類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的臨床表達(dá)

陸揚(yáng)光 余志輝 鄭明江

·論著·

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的臨床表達(dá)

陸揚(yáng)光 余志輝 鄭明江

目的 探討 Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子白介素-17(IL-17)、白介素-6(IL-6)、白介素-23(IL-23)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)發(fā)病中的表達(dá)。方法 用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)活動(dòng)組(35例RA患者)、緩解組(35 例RA 患者)及對(duì)照組(30 例健康人)血清 IL-17、IL-6、IL-23的水平, 并分析它們與活動(dòng)度和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 活動(dòng)組和緩解組血清IL-23、IL-6水平均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05), 活動(dòng)組與緩解組相比, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。活動(dòng)組與緩解組血清IL-17水平均高于對(duì)照組(P＜0.05),但緩解組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。RA患者血清IL-17、IL-6和IL-23水平之間互為正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論 Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-6、IL-23均在RA 的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用, 并可作為RA活動(dòng)參考指標(biāo)。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；Th17細(xì)胞；白介素-17；白介素-6；白介素-23

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis , RA)是一種以關(guān)節(jié)慢性炎癥和骨質(zhì)破壞為主的自身免疫性疾病, 其特征是手、足小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)、對(duì)稱性、侵襲性關(guān)節(jié)炎癥, 經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)外器官受累及血清類風(fēng)濕因子陽性, 可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形甚至功能喪失。一般認(rèn)為, 該病成因可能與遺傳、感染、性激素等有關(guān), 也有研究認(rèn)為自身免疫功能失調(diào)及細(xì)胞因子表達(dá)過度在RA發(fā)病中也占有重要地位。有證據(jù)表明：一種T細(xì)胞的新亞型(Th17細(xì)胞)分泌的IL-17、IL-6、IL-23 等多種細(xì)胞因子, 可能參與了多種自身免疫疾病發(fā)生過程［1-4］。本研究旨在分析RA患者體內(nèi)Th17細(xì)胞分泌的多種細(xì)胞因子的表達(dá)水平, 以期對(duì)臨床防控該病帶來幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有RA 病例均來自佛山市第五人民醫(yī)院2013年1～12月住院患者及門診患者, RA病例根據(jù) DAS28評(píng)分(28 joint disease activity score, DAS28)分為活動(dòng)組和緩解組, 同時(shí)從體檢中心選取年齡、性別匹配人群作為對(duì)照組?；顒?dòng)組：35 例, 其中男6例, 女29 例, 平均年齡 (49.6±15.2)歲, DAS28＞5.1分；緩解組：35 例, 其中男8例, 女27例,平均年齡(46.2±13.4)歲, DAS28＜2.6分；對(duì)照組：30 例, 其中男 7 例, 女23 例, 平均年齡(47.5±11.2)歲。診斷均符合《1987 年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)RA分類診斷標(biāo)準(zhǔn)》。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 近期感染、腫瘤、血液系統(tǒng)疾病和其他自身免疫性疾病患者為本研究排除標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材 為保證條件的一致性及可比性, 要求所有實(shí)驗(yàn)對(duì)象均在入院后治療前早晨空腹坐姿抽取靜脈血作檢測(cè)標(biāo)本, 送檢血樣必須在2 h內(nèi)分離血清待檢, 不能立即檢測(cè)者, 標(biāo)本應(yīng)置于-40℃冰箱待測(cè)并注意不得反復(fù)凍融；實(shí)驗(yàn)儀器采用鄭州安圖全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀, 對(duì)應(yīng)耗材為廠家原廠配套試劑, 測(cè)試過程中同時(shí)選擇高低兩個(gè)質(zhì)控品以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.4 指標(biāo)測(cè)定 血清IL-17、IL-6、IL-23水平均采用ELISA試劑盒(上海雅吉生物科技有限公司)進(jìn)行測(cè)定, 操作過程嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。其他實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的指標(biāo)RF、ESR及CRP均由佛山市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科完成。所有實(shí)驗(yàn)方法、目的及臨床價(jià)值均告知患者并簽訂知情同意書, 經(jīng)本院倫理道德委員會(huì)討論認(rèn)為符合倫理道德標(biāo)準(zhǔn)要求。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)每組數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RA患者血清Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平 RA患者(活動(dòng)組+緩解組)和對(duì)照組血清IL-17、IL-6、IL-23水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；活動(dòng)組和緩解組血清IL-23、IL-6水平均明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)；另外, 活動(dòng)組與緩解租相比, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；活動(dòng)組與緩解組、對(duì)照組相比較, 血清IL-17水平明顯升高, 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均 P＜0.05), 但緩解組與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。

2.2 RA患者血清Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子與各指標(biāo)的相關(guān)分析 RA患者(活動(dòng)組+緩解組)血清IL-23水平與DAS28評(píng)分和ESR具有一定相關(guān)性(P＜0.05), 而與RF和CRP無相關(guān)(P＞0.05)；RA患者血清 IL-6水平與DAS28評(píng)分、RF、CRP和ESR均具有一定相關(guān)性(P＜0.05)；RA患者血清IL-17水平與DAS28評(píng)分、CRP和ESR均具有一定相關(guān)性(P＜0.05), 而與RF無相關(guān)(P＞0.05)。見表2。

表1 RA組和正常組血清Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平( x-±s, pg/ml)

表2 RA患者血清Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子與各指標(biāo)的相關(guān)性

2.3 RA患者血清Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子之間的相關(guān)分析RA 患者外周血IL-23與 IL-17和IL-6水平均呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r 值分別為 0.929和0.950, P均為0.000), IL-17和IL-6水平之間也呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r值為0.969, P為0.000)。見圖1。

