.消癌解毒方對(duì)H 22荷瘤小鼠基因表達(dá)譜的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33(9):1232-1235.

［14］李棟，程海波，王明艷，等.消癌解毒方加入LPS及CD 284對(duì)人肝癌細(xì)胞SM M C-7721的TLRs/N F-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(11):2818-2822.

［15］李黎，王明艷，吳勉華.消癌解毒方含藥血清誘導(dǎo)人肝癌SM M C-7721細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23(8):1851-1853.

［16］盧偉，沈波，李黎，等.消癌解毒方對(duì)肝癌細(xì)胞株H 22凋亡及Survi vi n表達(dá)的影響［J］.四川中醫(yī)，2012，30(4):14-16.

Influence of XiaoAi JieDu Prescription on Cellular Proliferation and Apoptosis of the Patients Suffering from Gallbladder Carcinoma

LI Guanglin,ZHANG Yong
Surgery Department of Huxian County TCM Hospital,Huxian 710300,China

Objective:To investigate the correlation between XiaoAi JieDu prescription in treating gallbladder carcinoma and the expressions of Ki67 gene and Fas gene.Methods:All 46 patients were randomly divided into the control group and the treatment group.The treatment group took XiaoAi JieDu prescription and chemotherapy drugs, twice per day;the control group took chemotherapy drugs after hospitalized,and the doses were identical with the treatment group.Both groups were treated for six consective weeks,and accepted the surgery to remove the tumor, the expressions of Ki67 gene and Fas gene in the tissue of the tumor were detected by immunohistochemical SP method.Results:The treatment group was higher than the control group significantly in Fas positive rate(P＜0.05); lower than the control group in Ki67 positive expression rate (P＜0.05).Conclusion:XiaoAi JieDu prescription could inhibit the proliferation of gallbladder carcinoma cells and promote the apoptosis of cancer cells,which might be the mechanism of XiaoAi JieDu prescription in treating gallbladder carcinoma.

XiaoAi JieDu prescription;gallbladder carcinoma;Ki67;Fas

R735.8

B

1004-6852(2015)10-0101-03

2014-12-27

李廣林(1961—)，男，副主任醫(yī)師。研究方向：肝膽及腸道腫瘤病的中醫(yī)治療。