塘虱魚組織中氟滅菌的液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測方法之建立與方法確效

劉耀仁（鴻富錦精密電子（鄭州）有限公司,鄭州　450000）

塘虱魚組織中氟滅菌的液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測方法之建立與方法確效

劉耀仁
（鴻富錦精密電子（鄭州）有限公司,鄭州450000）

疾病的預(yù)防和治療一直是養(yǎng)殖業(yè)者的一大難題。當(dāng)疾病發(fā)生時，因養(yǎng)殖密度高，環(huán)境難以改善下便容易造成養(yǎng)殖生物大量死亡，此時養(yǎng)殖業(yè)者為了減少損失與控制病害，大多都會選擇投喂藥物來治療疾病。本文主要對氟滅菌在塘虱魚中的應(yīng)用進行了分析與探究。

氟滅菌；串聯(lián)質(zhì)譜儀；塘虱魚

疾病的預(yù)防和治療一直是養(yǎng)殖業(yè)者的一大難題。當(dāng)疾病發(fā)生時，因養(yǎng)殖密度高，環(huán)境難以改善下便容易造成養(yǎng)殖生物大量死亡，此時養(yǎng)殖業(yè)者為了減少損失與控制病害，大多都會選擇投喂藥物來治療疾病。但使用藥物對環(huán)境造成的沖擊卻往往容易被人們所忽略，藥物的殘留就是引發(fā)后續(xù)效應(yīng)的首要原因。

1　分析方法

1.1分析方法

秤取待測樣品放入50mL高速離心管中(肌肉1g；血漿、肝臟、腎臟、皮膚和脊椎骨0.1g)，加入3mL的超純水與6mL乙酸乙酯，震蕩10分鐘使其混合均勻，再于15℃下以5000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。收集上層液放置于透明玻璃試管中，高速離心管內(nèi)的殘余物質(zhì)再加入3mL乙酸乙酯，重復(fù)萃取一次，合并二次的上層液，在45℃下使用氮氣將其吹干，加入1mL的回溶液(乙腈:水;50:50%)震蕩回溶，經(jīng)過0.22微米的filter過濾，經(jīng)過適當(dāng)稀釋后，以液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)進行檢測。

1.2方法偵測極限

為了解分析方法所能偵測的最低濃度點，因此參考環(huán)境檢驗方法偵測極限測定指引NIEA-PA107確立分析方法的方法偵測極限。方法確效依據(jù)歐盟2002/657/EC決議書之規(guī)定，進行魚體組織中FLU殘留分析之確效實驗，獲得回收率、重復(fù)性、再現(xiàn)性CCα與CCβ等參數(shù)并且計算不確定度。

量測不確定度，量測不確定度的計算是參考梁(2006)的計算方式并加以修改。

建立分析殘留量檢測公式如下：

X－樣品中待測成分的含量，微克每千克；

Ax－測定液中待測成分的峰面積；

As－標(biāo)準(zhǔn)液中待測成分的峰面積；

Cx－標(biāo)準(zhǔn)液中待測成分的含量，微克每千克；

V－定容體積，mL；

m－取樣量，g

R－回收率，%

從式（1）可知，樣品中FLU測定濃度的不確定度是標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（Cx）、樣品質(zhì)量（m）、定容體積（V）、樣品溶液峰面積（Ax）、標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積（As）和回收率（R）的函數(shù)。其中峰面積為計算機自動積分所得，其不確定度可不予考慮。本次分析實驗的不確定度包含以下幾項：

（1）FLU標(biāo)準(zhǔn)溶液的不確定度：FLU標(biāo)準(zhǔn)溶液的不確定度包含有標(biāo)準(zhǔn)品純度的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)品稱量的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制的不確定度和標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋的不確定度構(gòu)成。

（2）樣品稱量的不確定度：天平穩(wěn)定度變異產(chǎn)生的不確定度，以肌肉樣品為例進行計算。

（3）溶液體積的不確定度：在本方法中包含樣品稀釋體積以及最終回溶體積。

（4）回收率的不確定度：因儀器狀態(tài)仍具有不確定度，故采用平均回收率做為計算不確定度之因素。

2　試驗結(jié)果

2.1方法偵測極限(MDL)：

塘虱魚各組織的MDL值如下。肌肉基質(zhì)的MDL為1.63ng/g；血漿基質(zhì)為1.25ng/ml；肝臟基質(zhì)為1.01ng/g；腎臟基質(zhì)為1.62ng/g；皮膚基質(zhì)為1.72ng/g；脊椎骨基質(zhì)為1.28ng/g。

2.2回收率與重復(fù)性：

分析塘虱魚各組織添加樣品中所含的FLU如下。300、600和900ng/g肌肉基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于88.03～93.55%，變異系數(shù)介于5.64～7.08%；血漿基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于83.19～95.05%，變異系數(shù)介于1.89～4.96%；肝臟基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于88.72～95.31%，變異系數(shù)介于5.66～7.05%；腎臟基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于83.60～95.22%，變異系數(shù)介于3.72～6.75%；皮膚基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于82.54～95.34%，變異系數(shù)介于2.73～6.07%；脊椎骨基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于86.10～93.24%，變異系數(shù)介于2.42～6.71%。

2.3再現(xiàn)性

塘虱魚各組織的FLU分析方法重復(fù)性如下。300、600和900ng/g肌肉基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為6.89、6.44和6.17%；血漿基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為5.67、4.98和2.89%；肝臟基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為6.26、6.61和6.32%；腎臟基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為5.06、5.04和7.04%；皮膚基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為5.31、4.61和6.34%；脊椎骨基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為4.69、5.39和7.31%。

2.4CCα與CCβ

塘虱魚各組織的FLU分析方法之CCα與CCβ結(jié)果如下。肌肉基質(zhì)添加樣品的CCα與CCβ分別為638和667ng/g；血漿基質(zhì)添加樣品分別為693和741ng/mL；肝臟基質(zhì)添加樣品分別為621和674ng/g；腎臟基質(zhì)添加樣品分別為669和706ng/g；皮膚基質(zhì)添加樣品分別為631和671ng/g；脊椎骨基質(zhì)添加樣品分別為691和762ng/g。

3　結(jié)束語

本次實驗所建立的FLU分析方法具有萃取步驟簡單，成本低廉等優(yōu)點，其確效的各項參數(shù)如滯留時間、相對離子強度、回收率、精密度、重復(fù)性等亦符合歐盟2002/657/EC的決議書的規(guī)范。

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