鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞骨架蛋白β-actin的調(diào)控機(jī)制研究

王建軍，王澤友，姚永良，吳建紅，成 陽(yáng)，李光新

鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞骨架蛋白β-actin的調(diào)控機(jī)制研究

王建軍1，王澤友2，姚永良1，吳建紅1，成 陽(yáng)1，李光新3

目的 研究鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后其對(duì)巨噬細(xì)胞骨架蛋白及其調(diào)節(jié)蛋白的作用機(jī)制。方法 RT-PCR方法分析M.avium刺激巨噬細(xì)胞后cofilin-1，β-actin基因的表達(dá)水平，同時(shí)Western blot方法從蛋白水平分析M.avium刺激巨噬細(xì)胞后β-actin、cofilin-1蛋白的表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M.avium刺激巨噬細(xì)胞后巨噬細(xì)胞凋亡及壞死的情況。結(jié)果β-actin基因及其蛋白在巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后表達(dá)顯著下調(diào)，而β-actin蛋白的調(diào)節(jié)蛋白cofilin-1表達(dá)顯著增強(qiáng)。同時(shí)，M.avium刺激巨噬細(xì)胞后誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡顯著增多。結(jié)論M.avium刺激巨噬細(xì)胞后可通過(guò)調(diào)控β-actin及cofilin-1蛋白的表達(dá)，從而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡或壞死。

巨噬細(xì)胞；鳥結(jié)核分枝桿菌；β-actin; cofilin-1

結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis, MTB)為結(jié)核病的病原菌，是兼性細(xì)胞內(nèi)寄生菌，其引發(fā)的結(jié)核病被列為全球重大傳染病之一[1]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)，我國(guó)是全球結(jié)核病流行嚴(yán)重的國(guó)家之一，結(jié)核病年發(fā)病人數(shù)約為130萬(wàn),占全球發(fā)病的14.3%，位居全球第2位[2]。

結(jié)核分枝桿菌感染人體后，主要被巨噬細(xì)胞吞噬，未被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除而潛伏下來(lái)的MTB也主要寄生于巨噬細(xì)胞內(nèi)，在巨噬細(xì)胞內(nèi)增殖通過(guò)各種機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮其抗結(jié)核活性[3]。肌動(dòng)蛋白(actin)是微絲的結(jié)構(gòu)成分，氨基酸結(jié)構(gòu)高度保守，是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要成分其表達(dá)水平的變化與細(xì)胞形態(tài)變化密切相關(guān)[4]。研究表明細(xì)胞凋亡時(shí)，肌動(dòng)蛋白細(xì)絲發(fā)生斷裂，肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)遭到破壞，這是細(xì)胞凋亡時(shí)形態(tài)改變的一個(gè)典型特征，提示肌動(dòng)蛋白可能是細(xì)胞凋亡早期的調(diào)控物之一[5]。目前研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后巨噬細(xì)胞分泌的外泌體(exosomes)中的β-actin蛋白表達(dá)顯著下調(diào)及cofilin-1蛋白表達(dá)增強(qiáng)，表明結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞可能改變宿主細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性[6]。鳥結(jié)核分枝桿菌是非結(jié)核分枝桿菌中重要的種屬之一，其不僅可引起淋巴結(jié)炎，淋巴結(jié)核，腦膜炎等，然而其導(dǎo)致的肺部病變與人型結(jié)核分枝桿菌導(dǎo)致的肺結(jié)核很相似。目前非結(jié)核分枝桿菌導(dǎo)致的疾病越來(lái)越受到衛(wèi)生部門的重視，但非結(jié)核分枝桿菌的相關(guān)研究仍少之又少無(wú)法為臨床提供強(qiáng)有力的支撐。本文著重研究鳥結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后從基因與蛋白水平對(duì)細(xì)胞骨架蛋白及其調(diào)節(jié)蛋白進(jìn)行研究，探討其在鳥結(jié)核分枝桿菌誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮的具體機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 巨噬細(xì)胞系THP-1，鳥結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumavium,M.avium)來(lái)購(gòu)自上海物種保藏中心。

1.2 主要試劑 RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自Hyclone公司、RNA提取試劑、PCR試劑購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)公司。β-actin、cofilin-1、GAPDH抗體購(gòu)自上海義森生物科技有限公司。Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海前塵生物技術(shù)公司。

