肖鳳春 張春麗 方 蓉 毛玉萍 倪桂寶
P-STAT3和FHIT在卵巢上皮性腫瘤的表達(dá)及相關(guān)性研究
肖鳳春 張春麗 方 蓉 毛玉萍 倪桂寶
卵巢上皮性腫瘤;P-STAT3;FHIT;表達(dá)
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator of transcription,STATs)蛋白最早是20世紀(jì)90年代初在干擾素誘導(dǎo)的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)過程研究中發(fā)現(xiàn),隨著研究的不斷進(jìn)展發(fā)現(xiàn)STATs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。而STAT3是STATs蛋白家族中最重要的成員,實(shí)體腫瘤中多表現(xiàn)STAT3的異常活化,p-STAT3是其磷酸活化形式,已有大量實(shí)驗(yàn)[1]證實(shí)p-STAT3與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腫瘤、心血管系統(tǒng)等多種疾病的病理生理過程有著密切的關(guān)系。脆性組氨酸三聯(lián)體基因(fragile histidine triad,F(xiàn)HIT)是近年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)抑癌基因,研究[2]顯示,F(xiàn)HIT基因能夠抑制部分腫瘤細(xì)胞的活性。本實(shí)驗(yàn)使用免疫組織化學(xué)方法檢測卵巢上皮性腫瘤組織中p-STAT3和FHIT的表達(dá),分析兩種蛋白的表達(dá)情況與卵巢上皮腫瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系及兩者的相關(guān)性,以探討它們在卵巢上皮性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中所起到的作用。
1.1 病例和組織標(biāo)本選取 選取2004年1月—2014年6月初次手術(shù)且有完整的臨床及病理資料的卵巢上皮性腫瘤患者的存檔石蠟塊,患者術(shù)前均未行化療、放療或生物治療。所有標(biāo)本均重新切片由病理醫(yī)生HE染色確診;卵巢癌組織學(xué)分型參照WHO分型標(biāo)準(zhǔn)[3],確診為卵巢上皮性腫瘤,其中卵巢癌40例,卵巢交界性腫瘤20例,卵巢良性腫瘤20例。卵巢癌根據(jù)組織學(xué)分化程度[3],分為高分化12例和低分化28例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例。
1.2 免疫組織化學(xué)方法檢測 p-STAT3和FHIT的表達(dá)采用過氧化酶標(biāo)記的鏈霉卵白素(S-P)免疫組織化學(xué)方法,經(jīng)脫蠟、水化,抗原修復(fù),滴加過氧化物酶阻斷試劑,滴加第一抗體,滴加生物素標(biāo)記的二抗,DAB顯色,蘇木精復(fù)染,常規(guī)脫水、透明、封固等。
1.3 免疫組化染色結(jié)果半定量分析[4]染色結(jié)果判斷p-STAT3定位于惡性腫瘤細(xì)胞和部分血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞核,F(xiàn)HIT定位于細(xì)胞的胞漿。染色強(qiáng)度:無著色是0分,淺黃色1分,棕黃色2分,棕褐色3分。高倍鏡下每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)作為陽性程度的判斷標(biāo)準(zhǔn):10%以下0分,10%~50%為1分,50%~75%為2分,75%以上為3分。綜合評定結(jié)果為染色強(qiáng)度和染色陽性細(xì)胞的乘積,<3分陰性,≥3分陽性。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),采用Spearman等級相關(guān)分析p-STAT3和FHIT表達(dá)的相關(guān)性,P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
p-STAT3在上皮性卵巢癌中的陽性表達(dá)率為80%,高于交界性腫瘤的60%及良性腫瘤的10%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。FHIT在上皮性卵巢癌中的陽性表達(dá)率為32.5%,低于交界性腫瘤的50%及良性腫瘤的75%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。
表1 三組卵巢組織p-STAT3和FHIT表達(dá)比較[例(%)]
p-STAT3在低分化卵巢癌患者的陽性表達(dá)率為89.3%,高于高分化卵巢癌患者的58.3%,在卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達(dá)率為90.3%,高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的44.4%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。FHIT在低分化卵巢癌患者陽性表達(dá)率為17.9%,低于高分化卵巢癌患者的66.7%,在卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達(dá)率為19.4%,低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的77.8%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。
表2 卵巢癌組織p-STAT3和FHIT陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]
p-STAT3和FHIT蛋白在卵巢癌中的表達(dá)存在顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。
表3 卵巢癌組織p-STAT3和FHIT表達(dá)的相關(guān)性
