聯(lián)合放化療對鼻咽癌患者淋巴細胞亞群影響的觀察

劉斌，劉麗霞，臧愛民，馬濤，王萍，張永剛

（1. 河北大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河北 保定 071000；2. 河北大學(xué)附屬醫(yī)院功能科，河北 保定 071000；3. 保定市第一中心醫(yī)院腫瘤外科，河北 保定 071000；4. 保定市第一中心醫(yī)院質(zhì)管科教科，河北 保定 071000；5. 河北大學(xué)附屬醫(yī)院（北院）頭頸外科，河北 保定 071000）

聯(lián)合放化療對鼻咽癌患者淋巴細胞亞群影響的觀察

劉斌1，劉麗霞2，臧愛民1，馬濤3，王萍4，張永剛5

（1. 河北大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河北 保定 071000；2. 河北大學(xué)附屬醫(yī)院功能科，河北 保定 071000；3. 保定市第一中心醫(yī)院腫瘤外科，河北 保定 071000；4. 保定市第一中心醫(yī)院質(zhì)管科教科，河北 保定 071000；5. 河北大學(xué)附屬醫(yī)院（北院）頭頸外科，河北 保定 071000）

目的 觀察鼻咽癌患者同步放化療前、后的細胞免疫功能變化，以探討聯(lián)合放化療對鼻咽癌患者免疫功能的影響。方法 應(yīng)用FACS Calibur流式細胞儀對60例鼻咽癌患者和60名健康體檢者同步放化療前、后外周血T、B淋巴細胞亞群進行檢測，并分別對健康體檢者與鼻咽癌患者同步放化療前、鼻咽癌患者同步放化療前與放化療后的檢測值進行比較。結(jié)果 鼻咽癌患者放療前與健康體檢者對比，CD3+、CD16+56+和CD19+均值差異無統(tǒng)計學(xué)意義，t值分別為1.567、0.971和1.561，P 值分別為0.078、0.392和0.240；CD4+、CD4+/CD8+均值下降差異有統(tǒng)計學(xué)意義，t值分別為2.389和2.358，P 值分別為0.013和0.027；CD8+均值升高差異有統(tǒng)計學(xué)意義，t=-2.342，P=0.019。鼻咽癌患者同步放化療后與放化療前對比，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均值明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，t值分別為-7.163、-11.217和3.817，P 值均＜0.01；CD8+與CD16+56+均值明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，t值分別為-8.271和4.383，P 值分別為0.01和0.001；CD19+均值差異無統(tǒng)計學(xué)意義，t=-0.986，P=0.323。結(jié)論 鼻咽癌患者免疫功能下降，外周血T、B淋巴細胞亞群的檢測對判斷患者的免疫功能有參考作用。

鼻咽癌；放射療法；藥物療法；T細胞亞群；流式細胞術(shù)

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）主要是指由于地域、環(huán)境因素及EB病毒感染影響發(fā)生在鼻咽腔頂部和（或）側(cè)壁發(fā)生的惡性腫瘤，具有遺傳傾向性。目前，鼻咽癌治療的標(biāo)準(zhǔn)模式是放療聯(lián)合同期化療，但在同步放化療過程中最主要的毒副作用就是免疫抑制，這種免疫抑制直接影響患者機體的免疫功能，降低患者的生活質(zhì)量及治療依從性，使得患者不能堅持放化療，進而中斷治療而影響臨床治療效果[1-3]。另外，免疫抑制理論上又會潛在增加鼻咽癌患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。因此，對鼻咽癌患者在放化療過程中進行免疫系統(tǒng)功能動態(tài)監(jiān)測就顯得尤為必要。在識別及清除腫瘤細胞方面，T淋巴細胞介導(dǎo)的細胞免疫發(fā)揮著主導(dǎo)作用，同時也作為人體抗腫瘤免疫方面十分重要的一環(huán)。評價細胞免疫功能的指標(biāo)主要是淋巴細胞亞群，這也是腫瘤免疫監(jiān)測重要評價指標(biāo)[4]。本研究旨在通過觀察同步放化療前后對60例鼻咽癌初診患者和60例健康體檢者外周血淋巴細胞亞群的變化，來探討其對機體免疫功能的影響，并為制定合理的鼻咽癌免疫治療方案提供臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月至2014年12月河北大學(xué)附屬醫(yī)院收治的60例鼻咽癌患者，均經(jīng)病理明確診斷，具有完整臨床資料及并未行任何治療。將此60例患者作為治療組，其中男性患者39例，女性患者21例，年齡27～69歲，中位年齡43歲；臨床分期（根據(jù)2008中國鼻咽癌分期標(biāo)準(zhǔn)）：Ⅱ期13例，Ⅲ期29例，Ⅳ18例，Karnofsky評分60～85。另外選取同期進行體檢的60例健康患者作為對照組，其中男性患者41例，女性患者19例，年齡26～68歲，中位年齡46歲。兩組患者的一般資料方面（年齡、性別等）差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 治療方法

