豉香型白酒酒餅中高產(chǎn)乙酸乙酯酵母菌的分離鑒定及發(fā)酵性能研究

黃光建,徐學(xué)鋒,+,郭梅君,曹 勁,楊幼慧,*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東廣州 510642;2.廣東省九江酒廠有限公司,廣東佛山 528203)

豉香型白酒酒餅中高產(chǎn)乙酸乙酯酵母菌的分離鑒定及發(fā)酵性能研究

黃光建1,徐學(xué)鋒1,+,郭梅君2,曹 勁1,楊幼慧1,*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東廣州 510642;2.廣東省九江酒廠有限公司,廣東佛山 528203)

從豉香型白酒酒餅中分離獲得高產(chǎn)乙酸乙酯酵母菌J10,其乙酸乙酯產(chǎn)量為3.119g/L。根據(jù)對(duì)該乙酸乙酯產(chǎn)生菌的形態(tài)學(xué)特征和5.8S rDNA-ITS序列分析,鑒定該菌為異常畢赤酵母。通過采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)該菌發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,獲得該菌的最佳發(fā)酵條件:小麥糖化液起始糖度10°Bx,pH4.0,發(fā)酵溫度28℃,發(fā)酵時(shí)間3d。在此優(yōu)化條件下,乙酸乙酯產(chǎn)量達(dá)8.05g/L,比優(yōu)化前提高158.04%。

豉香型白酒,乙酸乙酯,異常畢赤酵母,發(fā)酵條件優(yōu)化

乙酸乙酯作為白酒的重要香味物質(zhì),主要由微生物特別是產(chǎn)酯酵母代謝產(chǎn)生,它能使酒體更加香醇,其含量對(duì)白酒的品質(zhì)有重要影響。豉香型白酒是主產(chǎn)于我國(guó)珠三角地區(qū)的小曲酒,酒體玉潔冰清,豉香獨(dú)特,醇和甘滑,余味爽凈,在嶺南地區(qū)及華僑界享有盛譽(yù)[1]。由于生產(chǎn)工藝獨(dú)特,豉香型白酒中以乙酸乙酯為主的酯類含量較低,風(fēng)味上與其他白酒有較大差異[2]。利用產(chǎn)酯酵母提高乙酸乙酯等風(fēng)味物質(zhì)的產(chǎn)量,對(duì)于提升豉香型白酒的感官品質(zhì)有重要意義[3]。

近年來,有關(guān)產(chǎn)酯酵母的研究主要集中在從酒曲中分離產(chǎn)酯酵母,并將其應(yīng)用于濃、清、特、老白干等香型的白酒生產(chǎn)中,對(duì)提高不同香型白酒的總酯、四大乙酯和丙酸乙酯含量、使酒體醇厚、諸香協(xié)調(diào)等方面起到了較好效果[4-9],在小曲酒中的應(yīng)用也剛剛起步,董士偉等篩選出產(chǎn)酯酵母用于豉香型白酒提香,產(chǎn)乙酸乙酯達(dá)1.39g/L,取得一定效果[3];胡家俊等從小曲中分離得到多株產(chǎn)乙酸乙酯酵母,最高產(chǎn)酯量為0.465g/L[10]。為了進(jìn)一步提高豉香型酒中乙酸乙酯含量,本研究從豉香型白酒酒餅中分離產(chǎn)酯酵母,并應(yīng)用5.8S rDNA-ITS分析方法進(jìn)行快速鑒定,通過優(yōu)化發(fā)酵條件,提升產(chǎn)酯酵母的產(chǎn)酯能力,為后續(xù)工藝改進(jìn)提供優(yōu)良的菌種資源,以達(dá)到提高豉香型白酒品質(zhì)、生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)豉香型白酒的目的。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

酒餅 廣東省九江酒廠有限公司提供,以自然接種酒丸制成。

分離培養(yǎng)基 葡萄糖20g,酵母膏10g,蛋白胨20g,瓊脂20g,蒸餾水定容到1000mL,115℃,滅菌20min;發(fā)酵培養(yǎng)基 取適量小麥經(jīng)研磨后裝入1L三角瓶中,加入適量自來水,煮沸30min使之充分糊化,將糊化液置于60℃恒溫水浴鍋中,加入1g糖化酶保溫糖化2h,然后離心過濾,得上清糖化醪,保證糖化醪培養(yǎng)基的糖度高于12°Bx,冷藏待用。

