應(yīng)用高效液相色譜法測定消亢膠囊中迷迭香酸的含量

肖金寶1，姜宗文1，孫 丹2，肖秋生1，王 雙1，夏 智1（1.解放軍208醫(yī)院461臨床部藥劑科，吉林 長春 130021；2.空軍航空大學(xué)門診部，吉林 長春 130021）

應(yīng)用高效液相色譜法測定消亢膠囊中迷迭香酸的含量

肖金寶1，姜宗文1，孫 丹2，肖秋生1，王 雙1，夏 智1（1.解放軍208醫(yī)院461臨床部藥劑科，吉林 長春 130021；2.空軍航空大學(xué)門診部，吉林 長春 130021）

目的建立測定消亢膠囊含量的方法。方法采用高效液相色譜（HP LC）法測定消亢膠囊中迷迭香酸的含量。色譜柱：Agilent C18柱，流動(dòng)相：甲醇-0.5%甲酸（50∶50），流速：1m l／min，檢測波長：330nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μl。結(jié)果消亢膠囊中夏枯草迷迭香酸的濃度在2.88～20.16μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9998），平均回收率為99.54%，RSD為0.40%（n＝9）。結(jié)論該方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于消亢膠囊中迷迭香酸的含量測定。

消亢膠囊；迷迭香酸；夏枯草；高效液相色譜

消亢膠囊是由空軍航空大學(xué)門診部研制的非標(biāo)制劑，具有滋陰清熱、養(yǎng)心寧神之功效。用于治療甲狀腺功能亢進(jìn)、心慌、乏力、多食、消瘦、手顫、情緒急躁、粗脖、突眼等。該制劑是由夏枯草、羚羊角、朱砂、牡蠣、郁金等藥材組成。夏枯草系方中主要藥味之一，具有清肝瀉火、明目、散結(jié)消腫之功效，臨床多用于治療甲狀腺腫大、淋巴結(jié)核、乳腺增生、高血壓、肺結(jié)核、急性黃疸型傳染性肝炎等疾?。?］。目前，國內(nèi)針對含夏枯草制劑的含量測定方法已有較多文獻(xiàn)報(bào)道［2-7］，迷迭香酸為夏枯草指標(biāo)性成分［3］，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法測定消亢膠囊中迷迭香酸的含量，為消亢膠囊質(zhì)量評價(jià)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供科學(xué)依據(jù)，以確保制劑質(zhì)量可靠和安全有效。

1 儀器與試藥

LC-15CHPLC儀、SPD-15C檢測器、CTO-15C柱溫箱（日本島津公司）、101A-2E電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司）、SB-5200DT超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）、TG328B電光分析天平（上海天平儀器廠）、SHZ-D（Ш）循環(huán)水式真空泵（河南省予華儀器有限公司）。

消亢膠囊（規(guī)格：每粒0.3g，空軍航空大學(xué)門診部研制生產(chǎn)，批號：140518、140722、140801），迷迭香酸對照品（中國食品藥品檢定研究所，批號：11181-201203），甲醇（美國Fisher公司），甲酸（天津市華東試劑廠，批號：20140412），甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Ag i l e n t C18色譜柱

（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%甲酸（50∶50），流速：1.0m l／min，檢測波長：330nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10μl。

2.2 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 在上述色譜條件下對迷迭香酸的對照品和供試品進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，理論塔板數(shù)＞3000，供試品中迷迭香酸色譜峰與相鄰色譜峰分離度＞1.4，拖尾因子1.01。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液 精密稱取迷迭香酸對照品適量，加甲醇稀釋制成濃度為0.0288mg／m l的對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液 取20粒本品膠囊的內(nèi)容物并稱重，混勻，從中精密稱定0.3g置50m l具塞錐形瓶中，加甲醇10m l，連錐形瓶稱重，超聲30min，取出，靜置，放涼，補(bǔ)重，抽濾，濾液以0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.3 陰性對照溶液 取按處方比例及生產(chǎn)工藝制備缺夏枯草的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

2.4 方法專屬性考察 精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μl，注入HPLC儀中，色譜圖見圖1。在與對照品色譜峰相應(yīng)的位置上供試品具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對照溶液在此峰位無吸收，對本品的含量測定無干擾。圖1A迷迭香酸的濃度為28.8μg／m l，圖1B迷迭香酸的含量為14.89μg／m l。

圖 1 迷迭香酸的HPLC圖

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5m l置5m l容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10μl，測定峰面積。以對照品的濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y＝25690.93X－28564.93，r＝0.9998。結(jié)果表明，迷迭香酸的濃度在2.88～20.16μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液10μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，RSD＝0.93%，表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，測定峰面積并計(jì)算迷迭香酸平均含量為0.05%。RSD＝0.61%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品（批號：20140722）適量，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫下放置，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、12、24h進(jìn)樣10μl，測定峰面積，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，RSD＝0.75%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的消亢膠囊內(nèi)容物9份（每份約0.15g），分別加入對照品溶液，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.10 樣品含量測定 取3批消亢膠囊（批號：140518、140722、140801）約0.3g，精密稱定，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備，在“2.1”色譜條件下，測定峰面積，并計(jì)算樣品中迷迭香酸含量分別為0.052%、0.050%、0.050%。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)［3，4，8，9］，取供試品溶液、對照品溶液分別在319nm和330nm波長下進(jìn)行檢測。供試品溶液和對照品溶液均在330nm波長處有最大吸收，陰性對照溶液在此處無吸收，故選擇檢測波長為330nm。