1.3M.avium培養(yǎng) 接種環(huán)取M.avium菌液于羅氏固體培養(yǎng)基上劃線接種，37 ℃培養(yǎng)4周后，刮下M.avium，0.05%吐溫?zé)o菌生理鹽水震蕩充分打散M.avium，高壓蒸汽滅菌使其喪失活性后比濁法計(jì)算M.avium菌液濃度(1.5 ×107/ mL)。

1.4 巨噬細(xì)胞培養(yǎng) THP-1細(xì)胞于10%胎牛血清RPMl-l640培養(yǎng)基中，37 ℃ 5% CO2飽和濕度環(huán)境中培養(yǎng)48 h后，終濃度為1 μmol/L的佛波酯誘導(dǎo)細(xì)胞24 h使其分化成巨噬細(xì)胞后，隨機(jī)分為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組空白培養(yǎng)基刺激巨噬細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組以滅活的M.avium刺激細(xì)胞24 h(M.avium：細(xì)胞=10∶1)。

1.5 RT-PCR引物設(shè)計(jì)及合成 根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)檢索β-actin、GAPDH基因的cDNA序列并合成引物，引物序列如表1。

表1 β-actin及GAPDH引物序列

1.6 RNA提取 按照鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)公司的Trizol試劑盒說(shuō)明書提取細(xì)胞總RNA，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.7 RT-PCR 逆轉(zhuǎn)錄體系30 μL中含30 pmol/L oligo(dT)151 μL，2.5 mmmol/L dNTPs混合物4 μL，RNA酶抑制劑0.5 μL(30 U)，AMV逆轉(zhuǎn)錄酶0.5 μL(10 U)，5×RT緩沖液6 μL，1 μg模板RNA，17 μL DEPC水，37 ℃水浴1 h合成cDNA；25 μL PCR體系中含cDNA 2.5 μL，0.5 μL TaqDNA聚合酶1.5 U，10 mmol/L上游引物0.5 μL，10 mmol/L下游引物0.5 μL，2.5 mmol/L dNTPs 4 μL，10×PCR 緩沖液2.5 μL，無(wú)核糖核酸酶水14.5 μL，預(yù)變性94 ℃ 2 min，然后94℃變性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸35 s，共30個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min，1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產(chǎn)物。

1.8 Western Blot 蛋白質(zhì)提取試劑盒提取巨噬細(xì)胞受M.avium刺激前后的總蛋白并Bradford方法測(cè)定蛋白濃度；配制10% SDS-PGAE電泳膠，將變性后的蛋白質(zhì)按50 μg的蛋白總量進(jìn)行垂直電泳，然后通過(guò)電轉(zhuǎn)移法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至PVDF膜上，β-actin抗體及cofilin-1抗體作為一抗，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行免疫反應(yīng)。

1.9 細(xì)胞凋亡檢測(cè)M.avium刺激巨噬細(xì)胞24 h后，收集巨噬細(xì)胞1×106個(gè)，PBS(含2 g/L BSA)輕輕洗滌兩次；分別加入10 μL的FITC標(biāo)記的Annexin-V抗體、PI試劑，重懸細(xì)胞室溫避光孵育30 min。PBS(含2 g/L BSA)洗滌細(xì)胞2次，0.4 mL PBS(含2 g/L BSA)重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.10 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 16.0進(jìn)行處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1M.avium對(duì)巨噬細(xì)胞影響 THP-1細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，無(wú)任何處理組為對(duì)照組，其余組以1 μmol/L TPA誘導(dǎo)分化形成巨噬細(xì)胞后以PBS、M.avium分別處理24 h，倒置顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài) (圖1A)。同時(shí)，提取細(xì)胞基因組DNA、檢測(cè)基因組片段化情況(圖1B)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium刺激后，巨噬細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯變化，細(xì)胞基因組DNA未發(fā)生片段化。

a：THP-1細(xì)胞組；b：THP-1分化巨噬細(xì)胞組；c：M.avium處理巨噬細(xì)胞組。1：HindIII Marker；2：THP-1基因組DNA；3：巨噬細(xì)胞基因組DNA；4：巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium刺激后的基因組DNA。

a: THP-1 cells group; b: THP-1 differentiated into macrophages group; c:M.aviumstimulation macrophages group. 1:HindIII Marker; 2: The gDNA of THP-1 cells; 3: The gDNA of macrophage cells; 4: The gDNA ofM.aviumstimulation macrophage.

