脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)探討

韋慧玲

脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)探討

韋慧玲

目的 探討脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)。方法 健康志愿者6例,志愿者均與抽脂要求相符,作為研究組；將同期另選6例健康志愿者作為對(duì)照組。分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25 g,給予培養(yǎng),并觀察目標(biāo)細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn),同時(shí)對(duì)異體脂肪干細(xì)胞及淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的增殖情況進(jìn)行觀察。結(jié)果 脂肪干細(xì)胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題,且對(duì)照組與研究組每毫升細(xì)胞液細(xì)胞數(shù)(CPM)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 脂肪干細(xì)胞有較小排斥反應(yīng),臨床應(yīng)引起重視,加強(qiáng)培養(yǎng)及分離技術(shù)研究。

脂肪干細(xì)胞；免疫學(xué)性質(zhì)

干細(xì)胞是具有自我增殖及更新能力的細(xì)胞, 依據(jù)不同分化階段可分為成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞兩類。與間質(zhì)干細(xì)胞相對(duì)比, 脂肪干細(xì)胞(ADSCs)在體外更易擴(kuò)增, 獲得容易, 且免疫原性低, 是臨床醫(yī)學(xué)及組織工程發(fā)展的重要突破。本探究分析脂肪干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì), 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 搜集本院2014年3月～2015年3月健康志愿者6例, 志愿者均與抽脂要求相符, 作為研究組；另選同期6例健康志愿者作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均對(duì)本研究知情；均身體健康。研究組女3例, 年齡21～37歲, 平均年齡(28.46±3.36)歲；男3例, 年齡20～38歲, 平均年齡(29.65±3.34)歲。對(duì)照組女3例, 年齡22～38歲, 平均年齡(28.51±3.29)歲；男3例, 年齡21～38歲, 平均年齡(29.70±3.42)歲。兩組健康志愿者性別、年齡一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 分別抽取兩組健康志愿者脂肪組織25 g, 將其放在離心管中, 后轉(zhuǎn)為培養(yǎng)皿中, 準(zhǔn)備處理, 離心管與培養(yǎng)皿均為無菌；剔除組織中筋膜及血管, 使用無菌溶液反復(fù)進(jìn)行沖洗；處理后, 用眼科剪對(duì)其進(jìn)行分割, 大小約為1.5 mm3,直至分割成糊狀, 在37℃環(huán)境下, 選擇Ⅰ型膠原酶(0.1%)予以震蕩進(jìn)行消化處理, 速度為120 r/min；采用LG-DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清(10%)終止消化, 并離心10 min, 后獲得高濃度的間質(zhì)組織細(xì)胞團(tuán), 對(duì)其進(jìn)行處理, 選擇紅細(xì)胞裂解液,并去除紅細(xì)胞, 采用篩網(wǎng)(100 μm)進(jìn)行過濾；將過濾液取出,使用鏈霉素100 g/L、青霉素100 U/ml、LG-DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清進(jìn)行重懸處理；處理后, 將其置于培養(yǎng)皿中, 直徑為100 mm, 接種, 設(shè)定濃度4×104/cm2；接種后, 在體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng), 溫度設(shè)定為37℃, 且每隔2 d更換一次培養(yǎng)液；待細(xì)胞生長檢測(cè)80%～90%時(shí), 按照比例1∶2進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