首先對所有鼻咽癌患者進行標(biāo)準(zhǔn)化的鼻咽癌根治性放射治療即原發(fā)病灶常規(guī)體外照射加頸淋巴結(jié)預(yù)防性或根治性外照射，為期6周。主要分兩步，先進行鼻咽部病灶常規(guī)照射，再對頸部淋巴結(jié)進行預(yù)防性放療；治療的總劑量為鼻咽部64～68 Gy/(35～39)次，頸部(N1-3)65～70 Gy/(33～36)次，頸部(N0)51～55 Gy /(25～28)次。另外，所有患者均行同步化療，化療在放療中第1周和第5周進行，采取“順鉑、氟尿嘧啶”方案，所有患者均完成2個周期化療。

1.3 外周血淋巴細胞亞群檢測

所有患者均于治療前及治療結(jié)束4周后采晨起空腹靜脈血，應(yīng)用流式細胞儀對患者外周血的分別進行T淋巴細胞亞群檢測（CD3+、CD4+、CD8+）、NK細胞檢測（CD16+56+）、 CD4+/CD8+及B細胞（CD19+）檢測。采用的流式細胞儀為美國Becton Dickinson公司（BD公司）生產(chǎn)，所用試劑盒亦由BD公司提供。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，計數(shù)資料采用χ2檢驗，組間比較采用配對設(shè)計的t檢驗進行數(shù)據(jù)分析。以P＜0.05代表差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌患者和正常人淋巴細胞亞群的比較

鼻咽癌患者放療前與對照組的CD3+水平、CD16+56+ 水平、CD19+水平比較結(jié)果分別為（t=1.567, P=0.078)、(t=0.971, P=0.392)、(t=1.561, P=0.240），差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。鼻咽癌患者放療前與對照組的CD4+水平、CD4+/CD8+水平、CD8+水平比較結(jié)果分別為(t=2.389, P=0.013)、(t=2.358, P=0.027)、(t=-2.342 7, P=0.019)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（表1）。

表1 鼻咽癌患者和對照組淋巴細胞亞群的比較%

2.2 鼻咽癌患者放化療前后淋巴細胞亞群的水平變化比較

鼻咽癌患者放化療后患者與治療前CD3+水平、CD4+水平、CD4+/CD8+水平、CD8+水平、CD16+56+水平比較結(jié)果為（t=-7.163, P＜0.01）、（t=-11.217, P＜0.01）、（t=3.817, P=0.000）、（t= -8.271, P＜0.01）、（t=4.383, P=0.001）差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。鼻咽癌患者放化療后患者與治療前CD19+水平比較結(jié)果為（t=-0.986 0, P=0.323），差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（表2）。

表2 鼻咽癌患者放化療前后淋巴細胞亞群的水平變化比較%

3 討論

目前，鼻咽癌的治療手段主要是同步放化療治療。相較其他頭頸部腫瘤，即使鼻咽癌患者經(jīng)過系統(tǒng)及時的根治性同步放療聯(lián)合化療，仍有部分鼻咽癌患者發(fā)生復(fù)發(fā)甚至轉(zhuǎn)移。據(jù)文獻報道，晚期鼻咽癌患者的復(fù)發(fā)率更高[5]，可以說鼻咽癌的復(fù)發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移也是導(dǎo)致治療失敗和死亡的首要原因。在同步放化療過程中，鼻咽癌患者的免疫功能均受到不同程度的免疫抑制，而免疫功能的下降是否增加了鼻咽癌患者遠處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，是一個亟待了解卻未被充分了解的問題。

人體的免疫功能水平在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)過程中發(fā)揮著重要作用。細胞免疫是腫瘤免疫反應(yīng)的主要部分，其中淋巴細胞的主要組分是T細胞，其在腫瘤免疫中發(fā)揮著中心調(diào)控的作用。如果機體T細胞各亞群的比例和數(shù)量發(fā)生異常，可導(dǎo)致機體免疫功能紊亂，從而不能發(fā)揮其抗腫瘤作用，其中反映機體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)主要是CD4+/CD8+比值。通常CD4+/CD8+比值在機體內(nèi)處于一個相對平衡狀態(tài)，并保持機體免疫內(nèi)環(huán)境處于一個相對穩(wěn)定狀態(tài)。而當(dāng)機體免疫功能下降時，其CD4+/CD8+比值就會低于正常值。王漢姣研究發(fā)現(xiàn)，局部晚期鼻咽癌患者在治療前CD4+、CD4+/CD8+水平均較健康者明顯降低[6]; 程霞等研究發(fā)現(xiàn)，CD4+/CD8+比值可能與鼻咽癌的預(yù)后存在密切的相關(guān)，即鼻咽癌患者的CD4+/CD8+比值下降越明顯，其發(fā)生局部復(fù)發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移可能性就越高[7]。本研究中，與正常人群對比，鼻咽癌患者放化療前的CD4+水平和CD4+/CD8+比值均出現(xiàn)明顯下降。這提示較健康人群相比，鼻咽癌患者出現(xiàn)了免疫功能紊亂、免疫失調(diào)。