生化培養(yǎng)箱 LRH-250A型,廣東省醫(yī)療器械廠;手持折光儀 WYT型,成都光學(xué)廠;pH計(jì) pHS-25型,上海偉業(yè)儀器廠;氣相色譜儀 GC17A型,島津分析儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分離初篩 采用稀釋涂布法將酒餅菌懸液進(jìn)行稀釋涂布:稱1g酒餅加入100mL無菌水中混合均勻,以10倍稀釋法稀釋至10-7,取稀釋菌液0.1mL分別涂布于分離培養(yǎng)基平板上,于30℃培養(yǎng)48h;根據(jù)菌落形態(tài)及鏡檢結(jié)果,確定初篩菌株,經(jīng)劃線分純后分別斜面保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 復(fù)篩 聞香：對(duì)初篩純化的菌株進(jìn)行小麥糖化液固體培養(yǎng)并嗅聞評(píng)定,記錄各菌株酯香味(香蕉、蘋果等香味)的強(qiáng)弱;產(chǎn)物檢測(cè) 將初篩菌株于發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行液體培養(yǎng),檢測(cè)乙酸乙酯和總酯生成量。

1.2.3 基于5.8S rDNA-ITS序列的分子鑒定

1.2.3.1 基因組DNA提取 具體方法參照文獻(xiàn)[11]。

1.2.3.2 5.8S rDNA-ITS測(cè)序 以基因組DNA為模板,使用酵母菌5.8S rDNA-ITS通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)進(jìn)行PCR,產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳后,回收純化產(chǎn)物,由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成測(cè)序。

1.2.3.3 系統(tǒng)發(fā)育分析 將測(cè)序獲得的酵母J10的5.8S rDNA-ITS序列與GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)分析,用Clustal W和MEGA Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,對(duì)進(jìn)化樹進(jìn)行親緣關(guān)系和系統(tǒng)發(fā)育評(píng)估分析。

1.2.4 發(fā)酵性能研究

1.2.4.1 裝液量對(duì)J10總酯產(chǎn)量的影響 250mL三角瓶分別裝50、100、150、200mL 12°Bx小麥糖化液,接入2%活化種子液,搖勻,30℃靜置培養(yǎng)5d,進(jìn)行總酯檢測(cè)分析。

1.2.4.2 轉(zhuǎn)速對(duì)J10總酯產(chǎn)量的影響 裝有100mL 12°Bx小麥糖化液的250mL三角瓶中接入2%活化種子液,搖勻,用八層紗布封口,分別以轉(zhuǎn)速0(靜置)、50、100、150r/min30℃培養(yǎng)5d,進(jìn)行總酯檢測(cè)分析。

1.2.4.3 初始糖度對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 分別取糖度為6、8、10、12、14°Bx、pH6.0的小麥糖化液100mL接種2%活化種子液,于30℃靜置培養(yǎng)5d,進(jìn)行總酯檢測(cè)分析。

1.2.4.4 pH對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 分別取pH為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0的12°Bx小麥糖化液100mL接種2%活化種子液,于30℃靜置培養(yǎng)5d,進(jìn)行總酯檢測(cè)分析。

1.2.4.5 發(fā)酵時(shí)間對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 在100mL 12°Bx,pH6.0的小麥糖化液中接入2%種子液,于30℃靜置培養(yǎng)不同的時(shí)間(2、3、4、5、6、7d),進(jìn)行總酯檢測(cè)分析。

1.2.4.6 發(fā)酵溫度對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 在100mL 12°Bx,pH6.0的小麥糖化液中接入2%種子液,于不同溫度(22、25、28、30、32℃)靜置培養(yǎng)5d,進(jìn)行總酯檢測(cè)分析。

1.2.4.7 底物對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 在100mL 12°Bx,pH6.0的小麥糖化液中接入2%種子液,分別添加2%乙醇,0.2%乙酸和0.1%磷酸二氫鉀,于30℃靜置培養(yǎng)5d,進(jìn)行總酯檢測(cè)分析。

1.2.4.8 接種量對(duì)產(chǎn)酯的影響 分別在100mL 12°Bx,pH6.0,酒精度為2%vol的小麥糖化液中按1%、2%、3%、4%、5%、6%(v:v)的比例接入活化種子液,于30℃靜置培養(yǎng)5d,樣品進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.2.4.9 產(chǎn)酯發(fā)酵條件優(yōu)化 根據(jù)上述單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇影響菌體生長(zhǎng)和總酯產(chǎn)量較為顯著的培養(yǎng)基初始糖度、pH、發(fā)酵溫度和時(shí)間為考察因素,按L9(34)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)(見表1),以總酯產(chǎn)量為檢測(cè)指標(biāo),確定最優(yōu)發(fā)酵條件。

表1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表Table 1 Factors and levels in the orthogonal experiments

1.2.5 乙酸乙酯和總酯的測(cè)定 參照國(guó)標(biāo)GB/T10345-2007指示劑法[12]。

1.3 數(shù)字統(tǒng)計(jì)分析

本研究使用SPSS16.0軟件對(duì)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 酵母的篩選

經(jīng)過分離培養(yǎng)基篩選分離得到15株疑似酵母菌,分屬五種不同的形態(tài),各選1個(gè)代表菌株進(jìn)行形態(tài)和理化指標(biāo)檢測(cè),結(jié)果見表2。

