心腦脈通膠囊的微乳薄層色譜鑒別

張 巖，王 強(qiáng)，任常順，郎軼詠（解放軍202醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng) 110003）

·論著·

心腦脈通膠囊的微乳薄層色譜鑒別

張 巖，王 強(qiáng)，任常順，郎軼詠（解放軍202醫(yī)院，遼寧沈陽(yáng) 110003）

目的探討微乳薄層色譜法同時(shí)分離鑒別心腦脈通膠囊中多種有效成分。方法以聚酰胺薄膜為固定相，微乳液為展開(kāi)劑，對(duì)處方中藍(lán)萼 香茶菜、葛根、丹參、川芎四味藥材進(jìn)行定性鑒別，并考察了十二烷基硫酸鈉（SDS）、油相、水相等因素對(duì)分離效果的影響。結(jié)果以含水量75%的微乳液［SDS-正丁醇-正庚烷-水，g／g］-甲酸-丙酮（5∶1∶1）為展開(kāi)劑，可同時(shí)分離鑒別心腦脈通中的藍(lán)萼香茶菜、葛根、丹參、川芎，斑點(diǎn)清晰，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，分離效果理想。結(jié)論微乳薄層色譜法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可同時(shí)分離鑒別中成藥中的多種有效成分。

心腦脈通膠囊；微乳液；薄層色譜

心腦脈通膠囊為解放軍202醫(yī)院制劑，由藍(lán)萼香茶菜、葛根、丹參、川芎四味中藥經(jīng)過(guò)提取加工制成，具有活血化瘀、通脈消栓、改善微循環(huán)、抑制血小板凝集、增加心腦血管供血及供氧的功效，主要用于冠心病、心絞痛、腦供血不足等缺血性心腦血管疾病的治療。心腦脈通膠囊為醇提取物，成分復(fù)雜，原標(biāo)準(zhǔn)采用薄層色譜法分別對(duì)丹參、藍(lán)萼香茶菜進(jìn)行鑒別，但操作復(fù)雜且重現(xiàn)性差，分離效果欠佳。

微乳液是由表面活性劑、助表面活性劑、油相、水相等組分在適當(dāng)配比下自發(fā)生成的無(wú)色透明、各向同性、低黏度的熱力學(xué)穩(wěn)定體系［1］。在微乳色譜中，溶質(zhì)的分配在固定相、微乳中油或水連續(xù)相及內(nèi)核和界面膜等數(shù)相之間進(jìn)行，能減少氣相對(duì)分離結(jié)果的影響，使微乳體系更加穩(wěn)定。微乳薄層可同時(shí)分離鑒定性質(zhì)差別較大和性質(zhì)結(jié)構(gòu)差別細(xì)微的各組分，克服了常用層析方法一次只能鑒定某單一成分的缺憾，為中藥有效成分的分離鑒別提供了一種高效簡(jiǎn)捷的新方法［2-5］。

本鑒別方法以含微乳液展開(kāi)劑作為流動(dòng)相，聚酰胺薄膜為固定相，研究心腦脈通膠囊的微乳薄層色譜，對(duì)心腦脈通膠囊中葛根、川芎、藍(lán)萼香茶菜及丹參4種有效成分進(jìn)行分離和鑒定，取得了較好的效果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UV-8型三用紫外分析儀（上海分析儀器廠）；FA2004電子分析天平（上海天平儀器廠）。

1.2 試藥 對(duì)照品：葛根素（批號(hào)110752-200912）、阿魏酸（批號(hào)110773-201012）、丹參酮ⅡA（批號(hào)110766-200518）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。對(duì)照藥材：葛根對(duì)照藥材（121175-200302）、川芎對(duì)照藥材（120918-200809）、丹參對(duì)照藥材（120923-200912）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，藍(lán)萼香茶菜采栽于遼寧鞍山千山，經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)鄭漢臣教授鑒定為唇形科香茶菜屬植物。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 微乳層析液 取十二烷基硫酸鈉（SDS），精密稱(chēng)定，溶解于適量水中，分別加入表面活性劑、油相，再加水至足量，磁力恒溫?cái)嚢杵鲾嚢杌靹?，放?4h，即得澄清透明的微乳液。將各種改性劑（如甲酸、丙酮等）加至不同組成的微乳液中，即得組成不同的微乳層析液。

2.1.2 供試品溶液 取心腦脈通膠囊內(nèi)容物0.5g，加入5m l甲醇，超聲提取30min，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1. 3 對(duì)照藥材溶液 分別取藍(lán)萼香茶菜、葛根、川芎、丹參對(duì)照藥材2g，加甲醇10m l，超聲提取30m in，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 陰性對(duì)照溶液 按心腦脈通處方比例制備陰性對(duì)照樣品，依照供試品溶液的配制方法，配制各味藥的陰性對(duì)照溶液。

2.1.5 對(duì)照品溶液 分別取葛根素、阿魏酸、丹參酮ⅡA對(duì)照品適量，加甲醇配制成0.2mg／m l的對(duì)照品溶液，超聲振蕩使之溶解，作為對(duì)照品溶液。