同步放化療是治療鼻咽癌不可或缺的重要手段。不容忽視的是同步放化療過程中在對腫瘤細胞的殺滅同時，機體正常的免疫細胞也損失，從而影響機體免疫功能。本研究中，鼻咽癌患者同步放化療前后的CD3+水平、CD4+水平和CD4+/CD8+比值均明顯下降。從中提示放射治療可能存在抑制淋巴細胞增殖功能的作用。故在放射治療中可通過加強營養(yǎng)與支持治療,或者給予免疫增強劑的治療等方法提高鼻咽癌療效,減輕不良反應(yīng)。本研究對鼻咽癌患者采用同步放化療治療方案，究竟是放（化）療單獨的抑制作用或是兩者共同作用使患者機體免疫功能下降尚不明確。需要補充說明的是本研究只檢測其T細胞亞群百分率，如果通過直接檢測淋巴細胞亞群的絕對值更能反映其實際儲備情況。因此為更好地為臨床提供更豐富、有價值的信息，建議檢測T細胞亞群時同時對其百分率及其絕對值同時檢測[8]。

總之，檢測鼻咽癌患者聯(lián)合放化療前后T淋巴細胞亞群的比率，能夠幫助醫(yī)護人員及時有效地了解患者機體免疫功能。特別是監(jiān)測CD4+/CD8+比值變化，為臨床治療及評價預(yù)后提供依據(jù)。鑒于本研究樣本量小，觀察時間較短，患者機體T淋巴細胞亞群的改變與生存率變化及相關(guān)預(yù)后的相關(guān)性仍需進一步研究。

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(責(zé)任編輯：喬艷華)

Observation of influence of radiotherapy and chemotherapy on T Lymphocytes subsets in patients with nasopharyngeal carcinoma

LIU Bin1, LIU Lixia2, ZANG Aimin1, MA Tao3, WANG Ping4, ZHANG Yonggang5
(1. Department of Oncology, Affiliated Hospital of Hebei University, Hebei Baoding 071000; 2. Functions Branch, Affiliated Hospital of Hebei University, Hebei Baoding 071000; 3. surgical Department Baoding NO.1 central Hospital, Hebei Baoding 071000; 4. Department of Education Baoding NO.1 central Hospital, Hebei Baoding 071000; 5. surgical Department, Affliated Hospital of Hebei University(North), Hebei Baoding 071000)

Objetive To explore the relationships between changes of immune functions in patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC)pre-chemoradiotherapy and post-chemoradiotherapy. Methods The flow cytometry(FACS Calibur) was used to detect the blood T, B Lymphocytes subsets of 60 healthy check-ups and60 NPC patients before and after chemoradiotherapy. The immune indexes of changes before and after the radiotherapy were analyzed and their test values were compared. Results There were no signifcant differences in CD3+, CD16+56+, CD19+(t were 1.567; 0.971; 1.561, P were 0.078; 0.392; 0.240)between the healthy check-ups and the NPC patients before chemoradiotherapy. CD4+、CD4+/CD8+ had a downward trend(t were 2.389; 2.358, P were 0.01, 0.01)while CD8+ had an upward trend (t=-2.342, P=0.019), which was statistically significant. CD3+, CD4+, CD4+/CD8+ were significantly different before and after the chemoradiotherapy, CD3+, CD4+, CD4+/CD8+ gradually down, which had signifcant differences(t were -7.163, -11.217, 3.817, P＜0.01); CD8+, CD16+56+ gradually up,which had signifcant differences(t were -8.271, 4.383, P were 0.01, 0.001).There was no signifcant difference in CD19+ (t=-0.986, P=0.323).Conclusions The immune functions get lower in the NPC patients after chemoradiotherapy and can be estimated by the test of the blood T, B Lymphocytes subsets.

nasopharyngeal; radiotherapy; surgery; T lymphocytesubsets; flow cytome-try

10.3969/j.issn.1674-490X.2015.05.011

R445

A

1674-490X(2015)05-0042-04

本文引用：劉斌, 劉麗霞, 臧愛民, 等. 聯(lián)合放化療對鼻咽癌患者淋巴細胞亞群影響的觀察[J].醫(yī)學(xué)研究與教育, 2015, 32(5): 42-45.

2015-09-01

保定市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計劃項目（112F015）

劉斌（1981—），男，河北保定人，主治醫(yī)師，碩士，主要從事惡性腫瘤放化療及分子靶向治療E-mial: 401929599@qq.com