免疫組化技術(shù)和常規(guī)技術(shù)在腫瘤病理診斷中的效果對(duì)比

姬國(guó)強(qiáng)

河南省平頂山市第二人民醫(yī)院病理科，河南平頂山 467000

腫瘤是臨床上常見(jiàn)的疾病，這種疾病發(fā)病率較高，且隨著人們生活節(jié)奏的加快，其發(fā)病率出現(xiàn)上升趨勢(shì)，患者發(fā)病后臨床癥狀不顯著，患者一旦確診已經(jīng)是中、晚期，從而錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)[1]。目前，臨床上對(duì)于腫瘤尚缺乏理想的診斷方法，常規(guī)方法更多的是以CT、磁共振成像等診斷方法為主，這種方法雖然能夠確診，但是誤診率或漏診率較高。近年來(lái)，病理診斷在腫瘤診斷中應(yīng)用廣泛，且效果理想，但是臨床上對(duì)于病理診斷中不同技術(shù)尚存在較大的爭(zhēng)議[2]。常規(guī)技術(shù)主要以活檢穿刺診斷為主，這種方法雖然可以確定病灶類型、分期等，但是患者痛苦較大。當(dāng)前，免疫組化技術(shù)在病例診斷中開始使用，且該技術(shù)已經(jīng)融合了抗原修復(fù)技術(shù)、自動(dòng)免疫染色系統(tǒng)以及敏感檢測(cè)系統(tǒng)等[3]。為了探討免疫組化技術(shù)和常規(guī)技術(shù)在病理診斷中的臨床診斷效果，對(duì)2013年4月～2014年4月我院收治的56例腫瘤患者的資料進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)我院收治的56例腫瘤患者的資料進(jìn)行分析，其中15例為肝癌，35例為轉(zhuǎn)移性腫瘤，4例為內(nèi)膽管癌，2例為血管瘤。根據(jù)不同病理診斷方法將患者分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組28例，男11例，女17例，年齡 24.5～71.3 歲，平均（45.6±2.4）歲，患者從發(fā)病到入院診斷時(shí)間為 1.1～7.9 個(gè)月，平均（4.2±1.1）個(gè)月；對(duì)照組28例，其中男25例，女3例，年齡25.3～74.7歲，平均（47.4±0.9）歲，患者從發(fā)病到入院診斷時(shí)間為1.2～7.8個(gè)月，平均（4.4±1.6）個(gè)月。兩組患者年齡、病程等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性?；颊邔?duì)診斷方案、護(hù)理措施等均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照組 對(duì)照組采用活檢穿刺法診斷，根據(jù)病灶類型、病灶位置等進(jìn)行針對(duì)性的穿刺活檢，活檢過(guò)程在超聲下進(jìn)行，取出組織與標(biāo)準(zhǔn)組織進(jìn)行比較[4]。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)組 實(shí)驗(yàn)組采用免疫組化技術(shù)診斷，所用試劑主要包括：甲醛固定液、透明液、脫水液、蒸餾水、浸蠟液、樹膠及Ultrasen SitiveTMSP試劑[5]。具體診斷操作為：取一塊患者組織，組織大小為1 cm×2 cm×0.2 cm。將其充分浸泡在甲醛溶液中，浸泡時(shí)間控制在2 h，然后采用透明液透明1 h，脫水液脫水1 h，浸蠟液浸泡1 h，將組織埋在石蠟內(nèi)，常規(guī)切片，厚度控制在2μm；將切片好的組織進(jìn)行免疫組化染色，采用3%過(guò)氧化氫溶液在37℃孵育10 min，采用蒸餾水沖洗3 min，采用高壓鍋修復(fù)2 min（溫度控制在110℃），采用PBS洗滌5 min，常溫下孵育2 h，使用PBS洗滌，加入U(xiǎn)ltrasen SitiveTMSP試劑，孵育后DBA顯色，最后使用樹膠進(jìn)行封固[6-7]。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷，包括甲胎蛋白（AFP）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3）等，組織免疫組化技術(shù)染色呈棕黃色為陽(yáng)性，反之則為陰性[8]。采用我院自擬問(wèn)卷調(diào)查表對(duì)患者診斷后相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分，包括心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感等，評(píng)分越高，表示檢查方法對(duì)患者產(chǎn)生的影響越小，檢查依從性越高。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組診斷陽(yáng)性率及滿意度的比較

實(shí)驗(yàn)組免疫組化染色后，患者細(xì)胞結(jié)構(gòu)為變異型，AFP及glypican-3表達(dá)異常者為24例，陽(yáng)性率為85.7%，顯著高于對(duì)照組（14例，50.0%）；實(shí)驗(yàn)組滿意率為82.1%，顯著高于對(duì)照組（57.1%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表 1）。

表1 兩組診斷陽(yáng)性率及滿意度的比較[n（%）]

2.2 兩組診斷后相關(guān)評(píng)分的比較

實(shí)驗(yàn)組診斷后心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感評(píng)分均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）（表 2）。