2.2 薄層色譜鑒別 分別吸取葛根素、阿魏酸、丹參酮ⅡA對(duì)照液、各對(duì)照藥材溶液、供試品溶液及各陰性對(duì)照溶液，均為2μl，分別點(diǎn)于聚酰胺薄膜，直徑為1～2mm。以微乳層析液為展開(kāi)劑，于室溫下預(yù)飽和30min，上行法展開(kāi)，展程約8cm，取出晾干后，日光下，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上丹參酮ⅡA顯紅色斑點(diǎn)，置紫外線（254nm）下檢視，藍(lán)萼香茶菜顯白色斑點(diǎn)，阿魏酸顯藍(lán)紫色斑點(diǎn)，川芎主斑點(diǎn)顯亮白色，葛根素顯暗白色斑點(diǎn)。

圖 1 心腦脈通膠囊主成分鑒別微乳薄層色譜圖

以含水量75%微乳液-甲酸-丙酮（5∶1∶1）為展開(kāi)系統(tǒng)，心腦脈通膠囊薄層色譜見(jiàn)圖1。從圖1可知，心腦脈通薄層色譜圖中，供試品色譜所顯各斑點(diǎn)的位置和熒光顏色與對(duì)照藥材和對(duì)照品溶液的相同，各陰性對(duì)照液無(wú)此斑點(diǎn)。說(shuō)明該微乳液體系適用于心腦脈通膠囊成分的鑒別。

3 討論與小結(jié)

3.1 微乳展開(kāi)體系的選擇

3.1.1 SDS對(duì)展開(kāi)效果的影響 分別取SDS 4、5、6、7、8、9g置250m l三角燒瓶中，加75.0g純化水?dāng)嚢枋谷芙猓俜謩e加入15.8g正丁醇、2.5g正庚烷，混合均勻，即得微乳液。微乳液澄清、透明且不分層。以微乳液為展開(kāi)劑，按“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行薄層層析，各成分的Rf值見(jiàn)圖2。

由圖2可見(jiàn)，阿魏酸、川芎、葛根素主斑點(diǎn)的Rf值隨SDS量的增加而逐漸減??；丹參酮ⅡA、藍(lán)萼香茶菜主斑點(diǎn)的Rf值隨SDS量的增加而逐漸增大。SDS為6.7g時(shí)，各斑點(diǎn)的分離度最好，此時(shí)斑點(diǎn)最為清晰，無(wú)拖尾。

3.1.2 含水量對(duì)展開(kāi)效果的影響 以上述微乳液-甲酸-丙酮（5∶1∶1）為展開(kāi)劑微乳液進(jìn)行層析，測(cè)定含水量對(duì)心腦脈通膠囊主成分斑點(diǎn)遷移的影響。各成分的Rf值見(jiàn)圖3。

圖 2 心腦脈通膠囊主成分R f值與SDS量的關(guān)系圖

圖 3 心腦脈通膠囊主成分R f值與微乳液含水量的關(guān)系圖

由圖3可知，各主成分斑點(diǎn)的Rf值隨微乳中含水量的增加而下降，但分離效果隨含水量的增加而改善，且展開(kāi)時(shí)間縮短。結(jié)合斑點(diǎn)效果和分離度以及時(shí)間等因素綜合考慮，選擇含水量75%的O／W型微乳液作為展開(kāi)劑最為適宜。

3.1.3 油相對(duì)展開(kāi)效果的影響 保證展開(kāi)劑SDS∶正丁醇∶油相（0.27∶0.63∶0.10）＋75%水-微乳液組分不變的條件下，改變油相的種類(lèi)，分別考察正戊烷、正己烷、正庚烷和正辛烷4種油相對(duì)展開(kāi)效果的影響。當(dāng)薄層色譜中使用正辛烷時(shí)，各藥物的Rf值降低，分離不完全，正戊烷和正己烷的層析結(jié)果顯示，擴(kuò)散和拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。因此，選擇油相分離度較大的正庚烷為微乳液，分離效果較好。

3.1.4 4種助表面活性劑對(duì)分離效果的影響 微乳薄層色譜法中常加入助表面活性劑以改善分離效果，在保證SDS∶正丁醇∶油相（0.27∶0.63∶0.10）＋75%水-微乳液組分不變的條件下，考察正丁醇、異丙醇、乙醇、甲醇4種助表面活性劑對(duì)展開(kāi)效果的影響。

結(jié)果顯示，加入異丙醇使得微乳液分層，故異丙醇不能作為助表面活性劑。隨著助表面活性劑碳鏈的增長(zhǎng)，各組分的Rf值逐漸減小，可解釋為碳鏈較短的助表面活性劑被吸附入表面活性劑極性端的一側(cè)，碳鏈較長(zhǎng)的助表面活性劑則嵌入表面活性劑的碳鏈中［3］，與非極性物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)表面活性劑分子上的非極性基團(tuán)，使得表面活性劑對(duì)非極性物質(zhì)的作用力減弱，因而非極性物質(zhì)的Rf值增加。當(dāng)以甲醇、乙醇作為助表面活性劑時(shí)，丹參酮ⅡA拖尾嚴(yán)重，且各斑點(diǎn)分離度不好。因此，選用正丁醇作為助表面活性劑最為適合。

