耐苯唑西林凝固酶陰性葡萄球菌的檢測

張海

【摘要】??目的???研究我院耐苯唑西林凝固酶陰性葡萄球菌的感染現(xiàn)狀和耐藥情況，為臨床醫(yī)生合理使用抗生素提供實驗依據(jù)。方法??按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行常規(guī)細菌分離培養(yǎng)，應用湖南天地人生物科技有限公司提供的微生物生化藥敏試劑卡片進行菌種鑒定，藥敏試驗采用紙片擴散（K-B）法，苯唑西林瓊脂篩選法確證試驗。?結果??共檢測CNS206株，以溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌為主要菌種，耐苯唑西林株檢出率56.9%。?結論??加強MRCNS的分布及耐藥性的監(jiān)控，對臨床治療及抗生素的合理應用意義重大。?【關鍵詞】??耐苯唑西林凝固酶陰性葡萄球菌??耐藥??????????凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）一般認為無致病性，因而對CNS感染的監(jiān)測不夠重視。近年來經(jīng)過醫(yī)院感染調研發(fā)現(xiàn)耐苯唑西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRCNS）造成的醫(yī)院感染病例顯著增多，對苯唑西林和萬古霉素的最小抑菌圈（MIC）水平亦逐年增高。MRCNS已經(jīng)引起人們的關注。通過探討MRCNS所致醫(yī)院感染的特點，耐藥性以及醫(yī)院感染的高發(fā)區(qū)和易感人群，為臨床診治提供依據(jù)，指導臨床合理使用抗生素。?????????1??材料和方法?????????1.1??標本的來源：?????????醫(yī)院感染患者各種標本，包括痰，傷口分泌物，中段尿，血液，泌尿生殖道排泄物中分離出凝固酶陰性的葡萄球菌株260株。?????????1.2??材料：?????????由湖南天地人生物科技有限公司提供的生化鑒定卡片以及由英國OXOID公司提供的苯唑西林（OXA）藥敏紙片。?????????1.3??質控品：?????????質控標準參考菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923，ATCC29213。?????????1.4??方法：?????????1.4.1??所有送檢標本按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行常規(guī)細菌培養(yǎng)，應用湖南天地人生物科技有限公司提供的微生物生化，藥敏試劑卡鑒定臨床標本到種。?????????1.4.2??OXA瓊脂紙片擴散（K-B）法：操作按NCCLS規(guī)定用頭孢西丁藥敏紙片（含量30微克/片）做藥物敏感性測定，藥敏平板放置35度24小時判讀結果，執(zhí)行NCCLS（2001年）標準凝固酶陰性葡萄球菌抑菌環(huán)直徑<=24毫米判定為耐藥（R），判讀時注意用透射光檢查抑菌環(huán)內有無耐藥菌株或薄菌膜，防止漏檢。?????????1.4.3??苯唑西林瓊脂篩選法確證試驗：選常規(guī)細菌培養(yǎng)物中可疑菌落接種到含有1.75微克/毫升OXA并添加4%NaCl的M-H瓊脂板上，接種菌液濃度為0.5麥氏比濁標準，接種量為一白金耳置于30-35度之間孵育24小時后觀察有無細菌生長。任何形式的菌落生長都表示對苯唑西林耐藥，在OXA瓊脂平上生長的凝固酶陰性葡萄球菌則為MRCNS。?????????2??結果?????????2.1??MRCNS菌株分離及分布?見表1：?????????菌種共測定CNS?260株，其中MRCNS148株，陽性檢出率59.6%。菌株分布以溶血葡萄球菌和表皮葡萄球菌為主。

細菌名稱?????株數(shù)?? 構成比（%）?????????溶血葡萄球菌??68??????45.9?????????表皮葡萄球菌??45??????30.4?????????人型葡萄球菌??20??????13.5?????????模仿葡萄球菌??8????????5.4?????????頭部葡萄球菌??5????????3.4?????????孔氏葡萄球菌??2????????1.4?????????2.2??MRCNS發(fā)生的部位分布?見表2：?????????MRCNS感染的部位最多的是泌尿生殖道，其次是呼吸道、中段尿，傷口分泌物，血液。感染的高發(fā)區(qū)是外科，其次是呼吸科、老干科、ICU、腫瘤科等。有青霉素過敏史者占相當?shù)谋壤?5%）。男性患者多于女性患者（男：女=105：43）。年齡分布上來看，各個年齡階段的患者都有。泌尿生殖道感染患者多見于中青年，占92%;呼吸道感染者以老年人為主，65歲以上者占83%。