3.2 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)［8，9］報(bào)道，選用A.乙腈-1.0%醋酸（16∶84）、B.甲醇-0.5%甲酸（40∶60）、C.甲醇、D.甲醇-0.5%甲酸（50∶50），4種流動(dòng)相進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，以A為流動(dòng)相時(shí)，未分離出迷迭香酸特定峰；以B為流動(dòng)相時(shí)，分離效果不佳，出現(xiàn)拖尾峰并且保留時(shí)間長；以C為流動(dòng)相時(shí)，分離效果不佳但保留時(shí)間適宜；以D為流動(dòng)相時(shí)，分離良好并有適宜的保留時(shí)間。因此，確定以甲醇-0.5%甲酸（50∶50）為本實(shí)驗(yàn)的流動(dòng)相。迷迭香酸為酚酸類化合物，流動(dòng)相pH值對峰形影響較大，甲酸含量在0.5%時(shí)，色譜峰形較好。如果流動(dòng)相中不添加有機(jī)酸則峰形不對稱，且酚酸類化合物在有機(jī)溶劑占流動(dòng)相體積1／2時(shí)，分離效果更好，并有適宜的保留時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本方法操作簡便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于消亢膠囊含量的質(zhì)量控制。

［1］ 南京中醫(yī)藥大學(xué)，中藥大辭典［M］.上海：上海科技出版社，2014：1827.

［2］ 梁杰康，張 琳，嚴(yán)曉明，等.采用HPLC-ESI-MS／MS測定夏枯草的主要化學(xué)成分［J］.中國中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，11（14）：153-154.

［3］ 劉 偉，丁海杰.HPLC測定夏枯草中熊果酸、齊墩果酸、迷迭香酸的含量［J］.中成藥，2008，30（4）：577-579.

［4］ 劉 偉，丁海杰，孫曙光，等.夏枯草HPLC指紋圖譜的研究［J］.中草藥，2008，39（2）272-274.

［5］ 郭興輝，劉 偉.HPCE法測定夏枯草中咖啡酸的含量［J］.中國藥事，2010.24（2）：166-167.

［6］ 邢志霞，崔燕兵，趙喜蘭，等.毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜法測定夏枯草中齊墩果酸、熊果酸含量［J］.藥品鑒定，2009，16（24）：47.

［7］ 林麗美，許招懂，姚江雄，等.夏枯草中異迷迭香酸苷和迷迭香酸的含量測定［J］.中國藥學(xué)雜志，2012，47（15）：1204-1207.

［8］ 許招懂，王智民，劉菊妍，等.夏枯草中異迷迭香酸苷TLC鑒別和HPLC含量測定［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（21）：106-108.

［9］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：236.

Determ ination of the rosmarinic acid in Xiaokang capsule by HPLC

XIAO Jinbao1，JIANG Zongwen1，SUN Dan2，XIAO Qiusheng1，WANG Shuang1，XIA Zhi1（1.Department of Pharmacy，461th Clinical Department，No.208Hospital of PLA，Changchun 130021，China；2.Outpatient Department of Air force Aviation University，Changchun 130021，China）

ObjectiveTo develop amethod for determination of the rosmarinic acid in Xiaokang capsules.MethodsAn HPLCmethod was developed.The determination was performed on Agilent C18column at 30℃w ith amobile phase composed ofmethanol：0.5%form ic acid（50∶50）run ata flow rate of 1.0m l／min.The detection wavelength was setat 330nm and the injection volume was 10μl.ResultsThe linear range of rosmarinic acid concentrationswas 2.88to 20.1μg／m l（r＝0.9998）.The average recovery was 99.5%（RSD＝0.40%，r＝9）.ConclusionAn assay for the determ ination of the rosmarinic acid in Xiaokang capsule that is simple，rapid，accurate and reliable has been developed.

Xiaokang capsule；rosmarinic acid；Prunel la；HPLC

R284.1；O657.72

A

1006-0111（2015）06-0555-03

10.3969／j.issn.1006-0111.2015.06.020

2014-11-25

2015-04-03［本文編輯］李睿旻

軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題（No.14ZJZ03-2）

肖金寶，碩士研究生，藥師.研究方向：醫(yī)院制劑、臨床藥學(xué).E-mail：xiaojinyi2007＠126.com

姜宗文，本科，副主任藥師.研究方向：醫(yī)院藥學(xué).Tel：（0431）86946285；E-mail：jiangzw5637＠163.com