Fascin蛋白在乳腺導(dǎo)管上皮內(nèi)腫瘤及浸潤性導(dǎo)管癌中的表達意義

姜 英，常曉燕，陳 杰

(中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 北京協(xié)和醫(yī)院 病理科，北京100730)

乳腺癌是目前婦女最常見的惡性腫瘤之一。全世界每年約有120萬婦女患乳腺癌，約50萬婦女死于乳腺癌，發(fā)病率以每年2%的速度遞增。

Fascin 基因編碼產(chǎn)物為相對分子質(zhì)量55 ku、能與F-肌動蛋白結(jié)合的細胞骨架蛋白，于20世紀70年代從海膽卵母細胞的胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)[1]，并于20世紀90年代從人類畸胎瘤中克隆，定位于染色體7p22[2]。以往研究發(fā)現(xiàn)fascin蛋白在多種上皮來源的腫瘤細胞中有高表達，而在乳腺導(dǎo)管上皮內(nèi)腫瘤(ductal intraepithelial neoplasia，DIN)中的表達尚無報道，本研究擬探討fascin蛋白在DIN 及浸潤性導(dǎo)管癌中的表達情況。

導(dǎo)管內(nèi)增生性病變過去分為3 組:普通導(dǎo)管上皮增生(usual ductal hyperplasia，UDH)、導(dǎo)管上皮不典型增生和導(dǎo)管原位癌。在2002年召開的WHO 工作會議上，由WHO 工作組的一些成員提議使用DIN 來取代傳統(tǒng)的分類方法。2003年WHO 乳腺腫瘤分類中的DIN 分級為:平坦上皮不典型增生(flat epithelial atypia，F(xiàn)EA，DIN1a)、導(dǎo)管上皮不典型增生(atypical ductal hyperplasia，ADH，DIN1b)、低度導(dǎo)管原位癌(ductal carcinoma in situ，DCIS)為DIN1c，中度導(dǎo)管原位癌為DIN2，高度導(dǎo)管原位癌為DIN3。

1 材料與方法

1.1 材料

30例正常乳腺組織(取自癌旁乳腺組織)、30例普通導(dǎo)管上皮增生(UDH)，30例平坦上皮不典型增生(FEA，DIN1a)、15例導(dǎo)管上皮不典型增生(ADH，DIN1b)、2例低度導(dǎo)管原位癌(DIN1c)、10例中度導(dǎo)管原位癌(DIN2)、18例高度導(dǎo)管原位癌(DIN3)、120例浸潤性導(dǎo)管癌(invasive ductal carcinoma，IDC)石蠟包埋組織來自北京協(xié)和醫(yī)院1999 －2006年手術(shù)切除標本。

1.2 方法

4%中性甲醛固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度4 μm。所用抗體fascin-1 單克隆抗體(克隆號為55K-2)、ER、PR 及HER2(Dako 公司)。免疫組化染色用EnVision 法，使用Dako Cytomation 免疫組化自動染色機進行染色。

1.3 結(jié)果判定

胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達，fascin蛋白表達根據(jù)陽性腫瘤細胞的百分數(shù)分級:＜5 %為(－)5%～25%為(+)，26%～75%為(++)，＞75%為(+++)。以反應(yīng)性增生的淋巴結(jié)為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照，血管內(nèi)皮細胞作為內(nèi)對照。

1.4 統(tǒng)計學分析

Fascin表達水平和臨床病理因素的相關(guān)性用Microsoft Office Excel 2003 進行χ2檢驗分析。

2 結(jié)果

2.1 Fascin蛋白免疫組化檢測測結(jié)果

在正常乳腺組織的導(dǎo)管上皮、UDH組、FEA(DIN1a)組、ADH(DIN1b)組、低度DCIS(DIN1c)組、中度DCIS(DIN2)組中，fascin蛋白無陽性表達(圖1)，在高度DCIS(DIN3)組中陽性表達率為11.1%(2/18)，fascin蛋白表達均為散在(+)(圖2，3)，在IDC組中陽性表達率為15%(18/120)(圖4，5)，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≤3個組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移＞3個的IDC組中分別為11.6 % (11 /95)和28 %(7/25)。6例IDC 原發(fā)癌無fascin蛋白表達，而淋巴結(jié)中的轉(zhuǎn)移癌fascin蛋白表達(+)，其中2例Bloom-Richardson 分級為Ⅲ級，4例為Ⅱ級，4例原發(fā)癌fascin蛋白表達(+)，而淋巴結(jié)中的轉(zhuǎn)移癌fascin蛋白表達(++－+++)，這4例Bloom-Richardson 分級均為Ⅲ級，表明淋巴結(jié)中的轉(zhuǎn)移癌較原發(fā)癌有更強的浸潤性。在IDC 中癌組織周邊的細胞較中心的細胞有更強的著色。炎性宿主反應(yīng)中的樹突細胞和纖維母細胞有強弱不等的fascin蛋白陽性表達。