圖1 巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium刺激后的細(xì)胞形態(tài)(A)及基因組DNA分析(B)

Fig.1 Analysis of the morphology (A) and genomic DNA (B) ofM.aviumstimulation macrophages

2.2M.avium刺激巨噬細(xì)胞后β-actin及cofilin-1基因表達(dá)研究 巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium處理24 h后，RT-PCR法檢測(cè)巨噬細(xì)胞β-actin及cofilin-1 mRNA的表達(dá)變化(圖2)，SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析β-actin及cofilin-1 mRNA表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明β-actin基因在M.avium處理組表達(dá)下調(diào)2.3倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而cofilin-1基因在M.avium處理組中表達(dá)增強(qiáng)1.3倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 Western blot分析細(xì)胞骨架蛋白 Western blot方法檢測(cè)M.avium處理巨噬細(xì)胞24 h后，巨噬細(xì)胞β-actin及cofilin-1蛋白的表達(dá)變化(圖3)。Image J灰度掃描灰度并經(jīng)GAPDH灰度值校正后，SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明M.avium刺激巨噬細(xì)胞24 h后巨噬細(xì)胞β-actin蛋白表達(dá)下調(diào)2.1倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而β-actin的調(diào)節(jié)蛋白cofilin-1則表達(dá)增強(qiáng)1.7倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.5 流式細(xì)胞檢測(cè)巨噬細(xì)胞凋亡及壞死 巨噬細(xì)胞經(jīng)M.avium感染處理24 h后，F(xiàn)ITC標(biāo)記Annexin-V抗體及PI試劑孵育細(xì)胞30 min后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡及壞死情況(圖4)。獨(dú)立進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，SPSS 16.0對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明M.avium感染巨噬細(xì)胞后處理巨噬細(xì)胞后，15%巨噬細(xì)胞發(fā)生凋亡，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3%巨噬細(xì)胞發(fā)生壞死，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

A：巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后β-actin及cofilin-1 mRNA 的PCR結(jié)果；B：SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析結(jié)果，GAPDH為標(biāo)準(zhǔn)校正；(n=3與對(duì)照組相比，*P<0.05)。

A: Results ofβ-actinandcofilin-1 mRNA detected by PCR; B: Results of the expression ofβ-actinandcofilin-1 mRNA analyzed by SPSS 16.0 stastical software,GAPDHas a standard calibration (n=3, compared with the control group, *P<0.05).

圖2 RT-PCR方法分別檢測(cè)巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后β-actin及cofilin-1 mRNA的表達(dá)水平

Fig.2 Expression ofβ-actinandcofilin-1 mRNA inM.aviumstimulation macrophages analyzed by PCR methods

巨噬細(xì)胞(Macrophage)是結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)的主要宿主細(xì)胞，結(jié)核分枝桿菌可在巨噬細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期滯留及潛伏[7]。結(jié)核分枝桿菌因其特殊的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致巨噬細(xì)胞內(nèi)的溶酶體酶難以殺傷結(jié)核分枝桿菌，最終可導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)大量增殖。結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后，將破壞宿主細(xì)胞骨架而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死，繼而釋放結(jié)核分枝桿菌出胞而侵襲周邊巨噬細(xì)胞，并導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌感染加重。

