循證檢驗(yàn)在新生兒溶血病檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

潘慶珍

循證檢驗(yàn)在新生兒溶血病檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

潘慶珍

目的 探討應(yīng)用循證檢驗(yàn)在新生兒溶血病檢驗(yàn)中的應(yīng)用價值。方法 選取100例可疑或已證實(shí)為新生兒溶血病的患兒血液進(jìn)行循證檢驗(yàn), 即使用微柱凝膠免疫分析法進(jìn)行直抗(直接抗人球蛋白試驗(yàn))、游離(游離抗體試驗(yàn))和放散(抗體釋放試驗(yàn))試驗(yàn), 并對原陰性結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢, 分析檢驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果 直抗試驗(yàn)復(fù)檢陽性率提高26.00%、游離試驗(yàn)復(fù)檢陽性率提高11.00%、放散試驗(yàn)復(fù)檢陽性率提高8.00%。結(jié)論 對新生兒溶血病進(jìn)行循證檢驗(yàn)?zāi)芴岣邫z驗(yàn)的準(zhǔn)確性, 驗(yàn)證試驗(yàn)陰性的原因。

循證檢驗(yàn)；新生兒溶血??；微柱凝膠免疫；三項(xiàng)試驗(yàn)；應(yīng)用

新生兒溶血病(HDN)是新生兒的一種常見溶血性疾病,主要是由于夫妻血型不合, 致使母親體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒紅細(xì)胞lgG血型抗體相結(jié)合的免疫抗體, 所引起的被動免疫性疾?。?］。若得不到及時治療, 可使患兒出現(xiàn)高膽紅素血癥等嚴(yán)重并發(fā)癥, 進(jìn)而造成患兒黃疸、貧血、智力缺陷等, 甚至死亡, 因此, 盡早確診是關(guān)鍵。這就涉及新生兒溶血病的血液檢驗(yàn)問題, 但受多種因素的影響, 實(shí)際的檢驗(yàn)結(jié)果往往與理論存在較大差異, 從而易出現(xiàn)漏診和誤診現(xiàn)象。經(jīng)過多年的臨床實(shí)踐, 發(fā)現(xiàn)循證檢驗(yàn)是提高新生兒溶血病檢驗(yàn)的準(zhǔn)確率的有效辦法, 本研究即為探討循證檢驗(yàn)在新生兒溶血病檢驗(yàn)中的應(yīng)用價值, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月～2014年1月本院收治的100例可疑或已證實(shí)為新生兒溶血病的患兒作為研究對象。患兒年齡2～6 d, 平均年齡(3.57±0.82)d；女64例、男36例。根據(jù)溶血三項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果, 確診75例, 可疑25例。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑選擇 血清學(xué)檢測機(jī)選擇TD-3A型離心機(jī)、嬰兒HDN不完全抗體體檢測卡、RHD和ABO血型檢測卡、FYQ型免疫微柱孵育機(jī)、選擇長春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的放散試劑盒。

1.2.2 三項(xiàng)檢驗(yàn)方法 取3～5 ml乙二胺四乙酸二鉀抗凝靜脈血液送檢, 包括監(jiān)測嬰兒的RHD、ABO血型, 并采用微柱凝膠免疫法進(jìn)行三項(xiàng)檢驗(yàn), 即直抗試驗(yàn)、游離試驗(yàn)和放散試驗(yàn)(具體的檢驗(yàn)操作步驟和方法參照第3版操作規(guī)程)。但檢測前應(yīng)使用離心機(jī)進(jìn)行約3 min的檢測卡離心, 防止檢測卡存在氣泡和干膠。另外, 檢驗(yàn)前還應(yīng)注意離心靜脈血標(biāo)本, 2～3 min, 3000 r/min, 以盡快沉淀纖維蛋白, 防止影響檢測的準(zhǔn)確性。檢測標(biāo)本宜在20～25℃的室內(nèi)進(jìn)行, 防止出現(xiàn)冷凝集而影響檢測結(jié)果。結(jié)果需在加入試劑和標(biāo)本的檢測卡進(jìn)行1次離心后再判讀。

1.2.3 復(fù)檢方法 對三項(xiàng)檢驗(yàn)方法中原陰性結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢。其中, 直抗陰性復(fù)檢時采用原試驗(yàn)紅細(xì)胞2倍濃度進(jìn)行試驗(yàn)。游離陰性復(fù)檢則采用2倍原游離試驗(yàn)血漿試驗(yàn), 若新生溶血病為母嬰RH血型不合引起, 則使用O型紅細(xì)胞和母體血清行游離試驗(yàn)。若為母嬰ABO血型不合引起, 則應(yīng)檢測母體血液中相應(yīng)的lgG抗體效價, 同時用2-巰基乙醇(2-Me)滅活lgM抗體, 以代替患兒的血清。放散陰性復(fù)檢則需要增加一定的紅細(xì)胞比例, 用經(jīng)過酶處理后的紅細(xì)胞替代原有的紅細(xì)胞。

1.3 陰陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)［2］陽性：紅細(xì)胞凝集塊附于凝膠中或表面, 這提示血清中的血細(xì)胞被致敏或存在相關(guān)抗體；陰性：紅細(xì)胞出現(xiàn)沉降并達(dá)到凝膠底部形成紅細(xì)胞扣, 這提示血清中的血細(xì)胞未被致敏或不存在相關(guān)的抗體。