表2 兩組診斷后相關(guān)評(píng)分的比較（分，

表2 兩組診斷后相關(guān)評(píng)分的比較（分，

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3 討論

近年來(lái)，免疫組化技術(shù)被廣泛應(yīng)用于腫瘤患者病理診斷中，且效果理想[9-10]。本研究顯示，實(shí)驗(yàn)組免疫組化染色后，患者細(xì)胞結(jié)構(gòu)為變異型，AFP及glypican-3表達(dá)異常者為24例，陽(yáng)性率為85.7%，顯著高于對(duì)照組（14 例，50.0%）（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組滿意率為82.1%，顯著高于對(duì)照組（57.1%）。免疫組化技術(shù)和常規(guī)技術(shù)相比優(yōu)勢(shì)較多，該方法在診斷過(guò)程通過(guò)觀察組織切片中抗原的數(shù)量級(jí)在組織中的分布情況，對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性以及定量的研究，由于抗原和抗體特異性結(jié)合，因此，臨床上通過(guò)免疫組化來(lái)標(biāo)記抗體使其顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)的抗原[11]。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類：組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本，其中制作組織標(biāo)本中最常用、最基本的方法就是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好，更加有利于各種染色的對(duì)照觀察，有利于切片組織長(zhǎng)時(shí)間保存；同時(shí)，石蠟切片過(guò)程中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)的抗原暴露能夠產(chǎn)生一定的影響，可以對(duì)切片組織進(jìn)行修復(fù)[12]。并且，免疫組化診斷技術(shù)的使用并不會(huì)對(duì)患者產(chǎn)生傷害，能夠消除患者內(nèi)心診斷前的負(fù)面心理，提高患者診斷配合率。

為了有效提高診斷正確率，降低假陽(yáng)性率的發(fā)生，免疫組化技術(shù)使用過(guò)程中必須嚴(yán)格遵循以下步驟操作。①組織固定：對(duì)采集組織固定時(shí)主要使用10%中性緩沖甲醛固定液，這種固定液和其他固定液相比具有固定好、固定時(shí)間長(zhǎng)久等優(yōu)點(diǎn)，并且組織3個(gè)月內(nèi)陽(yáng)性率比較穩(wěn)定。②烤片：對(duì)組織進(jìn)行烤片時(shí)應(yīng)該放置在適宜的溫度，通常放在60～68℃的恒溫箱中進(jìn)行加熱，加熱時(shí)要避免溫度過(guò)高[13]。③抗原修復(fù)：對(duì)組織進(jìn)行抗原修復(fù)時(shí)應(yīng)該控制修復(fù)時(shí)間在8 min，然后斷開，讓切片自然冷卻，然后開始染色。④染色：免疫組化技術(shù)進(jìn)行染色時(shí)應(yīng)該對(duì)蘇木精進(jìn)行反復(fù)染色，避免染色顏色過(guò)深，影響診斷結(jié)果。同時(shí)，免疫組化技術(shù)顯色屬于是一種化學(xué)反應(yīng)——酶促反應(yīng)，該反應(yīng)能夠和抗原-抗體復(fù)合物中的堿性磷酸酶以及過(guò)氧化物酶等發(fā)生反應(yīng)，從而形成有顏色的復(fù)合物，并在組織和細(xì)胞抗原時(shí)間進(jìn)行沉淀。但是，由于腫瘤類型相對(duì)較多，不同組織標(biāo)本來(lái)源不同，其抗原的含量也不同，顯色反應(yīng)時(shí)間上會(huì)存在差異[14]。

因此，免疫組化技術(shù)在進(jìn)行染色時(shí)應(yīng)該注意以下幾個(gè)方面：①染色過(guò)程中必須保持切片處于濕潤(rùn)狀態(tài)；②孵育時(shí)應(yīng)該嚴(yán)格控制孵育盒中蒸餾水量；③孵育時(shí)應(yīng)該保證孵育盒整體的平整，保證抗體液體均勻，避免抗體液體流入組織內(nèi)，降低假陰性的發(fā)生率[15]。同時(shí)，臨床上采用免疫組化技術(shù)診斷時(shí)能夠消除患者內(nèi)心的恐懼、害怕心理，降低患者病理診斷時(shí)的風(fēng)險(xiǎn)，提高患者診斷依從性[16]。本次研究中，實(shí)驗(yàn)組診斷后心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感評(píng)分均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

筆者認(rèn)為，免疫染色組化技術(shù)的正確診斷和鑒定必須依靠免疫組化染色切片作為前提和基礎(chǔ)，診斷時(shí)要加強(qiáng)醫(yī)生和技術(shù)員之間的相互協(xié)調(diào)、相互配合、共同努力才能夠保證免疫組化染色切片的順利完成。但是，臨床上采用免疫染色組化技術(shù)診斷時(shí)尚存在不足，如假陽(yáng)性、假陰性等。臨床上對(duì)于進(jìn)行病理診斷的患者在常規(guī)穿刺的基礎(chǔ)上聯(lián)合免疫組化技術(shù)診斷，可發(fā)揮不同診斷方法的優(yōu)勢(shì)，提高臨床確診率，為患者后續(xù)的診斷、治療等提供科學(xué)依據(jù)。

綜上所述，腫瘤患者進(jìn)行病理診斷時(shí)實(shí)施免疫組化技術(shù)診斷效果理想，能夠有效提高診斷陽(yáng)性率，且診斷時(shí)患者痛苦相對(duì)較小，值得推廣。

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