結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量的TNF-α與IL-1β而增強(qiáng)caspase-3的活性，從而介導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，然而細(xì)胞的凋亡必然引起細(xì)胞骨架形態(tài)與成分的改變[8]。β-actin蛋白解聚與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切，且其解聚常出現(xiàn)在凋亡小體形成前。胞漿肌動(dòng)蛋白actin是細(xì)胞重要的骨架蛋白，細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-5調(diào)節(jié)亞基-1(Cyclin-dependent kinase 5, regulatory subunit 1, CD5R1)是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-5(Cyclin-dependent kinase-5，CDK5)的特異性激活因子，活化的CDK5可促進(jìn)tau蛋白過(guò)度磷酸化及過(guò)度表達(dá)，最終導(dǎo)致細(xì)胞骨架與微管的不穩(wěn)定性[9]。Cofilin-1蛋白是細(xì)胞骨架蛋白的結(jié)合蛋白，其可通過(guò)水解ATP分解肌動(dòng)蛋白纖維[10]。研究表明細(xì)胞凋亡時(shí)，肌動(dòng)蛋白細(xì)絲發(fā)生斷裂，肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)遭到破壞，提示肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞凋亡早期的調(diào)控物之一[11]。本研究前期發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞經(jīng)鳥結(jié)核分枝桿菌刺激后分泌的exosomes中的actin蛋白表達(dá)顯著降低，而cofilin-1蛋白則表達(dá)顯著增強(qiáng)，表明巨噬細(xì)胞的細(xì)胞骨架可能受到鳥結(jié)核分枝桿菌的破壞而導(dǎo)致宿主細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的合成與加工受到抑制，同時(shí)actin與cofilin-1不一致的表達(dá)表明巨噬細(xì)胞在竭力調(diào)節(jié)并維持細(xì)胞骨架的穩(wěn)定[12]。

A：M.avium處理巨噬細(xì)胞后β-actin與cofilin-1蛋白的表達(dá)結(jié)果。B：β-actin與cofilin-1蛋白表達(dá)經(jīng)GAPDH校正后的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，(n=3與對(duì)照組相比，*P<0.05)。

A: Results of the protein expression of β-actin and cofilin-1 in macrophages stimulated withM.avium. B: Results of the protein expression of β-actin, and cofilin-1 by stastical software, GAPDH as quantitative correction, (n=3, compared with the control group, *P<0.05).

圖3 Western blot分析巨噬細(xì)胞受M.avium刺激后β-actin蛋白及其調(diào)節(jié)蛋白cofilin-1的表達(dá)

Fig.3 Analysis of the expression of β-actin and its regulatory protein cofilin-1 inM.aviumstimulation macrophages by Western blot

本研究初步發(fā)現(xiàn)鳥結(jié)核分枝桿菌刺激巨噬細(xì)胞后細(xì)胞骨架蛋白受結(jié)核分枝桿菌的抑制，而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞大量的凋亡或壞死，提示鳥結(jié)核分枝桿菌可通過(guò)抑制細(xì)胞骨架蛋白的表達(dá)而誘導(dǎo)宿主細(xì)胞的凋亡，但具體的調(diào)節(jié)機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

A：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M.avium誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡及壞死的水平；B：SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析巨噬細(xì)胞的凋亡及壞死結(jié)果(n=3與對(duì)照組相比，*P<0.05)。

A: The detection of the apoptosis or necrosis of macrophages infected withM.aviumby flow cytometry; B: Results of the apoptosis or necrosis of macrophages analyzed by SPSS 16.0 statistical software (n=3, compared with the control group, *P<0.05).

圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞的凋亡及壞死情況

Fig.4 Analysis of the apoptosis or necrosis of macrophages by flow cytometry

[1]Ottenhoff TH, Doherty TM, van Dissel JT, et al. First in humans: a new molecularly defined vaccine shows excellent safety and strong induction of long-livedMycobacteriumtuberculosis-specific Th1-cell like responses[J]. Hum Vaccin, 2010, 6(12): 1007-1015. DOI: 10.4161/hv.6.12.13143

[2]Wang S, Yang AF. The present situation and the preventive measures of tuberculosis in China[J]. Chin J Ethnomed Ethnopharm, 2009, 18 (15): 65-66. (in Chinese) 王勝, 楊安芳. 我國(guó)結(jié)核病的現(xiàn)狀與預(yù)防措施[J]. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥, 2009, 18 (15): 65-66.

[3]Dao DN, Kremer L, Guerardel Y, et al.Mycobacteriumtuberculosislipomannan induces apoptosis and interleukin-12 production in macrophages[J]. Infect lmmun, 2004, 72(4): 2067-2074. DOI:10.1128/IAI.72.4.2067-2074.2004

[4]Wu B, Ma J, Meng K, et al. Observation on ultrastructure of liver cell apoptosis[J]. J Chin Electron Microscopy, 2000, 19(6): 791-797. (in Chinese) 吳波, 馬捷, 孟奎, 等. 肝細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)觀察[J]. 電子顯微學(xué)報(bào), 2000, 19(6): 791-797.