2 結(jié)果

經(jīng)過循證檢驗(yàn)后, 三項(xiàng)復(fù)檢試驗(yàn)的陽性率均有所提高。其中, 支抗試驗(yàn)中陰性有54例, 對原陰性結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢, 新增26例陽性, 陽性率提高26.00%；游離試驗(yàn)中陰性有30例,對原陰性結(jié)果復(fù)檢后新增11例陽性, 陽性率提高11.00%；放散試驗(yàn)中陰性有16例, 對原陰性結(jié)果復(fù)檢后新增8例陽性,陽性率提高8.00%。見表1。

表1 100例新生兒溶血病循證檢測結(jié)果(n, %)

3 討論

新生兒溶血病主要由于母嬰血型不合(主要是RH血型系統(tǒng)和ABO血型系統(tǒng)不合)而導(dǎo)致母體血型抗體進(jìn)入胎兒血液, 從而對新生兒的紅細(xì)胞造成破壞的一種免疫性疾病。根據(jù)相關(guān)研究, 我國新生兒溶血病約有85%為ABO血型不合引起［3］?；加行律鷥喝苎? 輕則出現(xiàn)水腫、貧血、肝脾重大等, 重則會造成患兒智力障礙、運(yùn)動受限、核黃疸, 甚至危及生命安全, 嚴(yán)重影響患兒的生活質(zhì)量, 給患兒的家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。因此, 盡早確診和治療是關(guān)鍵。目前, 臨床診斷新生兒溶血病主要是進(jìn)行血液實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn), 其中, 直抗試驗(yàn)(直接抗人球蛋白試驗(yàn))、游離試驗(yàn)(游離抗體試驗(yàn))和放散試驗(yàn)(抗體釋放試驗(yàn))三項(xiàng)試驗(yàn)是診斷的主要依據(jù)。從理論上, 對新生兒溶血病的三項(xiàng)試驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果均應(yīng)呈陽性。但在實(shí)際的檢驗(yàn)過程中, 受抗體、體內(nèi)抗原、方法學(xué)等因素的影響, 實(shí)際的檢驗(yàn)結(jié)果往往與理論存在很大差別, 這也是導(dǎo)致誤診和漏診的重要原因［4］。因此, 提高實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)準(zhǔn)確率成為實(shí)驗(yàn)室的重要研究課題。

在實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)檢驗(yàn)中, 常用微柱凝膠免疫法進(jìn)行三項(xiàng)檢驗(yàn)。該方法具有快速、簡便、判斷準(zhǔn)備率較高等優(yōu)勢, 因而成為實(shí)驗(yàn)室檢測新生兒溶血病的常規(guī)檢測方法。微柱凝膠技術(shù)是近年來國內(nèi)外都大力推廣的一種有效檢測技術(shù), 其基本原理是在混有葡聚糖凝膠的小試管中孵育血清和紅細(xì)胞, 在經(jīng)過離心后紅細(xì)胞發(fā)生沉淀, 則提示抗原抗體存在不相適應(yīng)情況, 也就是陰性反應(yīng), 可判定為陰性；但若抗體吸附于凝膠中或其表面, 致使紅細(xì)胞難以下沉, 則提示抗原抗體相適應(yīng), 即為陽性反應(yīng), 可判定為陽性［5］。這種檢測方法與傳統(tǒng)的試管檢測法相比, 操作不僅更為簡單, 耗時更短, 且檢驗(yàn)陽性率更高。但用微柱凝膠免疫法進(jìn)行三項(xiàng)檢驗(yàn)時, 也存在一些不足, 如由于剛出生的新生兒的抗原位點(diǎn)較少、ABO抗原發(fā)育不完全, 因而抗原性較弱, 難以與IgG抗體結(jié)合, 因而進(jìn)行直抗試驗(yàn)時易呈若陽性或陰性。根據(jù)相關(guān)研究, 認(rèn)為胎兒體內(nèi)的IgG抗體會與體液細(xì)胞上的一些抗原發(fā)生中和, 進(jìn)而導(dǎo)致部分抗體被處理失效, 造成游離試驗(yàn)陰性。而放散試驗(yàn)中, 則主要是由于采血時間較晚, 使很多致敏紅細(xì)胞遭到破壞而呈陰性。這些因素的存在, 在很大程度上降低了新生兒溶血病的檢測準(zhǔn)確性。

為提高檢測的準(zhǔn)確性, 本研究中采用循證檢驗(yàn)的辦法, 大大提高了三項(xiàng)檢驗(yàn)的陽性率(支抗試驗(yàn)陽性率提高26.00%、游離試驗(yàn)陽性率提高11.00%、放散試驗(yàn)陽性率提高8.00%), 很好地驗(yàn)證了與理論不相符的原因, 不為是臨床提高新生兒溶血病檢測準(zhǔn)確率的有效方法, 值得推廣。

［1］ 林建鋒.微柱凝膠技術(shù)檢測在新生兒ABO溶血病的應(yīng)用.中外健康文摘, 2013(4):97-98.

［2］ 楊麗.微柱凝膠法在新生兒溶血病檢測中的應(yīng)用效果.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用, 2014, 8(14):53-54.

［3］ 劉明芳.淺析新生兒溶血三項(xiàng)檢測.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘, 2014, 14(3):93, 98.

［4］ 邱華.母嬰血型不合導(dǎo)致的新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室分析.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用, 2014, 8(16):84-85.

［5］ 蔣峻峰.微柱凝膠免疫檢測法在新生兒溶血病中的應(yīng)用研究.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2014, 11(17):2362-2363.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.085

2015-01-21］

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