觀察目標(biāo)細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn), 方法選擇流式細(xì)胞術(shù)。首先使用BSA-PBS溶液(0.5%)對(duì)脂肪干細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行洗滌, 離心10 min, 1000 r/min, 獲取單細(xì)胞懸液, 轉(zhuǎn)變細(xì)胞濃度1×109/L；其次對(duì)組織相容性抗原Ⅰ(MHCⅠ)、MHCⅡ、CD44、CD29、CD90、CD31、CD45、CD34進(jìn)行熒光標(biāo)記, 將標(biāo)記后物質(zhì)加入懸液, 將其和熒光標(biāo)記的非特異性IgG同型進(jìn)行對(duì)比分析, 在37℃環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng), 30 min后, 反復(fù)使用PBS進(jìn)行處理, 使用多聚甲醛予以固定,用量30 g/L, 最后實(shí)施檢測(cè), 儀器選擇流式細(xì)胞儀。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn), 同時(shí)對(duì)異體脂肪干細(xì)胞及淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)的增殖情況進(jìn)行觀察。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn) 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脂肪干細(xì)胞分化群表面抗原和組織相容性抗原表達(dá)的特點(diǎn), 陰性表達(dá)抗原：CD31(2.81±1.04)%, CD34(17.12±0.54)%, CD45(1.39±0.27)%。陽性表達(dá)抗原：CD29(91.22±1.03)%, CD44(90.83±2.37)%, CD90(94.02±0.69)%。由此得知, 脂肪干細(xì)胞無造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題。

2.2 淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)情況 對(duì)照組與研究組CPM比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 表示脂肪干細(xì)胞對(duì)異體移植的排斥作用較小。見表2。

表1 兩組健康志愿者CPM比較(s, 個(gè))

表1 兩組健康志愿者CPM比較(s, 個(gè))

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3 討論

脂肪的組織基質(zhì)內(nèi)存在大量ADSCs, 作為成體干細(xì)胞,具有多向分化潛質(zhì), 在誘導(dǎo)條件適宜的情況下可分化成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等, 且增殖能力較強(qiáng)。研究顯示, ADSCs不僅具有細(xì)胞多分化功能, 如軟骨、肌肉、成骨、神經(jīng)、脂肪等, 而且其表面標(biāo)志表達(dá)同BMSs(骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)一致, 包括CD166、CD106、CD105、CD29等［1］。B7-1、HLA類抗原、B7-2、CD40L和CD40在BMSc不表達(dá), 體外BMSc能對(duì)淋巴細(xì)胞的反應(yīng)進(jìn)行抑制, 而體內(nèi)應(yīng)用BMSc可使異體移植皮片成活時(shí)間延長, 故同種異體BMSc是目前組織工程主要細(xì)胞來源［2］。

體外培養(yǎng)時(shí)ADSCs對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制及刺激能力為ADSCs體外的免疫學(xué)性質(zhì), 試驗(yàn)包括單向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、雙向淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng), 前者主要用以檢測(cè)刺激細(xì)胞ADSCs所致淋巴細(xì)胞的增殖程度, 數(shù)值用增殖后的數(shù)量表達(dá),且數(shù)值和ADSCs免疫原性之間呈正相關(guān)；后者主要用來檢測(cè)雙方抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用, 不對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行滅活,互相作為反應(yīng)細(xì)胞及刺激細(xì)胞, 數(shù)值用增殖后兩種細(xì)胞的總數(shù)量表達(dá)。ADSCs體外試驗(yàn)與多種可控因素相關(guān), 在體內(nèi)試驗(yàn)中, ADSCs免疫學(xué)性質(zhì)為復(fù)雜性免疫反應(yīng)綜合作用的結(jié)果, 異基因抗原免疫反應(yīng)與細(xì)胞因子、補(bǔ)體系統(tǒng)等密切相關(guān)。脂肪干細(xì)胞沒有造血系統(tǒng)污染及內(nèi)皮細(xì)胞污染問題,對(duì)異體移植的排斥作用較小, 臨床應(yīng)加強(qiáng)對(duì)細(xì)胞分離及培養(yǎng)的深入研究。

［1］ 韓長杰, 楊向群, 張傳森.脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì).中國組織工程研究與臨床康復(fù), 2010, 14(27):5095-5098.

［2］ 孔志華, 袁玉林, 熊志, 等.脂肪干細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)分析.現(xiàn)代診斷與治療, 2014, 25(22):5080-5082.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.30.079

2015-06-01］

450000 河南省鄭州市第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科