2.2 Fascin蛋白表達和臨床病理因素的相關(guān)性(表1)

圖1 UDH組、FEA組、ADH 組HE 及fascin 免疫組織化學檢測結(jié)果Fig1 The results of HE and immunohistochemistry of fascin in three groups

圖2 高級別導(dǎo)管原位癌(DIN3)Fig2 High grade DCIS(DIN3)(×300)

圖3 高級別導(dǎo)管原位癌(DIN3)fascin 局灶(+)Fig3 The results of immunohistochemistry of fascin in high grade DCIS(DIN3)fascin focally(+)(×300)

圖4 浸潤性導(dǎo)管癌Fig4 Invasive ductal carcinoma(×300)

圖5 浸潤性導(dǎo)管癌fascin 彌漫強(+)Fig5 IDC fascin(+)strongly and diffusely(×300)

表1 Fascin蛋白表達和臨床病理因素的相關(guān)性Table1 Fascin protein expression correlation with clinicopathological parameters

3 討論

乳腺癌嚴重威脅女性健康。DIN 等癌前病變的早期發(fā)現(xiàn)有助于提高乳腺癌的治愈率。

fascin蛋白定位于細胞質(zhì)張力纖維和細胞膜皺褶邊緣的絲狀偽足、微棘的核心肌動蛋白束中。人類fascin蛋白最初是從宮頸癌HeLa 細胞中純化出來的，與細胞的運動、癌細胞的轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[3]，提示fascin蛋白可能在細胞遷移、細胞黏附以及細胞間信息交流等過程中發(fā)揮作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)fascin蛋白在一些正常上皮細胞中不表達或低表達，在一些上皮來源的腫瘤中常表達上調(diào)。

目前，關(guān)于fascin蛋白在腫瘤組織細胞中上調(diào)表達的機制尚不十分清楚[5]。有研究提示，fascin 基因的蛋白編碼產(chǎn)物可能是c-erbB-2 在細胞骨架上的一種效應(yīng)蛋白[6-7]。在癌細胞中fascin 促進子受CREB 和芳香烴受體(AhR)調(diào)控[8]。Rac 通過fascin 與蛋白激酶C 復(fù)合物調(diào)節(jié)細胞遷徙[9]。

在對一系列的腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)fascin 陽性表達的腫瘤往往有較高的組織學分級或者較高的浸潤性。Fascin 可能在腫瘤的浸潤及調(diào)整細胞生長方面起作用[10]。fascin的表達下降還導(dǎo)致了C-erbB-2和β-catenin 在蛋白水平的下降，fascin蛋白的高表達可能屬于早期改變。

以往已經(jīng)有學者對fascin蛋白在乳腺癌中的表達進行了研究，發(fā)現(xiàn)在c-erbB-2 陽性的乳腺癌MDA-MB-435細胞系中fascin mRNA 及蛋白水平均增高[11]。

目前fascin蛋白在DIN 中的表達情況尚未見報道。在本研究中發(fā)現(xiàn)在高度DCIS組和IDC組中fascin蛋白表達呈增高趨勢，表明高度DCIS(DIN3)組和IDC組中的部分病例瘤細胞浸潤能力增加，并且其表達上調(diào)與一些臨床病理因素如ER陰性、PR陰性、腫瘤分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。在IDC 中癌組織周邊的細胞較中心的細胞有更強的浸潤性。淋巴結(jié)中的轉(zhuǎn)移癌較原發(fā)癌有更強的浸潤性。在乳腺癌的發(fā)生過程中，fascin蛋白的表達看來是一遲發(fā)事件，通常在部分癌中表達，目前靶向治療是癌癥治療的一個新方法，例如:herceptin 用于HER2 陽性的乳腺癌的治療。因此以fascin蛋白為靶點也許能為部分乳腺癌的治療提供新的思路，fascin的高表達也許能作為早期發(fā)現(xiàn)臨床浸潤性的預(yù)后指標，尚需對早期階段的腫瘤進行大規(guī)模的研究。

本研究運用免疫組化方法分析了fascin蛋白在乳腺DIN 及乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的差異表達，結(jié)果說明在乳腺癌的多步發(fā)生過程中，fascin蛋白表達可能是一個遲發(fā)事件，通常在癌中表達。

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