TGF-β1和PAI-1在老年IgA腎病患者中的表達(dá)及意義

樊 平 梁新華 鄒 川 劉旭生

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院腎病科，廣東 廣州 510120)

IgA腎病是最常見(jiàn)的一種原發(fā)性腎小球疾病〔1〕，老年人發(fā)生IgA腎病的比例約為1.7%，且其發(fā)病率正在逐年升高〔2～4〕。然而目前研究并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)老年IgA腎病典型的病理特點(diǎn)，這給老年IgA腎病的診斷帶來(lái)一定的困難。目前關(guān)于老年IgA腎病患者轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1和纖溶酶原激活物抑制物(PAI)-1水平變化的研究較少。本研究觀察TGF-β1和PAI-1在老年IgA腎病患者腎臟組織、血液及尿液中的水平，為老年IgA腎病診斷提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年1月至2013年1月在我院住院的老年IgA腎病患者30例，男15例，女15例;年齡60～71歲，平均(64.5±5.3)歲。選取同期在本院住院的青少年IgA腎病患者30例〔男16例，女14例，年齡15～30歲，平均(24.8±11.2)歲〕以及門(mén)診體檢健康的青少年〔男15例，女15例，年齡15～30歲，平均(25.4±12.3)歲〕、老年人〔男15例，女15例;年齡60～70歲，平均(65.1±4.9)歲〕各30例，作為血液和尿液TGF-β1和PAI-1水平檢測(cè)的對(duì)照組。另選取5例〔男性3例，女性2例，年齡19～65歲，平均(38.6±22.1)歲〕腦死亡的尸體腎組織作為腎組織TGF-β1和PAI-1水平檢測(cè)的對(duì)照組，腎組織取材時(shí)間均在離體后12 h內(nèi)，經(jīng)光鏡及免疫熒光檢查均未見(jiàn)異常。所有IgA腎病患者均經(jīng)B超引導(dǎo)腎穿刺活檢術(shù)證實(shí)為原發(fā)性IgA腎病，入選者均未使用過(guò)激素、細(xì)胞毒藥物等免疫抑制劑，并排除系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過(guò)敏性紫癜及各型肝病所致的繼發(fā)性IgA腎病。根據(jù)老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量，將其分為 I組(尿蛋白＜25 mg·24 h－1·kg－1)、Ⅱ組(尿蛋白 25 ～ 50 mg· 24 h－1·kg－1)和 Ⅲ 組 (尿 蛋 白 ＞50 mg·24 h－1·kg－1);根據(jù) Lee 組織學(xué)分級(jí)系統(tǒng)〔5〕將老年 IgA腎病患者分為Ⅰ～Ⅴ級(jí)。

1.2 樣品采集 清晨空腹抽取所有研究對(duì)象外周靜脈血3 ml，3 000 r/min離心20 min，收集上層血清置于－80℃冰箱中備用。采用尿杯留取清潔中段晨尿，置于15 ml離心管中，3 000 r/min離心20 min，收集上清置于－80℃冰箱中備用。留取30例老年IgA腎病患者活檢組織標(biāo)本備用。

1.3 血液及尿液 TGF-β1和 PAI-1水平檢測(cè) 血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平檢測(cè)的ELISA試劑盒購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 小鼠抗人TGF-β1單克隆抗體(1∶200)及兔抗人PAI-1多克隆抗體(1∶100)均購(gòu)自Santa Cruz公司。具體免疫組織化學(xué)染色步驟參見(jiàn)文獻(xiàn)〔6〕報(bào)道。結(jié)果采用CMIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0軟件，計(jì)量資料采用x±s表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 腎臟組織TGF-β1和PAI-1水平分析 與健康青少年(A組)和健康老年人(B組)相比，青少年IgA腎病患者(C組)及老年IgA腎病患者(D組)腎臟組織TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平均顯著升高(P＜0.05)，且老年IgA腎病患者腎臟組織TGF-β1和PAI-1水平顯著高于青少年IgA腎病患者(P＜0.05)。A組和B組相比，腎臟組織TGF-β1和PAI-1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)圖 1。