3.1.5 改良劑對(duì)分離效果的影響 保證展開(kāi)劑SDS∶正丁醇∶正庚烷（0.27∶0.63∶0.10）＋75%水-微乳液組分不變的情況下，本實(shí)驗(yàn)考察了多種改良劑，如甲酸、乙酸、氨水等對(duì)展開(kāi)效果的影響。結(jié)果表明，乙酸、氯仿的加入不能改善層析結(jié)果中的拖尾現(xiàn)象，甲酸的加入可明顯改善斑點(diǎn)的拖尾現(xiàn)象。對(duì)不同比例的甲酸進(jìn)行考察，葛根素的Rf值隨著甲酸比例的減少而減少，并且斑點(diǎn)的拖尾現(xiàn)象逐漸改善。而其余斑點(diǎn)的Rf值隨著甲酸比例的減少而呈先增加后減少的走勢(shì)。在微乳液與甲酸比例為5∶1時(shí)斑點(diǎn)圓整，分離度好。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)加入丙酮可使分離效果更好且可縮短展開(kāi)時(shí)間，并且在微乳液、甲酸、丙酮三者比例為5∶1∶1時(shí)分離效果最好。因此，選擇含水量為75%微乳液-甲酸-丙酮（5∶1∶1）的層析液為展開(kāi)劑。

3.2 小結(jié) 本實(shí)驗(yàn)采用單因素考察法分別考察了微乳液中油相、水相、表面活性劑、助表面活性劑對(duì)展開(kāi)效果的影響，同時(shí)為改善微乳展開(kāi)系統(tǒng)的展開(kāi)效果，在微乳液中添加了改良劑，并考察了不同改良劑對(duì)展開(kāi)效果的影響。確定了心腦脈通薄層色譜以微乳液（SDS-正丁醇-正庚烷-水＝6.7∶15.8∶2.5∶75.0，g／g）-甲酸-丙酮（5∶1∶1）為展開(kāi)劑，可以有效地分離出心腦脈通膠囊中的丹參、葛根、川芎、藍(lán)萼香茶菜4種主成分，并且色譜斑點(diǎn)圓而集中，無(wú)拖尾現(xiàn)象。

［1］ 康 純，聞莉毓，丁仲伯，等.微乳薄層色譜用于黃連類(lèi)藥物分離鑒定的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2000，25（5）：262-265.

［2］ 陳培棟.微乳色譜應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥房，2007，18（34）：2706.

［3］ 唐洪梅，閆 雪，李得堂.微乳T(mén)LC法分離鑒定腸激安方中多種有效成分［J］.中國(guó)藥房，2009，20（21）：1633-1635.

［4］ 陳 玨，齊煉文，李 萍.微乳及其在中藥分析中的應(yīng)用［J］.藥學(xué)進(jìn)展，2013，37（9）：441-448.

［5］ 郎軼詠，王 強(qiáng)，姜同英，等.三黃顆粒的微乳薄層色譜法鑒別［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29（6）：469-472.

M icroemulsion TLC identification of Xinnaomaitong capsule

ZHANG Yan，WANG Qiang，REN Changshun，LANG Yiyong（No.202Hospital of PLA，Shenyang 110003，China）

ObjectiveTo investigate the application ofmicroemulsion thin layer chromatography（TLC）for separation and identification of various active components in Xinnaomaitong capsule.MethodsThe all-grass of Bluecalyx japanese rabodosia，root of Pueraria lobata，root and rhizomeof Salviamiltiorrhiza，rhizome of Ligusticum chuanxiong in Xinnaomaitong capsule were separated and identified simultaneously with the polyamide film as stationary phase and themicroemulsion asmobile phases.Different factors，such as the sodium dodecyl sulfate（SDS），oil phase and water phasewhich effecton the separation of the componentswere evaluated.ResultsThe al l-grass of Bluecalyx japanese rabodosia，root of Pueraria lobata，root and rhizome of Salviamiltiorrhiza，rhizome of Ligusticum chuanxiong in Xinnaomaitong capsulewere separated and identified simultaneously w ithmobile phase ofm icroemulsion∶form ic acid∶acetone（5∶1∶1）.The constituent of m icroemulsion was SDS∶butyl alcohol∶n-Heptane∶water＝6.7∶15.8∶2.5∶75.0（g／g）.The spots were clear，the negative controlwas no interference，and it showed an ideal separation.ConclusionM icroemulsion TLC is simple，accurate，and reproducible.It can identify a variety of active components in traditional Chinesemedicine simultaneously.

Xinnaomaitong capsule；m icromulsion；TLC

R284.2

A

1006-0111（2015）06-0536-03

10.3969／j.issn.1006-0111.2015.06.015

2014-09-24

2015-06-08［本文編輯］李睿旻

張 巖，碩士研究生.研究方向：中藥制劑分析.Tel：13998126364

郎軼詠，主管藥師.研究方向：制劑分析.Tel：（024）28853846；E-mail：langyiyong0452＠126.com