[5]Franklin-Tong VE, Gourlay CW. A role for actin in regulating apoptosis/programmed cell death: evidence spanning yeast, plants and animals[J]. Biochem J, 2008, 413(3): 389-404. DOI: 10.1042/BJ20080320

[6]Wang JJ, Chen C, Xie PF, et al. Proteomic analysis and immune properties of exosomes shed by macrophages infected withmycobacteriumavium[J]. Microbes Infect, 2014, 16(4): 283-291. DOI: 10.1016/j.micinf.2013.12.001

[7]Siegel RM. Caspases at the crossroads of immune-cell life and death[J]. Nat Rev Immunol, 2006, 6(4): 308-317. DOI: 10.1038/nri1809

[8]Miao EA, Rajan JV, Aderem A. Caspase-1-induced pyroptotic cell death[J]. Immunol Rev, 2011, 243(1): 206-214. DOI: 10.1111/j.1600-065X.2011.01044.x

[9]Michaelis ML, Dobrowsky RT, Li G, et al. Tau neurofibrillary pathology and microtubule stability[J]. J Mol Neuro Sci, 2002, 19(3): 289-293. DOI: 10.1385/JMN:19:3:289

[10]Hotulainen P, Paunola E, Vartiainen MK, et al. Actin-depolymerizing factor and cofilin-1 play overlapping roles in promoting rapid F-actin depolymerization in mammalian nonmuscle cells[J]. Mol Biol Cell, 2005, 16(2): 649-664. DOI: 10.1091/mbc.E04-07-0555

[11]Franklin-Tong VE, Gourlay CW. A role for actin in regulating apoptosis/programmed cell death: evidence spanning yeast, plants and animals[J]. Biochem J. 2008, 413(3): 389-404. DOI: 10.1042/BJ20080320

[12]Wang JJ, Chen C, Tang LJ, et al. Molecular immune response of macrophages stimulated with exosomes secreted by macrophages infected withMycobacteriumtuberculosisand it’s proteomics analysis[J]. Chin J Cell Mol Immunol, 2012, 29(2): 123-126. (in Chinese) 王建軍, 陳偲, 湯立軍, 等. 鳥結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后分泌的外泌體刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的分子免疫反應(yīng)及其蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2012, 29(2):123-126.

Li Guang-xin, Email: lgxin34147@126.com

Regulatory mechanisms of the cytoskeletal protein β-actin after stimulation ofMycobacteriumaviumto macrophages

WANG Jian-jun1,WANG Ze-you2,YAO Yong-liang1,WU Jian-hong1,CHENG Yang1,LI Guang-xin3

(1.KunshanFirstPeople’sHospital,AffiliatedtoJiangsuUniversity,Kunshan215300,China; 2.InstituteofCancerResearch,CentralSouthUniversity,Changsha410078, 3.DepartmentofPathology,ChongqingCancerInstitute,Chongqing215300,China)

We investigated the functions of the cytoskeleton proteins and their regulatory proteins inMycobacteriumavium(M.avium) stimulation macrophages. The expression of β-actin and cofilin-1 were detected in mRNA and proteins levels by RT-PCR and Western blot technologies, respectively. Meanwhile, the apoptosis or necrosis of macrophages stimulated withM.aviumwas analyzed by flow cytometry. Results showed that β-actin mRNA and proteins of β-actin were both down-regulated inM.aviumstimulation macrophages, however the expression of cofilin-1 gene and proteisn was presented oppositely both in mRNA and protein level compared with the expression of β-actin. Furthermore, the apoptosis or necrosis of macrophages induced byM.aviumwas increased significantly. We confirmed that the expression of β-actin and confilin-1 could be regulated byM.aviumstimulation to induce theapoptosis or necrosis of macrophages.

macrophage;M.avium; β-actin; cofilin-1

10.3969/j.issn.1002-2694.2015.09.004

李光新, Email:lgxin34147@126.com

1.江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院, 昆山 215300; 2.中南大學(xué)腫瘤研究所,長(zhǎng)沙 410078; 3.重慶市腫瘤研究所病理科,重慶 215300

Supported by the Science and Technology project of Kunshan social development(KS1425)

R392.11

A

1002-2694(2015)09-0800-05

2014-11-24；

2015-05-11

昆山市科技局立項(xiàng)項(xiàng)目(KS1425)