圖1 各組腎組織TGF-β1和PAI-1表達(dá)

2.2 血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平分析 與A組和B組相比，C組及D組血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平均顯著升高(P＜0.05)，且D組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平顯著高于C組(P＜0.05)，A組和B組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 4組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較 (pg/ml，x±s，n=30)

2.3 老年IgA腎病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組TGF-β1和PAI-1在腎組織中的表達(dá) 隨著老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量升高，其腎組織中TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平逐漸升高(P＜0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2 老年IgA胃病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組腎組織TGF-β1和PAI-1表達(dá)

2.4 老年IgA腎病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較 隨著老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量升高，其血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平逐漸升高(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 老年IgA腎病患者不同水平24 h尿蛋白定量亞組血液及尿液 TGF-β1、PAI-1水平比較(pg/ml，x±s)

2.5 老年IgA腎病患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組TGF-β1和PAI-1表達(dá)分析 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)老年IgA腎病患者腎組織TGF-β1和PAI-1表達(dá)未見(jiàn)明顯差異，Ⅳ、Ⅴ級(jí)老年IgA腎病患者腎組織TGF-β1和PAI-1表達(dá)未見(jiàn)明顯差異;而Ⅳ、Ⅴ級(jí)老年IgA腎病患者腎組織TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)老年IgA腎病患者(P＜0.05)。見(jiàn)圖3。

圖3 老年IgA腎病患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組腎組織 TGF-β1和PAI-1表達(dá)

2.6 老年IgA腎病患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組血液及尿液TGF-β1和PAI-1水平比較 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)老年IgA腎病患者血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平未見(jiàn)明顯差異，Ⅳ、Ⅴ級(jí)老年IgA腎病患者血液及尿液TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平未見(jiàn)明顯差異;而Ⅳ、Ⅴ級(jí)老年 IgA腎病患者血液及尿液 TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平顯著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 老年IgA腎病患者不同組織學(xué)分級(jí)亞組血液及尿液 TGF-β1、PAI-1 水平比較(pg/ml，x±s)

3 討論

本研究結(jié)果表明IgA腎病患者腎臟組織、血液及尿液中TGF-β1和PAI-1水平顯著升高。文獻(xiàn)報(bào)道，TGF-β1可抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腎臟組織纖維化的發(fā)生〔6〕。PAI-1表達(dá)上調(diào)可使腎小球內(nèi)纖維蛋白沉積，抑制系膜基質(zhì)的降低〔7〕，且PAI-1可促進(jìn)腎小管間質(zhì)纖維化〔8〕，參與IgA腎病的發(fā)生。

文獻(xiàn)〔1〕報(bào)道老年IgA腎病患者與非老年IgA腎病患者相比，其24 h尿蛋白定量明顯升高，且Lee組織學(xué)分級(jí)I級(jí)人數(shù)明顯低于非老年IgA腎病患者，提示與非老年IgA腎病患者相比，老年IgA腎病患者的病情較嚴(yán)重。結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，本研究結(jié)果提示TGF-β1和PAI-1在老年IgA腎病患者疾病進(jìn)展中發(fā)揮了重要的作用。

進(jìn)一步對(duì)老年IgA腎病患者根據(jù)其24 h尿蛋白定量及Lee組織學(xué)分級(jí)進(jìn)行分組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著老年IgA腎病患者24 h尿蛋白定量和組織學(xué)分級(jí)的升高，其腎臟組織、血液及尿液中TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平逐漸升高。該結(jié)果進(jìn)一步提示TGF-β1和PAI-1確實(shí)在老年IgA腎病患者疾病進(jìn)展中發(fā)揮了重要的作用。

綜上所述，老年IgA腎病患者腎臟組織、血液和尿液中TGF-β1和PAI-1表達(dá)水平均顯著升高，且與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，可作為老年IgA腎病輔助診斷及判斷疾病進(jìn)展的手段之一。

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