卵巢癌早期癥狀無特異性,并且易于轉(zhuǎn)移和廣泛播散,是威脅女性生命的常見婦科惡性腫瘤之一,近年來其發(fā)病率呈上升趨勢。癌癥是一種與基因相關(guān)的疾病,致癌基因的激活和抑癌基因的失活,可使細(xì)胞生長和分化的調(diào)節(jié)失控,導(dǎo)致細(xì)胞基因突變,細(xì)胞異常增生而發(fā)生癌變[4]。因此,研究上皮性卵巢癌發(fā)生的分子機(jī)制,對早期診斷卵巢癌及尋找新的有效的治療靶點(diǎn)有重大的現(xiàn)實(shí)意義。
STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路存在于不同類型的細(xì)胞和組織中,參與細(xì)胞的生長、凋亡、惡變等過程的調(diào)控。激活后的p-STAT3以同源或異源二聚體形式移位到胞漿,在靶基因的啟動(dòng)區(qū)與特定的DNA元件結(jié)合,發(fā)揮其生物學(xué)活性[5]。研究[1]表明,細(xì)胞內(nèi)外的刺激均可以激活STAT3,在生理情況下,p-STAT3信號通路的激活是暫時(shí)性的,并處于嚴(yán)密調(diào)控之中。在各種致瘤信號的刺激下,p-STAT3被持續(xù)活化、恒定表達(dá),將來自各種途徑的腫瘤性酪氨酸激酶信號進(jìn)行整合,調(diào)控目標(biāo)靶基因的轉(zhuǎn)錄,參與細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,促進(jìn)腫瘤的增殖和浸潤轉(zhuǎn)移,因此,p-STAT3被認(rèn)為是一種致癌基因,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。目前已發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細(xì)胞系及人的癌變組織中存在著STAT3的組成性激活,因此通過阻斷STAT3信號通路可以抑制腫瘤細(xì)胞生長并且誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,從而為惡性腫瘤的基因治療提供了一個(gè)理想的候選靶目標(biāo)[6-7]。本研究發(fā)現(xiàn),p-STAT3在卵巢癌表達(dá)高達(dá)80%,在低分化卵巢癌患者和卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達(dá)率分別為89.3%、90.3%,均明顯高于良性腫瘤及交界性腫瘤組的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致。提示p-STAT3在卵巢癌組織中呈高活化,同時(shí)p-STAT3的表達(dá)與腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。
抑癌基因的失活也與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切有關(guān),F(xiàn)HIT是近年來分離出的一種重要的脆性位點(diǎn)抑癌基因,在正常上皮細(xì)胞如卵巢、肺等中可檢測到高水平的FHIT mRNA及FHIT蛋白的表達(dá),F(xiàn)HIT基因敲除小鼠的淋巴組織、肝臟、睪丸、胃及小腸均出現(xiàn)了腫瘤,證實(shí)了該基因具有抑制多個(gè)系統(tǒng)腫瘤形成的功能[8]。綜合目前的研究,F(xiàn)HIT基因在人類大部分的上皮性腫瘤組織中(如肺癌、宮頸癌、乳腺癌等)表達(dá)降低或缺失,且與多種腫瘤預(yù)后、復(fù)發(fā)相關(guān),希望為卵巢癌的發(fā)病機(jī)理研究、預(yù)后判斷提供新的指標(biāo)[4,9-10]。Ozaki等[11]分析44例卵巢癌、19例卵巢交界性腫瘤和16例良性腺瘤的FHIT蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)14%的卵巢癌有FHIT蛋白表達(dá)缺失或顯著減少,而在卵巢交界性癌和良性腺瘤中未發(fā)現(xiàn)減少,并且FHIT蛋白表達(dá)異常大多在低分化的卵巢癌中。本研究顯示FHIT在卵巢癌組患者表達(dá)僅32.5%,且在低分化卵巢癌患者(17.9%)和卵巢癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(19.4%)的表達(dá)率降低,均明顯低于良性患者及交界性腫瘤患者的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示FHIT在卵巢癌組織中呈低表達(dá),同時(shí)隨著卵巢癌分化程度的降低或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí),F(xiàn)HIT表達(dá)呈顯著下降趨勢。
STAT3和FHIT均參與了卵巢癌細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞凋亡,而兩者生物學(xué)效應(yīng)相反,本研究中發(fā)現(xiàn),p-STAT3和FHIT在腫瘤中的表達(dá)存在顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05),推測兩者可能在作用機(jī)制上存在某種聯(lián)系,并且隨著腫瘤惡性程度的增加,p-STAT3表達(dá)增高,而FHIT表達(dá)減低。綜上可見p-STAT3和FHIT在卵巢腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用,運(yùn)用免疫組化法聯(lián)合檢測p-STAT3和FHIT蛋白的表達(dá)簡單易行,有助于提高上皮性卵巢癌早期診斷的準(zhǔn)確性和客觀性,對上皮性卵巢癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及早期預(yù)后評估有一定指導(dǎo)意義。
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(收稿:2015-03-31 修回:2015-05-11)
浙江省中醫(yī)藥大學(xué)校級課題項(xiàng)目(No.201111)
浙江省中醫(yī)院病理科(杭州 310006)
肖鳳春,E-mail:longrch@163.com