感染的部位???構成比（%）?????????泌尿生殖道????????59?????????呼吸道????????????21?????????中段尿????????????12?????????傷口分泌物????????6?????????血液??????????????2?????????2.3?MRCNS醫(yī)院感染及耐藥特點：MRCNS感染常為多重感染：（1）多部位感染：如泌尿生殖道和呼吸道同時檢出MRCNS，傷口和中段尿同時感染MRCNS，或者是傷口和呼吸道同時感染，成為院內感染的一大特點。多器官感染約占MRCNS感染者的33%?（2）?兩種以上菌感染：MRCNS往往與MRSA等其他陽性菌構成多重感染?；蚺c產ESBLs的大腸埃希菌，綠膿假單胞。（3）多重耐藥：MRCNS菌株不僅對青霉素類，同時對多種抗生素耐藥。??????????2.4?菌等陰性菌構成混合感染，而且這些菌株多同為耐藥菌株。

見表3?：260株CNS的耐藥率?????????藥物?????????耐藥株??耐藥率（%）?????????青霉素??????242????????93.0?????????頭孢唑啉????140????????54.0?????????阿米卡星????77?????????29.6?????????慶大霉素????112????????43.0?????????諾氟沙星????127????????49.0?????????復方磺胺????181????????69.5?????????萬古霉素?????0???????????0?????????美洛培南????46?????????17.9?????????從表3可見，在260株CNS中，對青霉素的耐藥性最高，為93.0%，?其次是復方磺胺（69.5%），頭孢唑啉（54%），所有菌株對萬古霉素敏感。?????????3??討論?????????葡萄球菌是人體最常見的細菌，凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）一般認為是不致病的，但近幾年對醫(yī)院感染的調查研究表明，MRCNS是典型的醫(yī)院感染菌如果在醫(yī)院造成流行則很難控制，致死率很高，據(jù)國外資料統(tǒng)計，MRCNS的致死率可高達18.8%-57%。研究人員為葡萄球菌的耐藥性提供了新的解釋，認為有抗藥性的葡萄球菌能產生一種由mecA基因編碼，低親和力多功能的蛋白質PBP2a，而取代固有的青霉素結合蛋白PBPs，或者PBPs被修飾而使細菌逃避了β內酰胺類藥物對細菌細胞壁的攻擊，除了人們比較重視的金黃色葡萄球菌（SA）外，凝固酶陰性葡萄球菌同時也有帶PBP2a的菌株。另外還有一類耐藥制可產生高水平的β內酰胺酶導致耐藥。由于MRS的顯著特點是異質性耐藥，造成表型檢測的復雜性。目前對MRCNS的檢測手段大致有四種：基因檢測，Etest法，K-B法和瓊脂篩選法等，受多種因素影響，檢測手段不一致，判斷標準也不一致。而瓊脂篩選法可作為“金標準”，此法簡便，易行，不需特殊設備，減少病人負擔，可將MRCNS的漏診率降到最低水平，為臨床診治和醫(yī)院感染監(jiān)測提供可靠依據(jù)。從MRCNS感染高發(fā)區(qū)和高發(fā)人群來看，常常由于介入性診療，腸道外營養(yǎng)，長期大量使用抗生素等。不合理用藥經(jīng)驗用藥，不恰當?shù)厥褂忙聝弱０奉愃幬?，可能選擇出MRCNS，對青霉素過敏，慢性炎癥治療過程中更易出現(xiàn)選藥不合理或濫用問題。從患者方面由于病人年老體弱，長期勞累，血液病，接受化療，肌體免疫力，抵抗力下降等原因，易導致醫(yī)源性感染的發(fā)生，對于上述易感個體應特別注意預防和監(jiān)測MRCNS機會感染，對耐藥的漏診比誤診造成的危害更大，后果更嚴重?。因此，臨床醫(yī)生應重視細菌耐藥監(jiān)測結果，參照藥敏試驗結果合理選用抗生素，以降低細菌耐藥性的產生。