圖1 RA患者血清Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子之間的相關(guān)分析

3 討論

RA是一種慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病, 其主要臨床表現(xiàn)為周圍關(guān)節(jié)滑膜炎, 有持續(xù)及反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn), 在我國(guó)的流行病學(xué)調(diào)查中顯示, RA 的患病率約為 0.32%～0.36%, 嚴(yán)重影響患者工作能力和生活質(zhì)量。人們認(rèn)為RA 發(fā)病可能與遺傳、感染、環(huán)境以及免疫因素有關(guān), 但是其確切發(fā)病機(jī)制還不清楚。多種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的異常表達(dá)在RA的發(fā)病過程中可能發(fā)揮重要作用, 致炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子之間失衡的程度也決定了炎癥嚴(yán)重性和范圍［5］。近年研究發(fā)現(xiàn)：Th17細(xì)胞越來越被認(rèn)為是眾多自身免疫炎癥性疾病發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵因素, 其分泌的細(xì)胞因子在活動(dòng)期及緩解期患者中均有不同程度的表達(dá), 結(jié)論與文獻(xiàn)報(bào)道相近［6］。Th17細(xì)胞可以產(chǎn)生多種細(xì)胞因子參與RA的發(fā)生、發(fā)展過程, 如 IL-17是Th17細(xì)胞主要分泌的細(xì)胞因子, 不但能誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞產(chǎn)生金屬蛋白酶, 抑制軟骨基質(zhì)的形成, 而且能促進(jìn)滑膜血管的增生, 形成血管翳, 加重關(guān)節(jié)的破壞［4］；IL-23能作用于Th17細(xì)胞, 促進(jìn)細(xì)胞的分化、擴(kuò)增以及相關(guān)細(xì)胞因子的分泌, IL-23/Th17軸在自身免疫性疾病中發(fā)揮著重要的作用［5］；IL-6能有效的啟動(dòng)Th17細(xì)胞的分化和增殖［6］。大量研究都集中在RA患者關(guān)節(jié)液中Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子的探討［7］, 關(guān)于RA患者外周血中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的臨床意義和應(yīng)用則研究較少。

本研究對(duì)Th17細(xì)胞相關(guān)的重要細(xì)胞因子IL-17、IL-6及IL-23在RA患者和正常對(duì)照患者中進(jìn)行檢測(cè)并分析。結(jié)果顯示：RA患者組(活動(dòng)組和緩解組)較正常對(duì)照組血清IL-17、IL-6及IL-23水平均顯著增高, 這與其他學(xué)者的研究結(jié)果類似［8-10］, 提示 IL-6、IL-23 可能參與了 RA 的疾病發(fā)生發(fā)展及炎癥反應(yīng)過程。

相關(guān)分析顯示：RA患者血清 IL-6水平與DAS28評(píng)分、RF、CRP和ESR均具有一定相關(guān)性；RA患者血清 IL-17水平與DAS28評(píng)分、CRP和ESR均具有一定相關(guān)性, 說明IL-6 和IL-17與病情活動(dòng)有關(guān), 可能作為 RA病情程度檢測(cè)的指標(biāo), 這與國(guó)外相關(guān)研究結(jié)論是一致的。值得一提的是：本研究結(jié)果顯示血清IL-23水平與DAS28評(píng)分和ESR具有一定相關(guān)性, 而與RF和CRP無關(guān), 說明 IL-23 細(xì)胞因子水平的升高在一定程度上可以反映疾病活動(dòng)狀態(tài), 這與潘禹錚［11］研究 RA 患者的 IL-23 與 ESR、CRP 及 DAS28評(píng)分等均無明顯相關(guān)關(guān)系的結(jié)果不同, 這也可能是因?yàn)椴±龜?shù)不同、患者所處活動(dòng)期不同所致, 還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

RA 患者外周血IL-23 水平、IL-17 水平、IL-6 水平之間互為明顯正相關(guān)關(guān)系, 表明三項(xiàng)指標(biāo)的增高可能有一定的因果關(guān)系, 提示在 RA 病情的發(fā)生發(fā)展過程中, 三項(xiàng)指標(biāo)與RA 患者的病情密切相關(guān), 提示臨床醫(yī)生在診療該類患者時(shí),參考上述細(xì)胞因子水平, 有助于 RA 患者病情的診療的分期。

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Clinical expressions of related cytokines of Th17 cell in rheumatoid arthritis patients

LU Yang-guang, YU Zhi-hui, ZHENG Ming-jiang.Foshan City the Fifth People’s Hospital, Foshan 528211, China

Objective To investigate expressions of related cytokines interleukin-17 (IL-17), interleukin-6 (IL-6), interleukin-23 (IL-23) of Th17 cell in rheumatoid arthritis (RA).Methods Enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA) was applied in serum IL-17, IL-6, IL-23 levels in activity group (35 RA patients), relief group (35 RA patients), and control group (30 healthy people).Analysis was made on their relationship with activity and laboratory index.Results The activity group and relief group had much higher serum IL-23 and IL-6 levels than the control group (P＜0.05), and the difference between activity group and relief group had statistical significance (P＜0.05).The activity group and relief group had much higher serum IL-17 level than the control group (P＜0.05), while the difference between relief group and control group had no statistical significance (P＞0.05).Serum IL-17, IL-6, and IL-23 levels had positive correlations with every other one in RA patients.Conclusion Related cytokines IL-17, IL-6, IL-23 of Th17 cell all play important roles in occurrence and development of RA, and those can act as referring indicators for RA activity.

Rheumatoid arthritis; Th17 cell; Interleukin-17; Interleukin-6; Interleukin-23

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.001

2015-04-13］

佛山市衛(wèi)生局課題(項(xiàng)目編號(hào)：2014097)

528211 佛山市第五人民醫(yī)院