表2表明,在供試的5株酵母菌中,菌株J10產(chǎn)酯最高,總酯達(dá)3.298g/L,乙酸乙酯含量為3.119g/L,占總酯量的94.57%,顯著高于其它菌株;進(jìn)一步觀察其菌落和細(xì)胞形態(tài):菌落直徑1～1.5mm,有水果香;液態(tài)培養(yǎng)表面有菌膜,皺紋較細(xì)、薄,形成沉淀,液體澄清;鏡檢細(xì)胞形態(tài)為圓形至橢圓形,芽殖,無菌絲。

2.2 5.8S rDNA-ITS分析

2.2.1 PCR擴(kuò)增及測(cè)序 樣品DNA成功地?cái)U(kuò)增出約600bp的片段(見圖1),與酵母預(yù)期5.8S rDNA-ITS目的片段長(zhǎng)度相符,且無非特異性條帶,空白對(duì)照為陰性。將目標(biāo)條帶進(jìn)行切膠回收,送公司測(cè)序。

表2 酵母的菌落形態(tài)及理化指標(biāo)Table 2 The colonial morphology and physicochemical property of yeast

注：*“-”表示乙酸乙酯含量較低,沒有進(jìn)行氣相檢測(cè)。

圖1 菌株J10 5.8S rDNA-ITS PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 PCR amplification of 5.8S rDNA-ITS of J10注：M:Marker DL2000,泳道1:J10,泳道2:陰性對(duì)照。

2.2.2 測(cè)序結(jié)果 通過測(cè)序得知擴(kuò)增的DNA片段分子大小為618bp,且測(cè)序結(jié)果如下:

2.2.3 系統(tǒng)發(fā)育分析及鑒定 將菌株J10的5.8S rDNA-ITS序列與GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行BLAST比對(duì),結(jié)果顯示該序列與10個(gè)菌株的同源序列的同源性均高達(dá)99%以上,具有高度的相似性。以釀酒酵母Saccharomycescerevisiae的同源序列為外群,將供試菌株J10和10個(gè)最相似菌株的5.8S rDNA-ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹,如圖2所示。10個(gè)菌株與J10聚為一類,因Wickerhamomycesanomalus和Pichiaanomala為同物異名[13],結(jié)合菌落形態(tài)及顯微觀察結(jié)果,確定J10屬于Wickerhamomycesanomalus。

圖2 基于5.8SrDNA-ITS序列的NJ系統(tǒng)樹Fig.2 Phylogenetic tree constructed with 5.8S rDNA-ITS using the neighbor-joining method

2.3 J10產(chǎn)酯發(fā)酵性能研究

2.3.1 不同裝液量和轉(zhuǎn)速對(duì)J10總酯產(chǎn)量的影響 發(fā)酵過程中裝液量和轉(zhuǎn)速對(duì)Jl0產(chǎn)酯的影響分別見圖3、圖4。由圖3可知,裝液量對(duì)J10產(chǎn)酯效果影響顯著,隨著裝液量的增加,產(chǎn)酯量逐漸增大,裝液量為100mL(裝液系數(shù)為0.4)時(shí)產(chǎn)酯量達(dá)到最大,而隨后又隨著裝液量的增加而遞減,表明裝液量為100mL(裝液系數(shù)為0.4)時(shí)最利于J10的產(chǎn)酯培養(yǎng);圖4表明:裝液量為100mL時(shí)Jl0靜置培養(yǎng)的產(chǎn)酯能力明顯高于搖床培養(yǎng),產(chǎn)酯量達(dá)到3.34g/L,隨著轉(zhuǎn)速的增加,產(chǎn)酯明顯呈下降趨勢(shì)。可能原因如隋延鐸[14]在研究產(chǎn)酯酵母產(chǎn)酯條件時(shí)指出,產(chǎn)酯酵母在繁殖及產(chǎn)酯時(shí)均需要一定量的氧氣,但供氧量過大會(huì)阻止產(chǎn)酯作用的進(jìn)行。

圖3 不同裝液量對(duì)J10總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.3 Effects of liquid medium volume on the yield of total ester(n=3)

圖4 不同轉(zhuǎn)速對(duì)J10總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.4 Effect of rotation speeds on the yield of total ester(n=3)

2.3.2 初始糖度對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 由圖5可知,隨著初始糖度的增加,發(fā)酵液總酯產(chǎn)量不斷上升,當(dāng)糖度為12.0°Bx時(shí)產(chǎn)量達(dá)到3.14g/L,表明菌株J10發(fā)酵產(chǎn)酯的最佳初始糖度為12.0°Bx。

圖5 初始糖度對(duì)總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.5 Effect of initial concentration of sugar on the yield of total ester(n=3)

2.3.3 pH對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 不同pH對(duì)總酯產(chǎn)量的影響見圖6。發(fā)酵液pH主要影響發(fā)酵過程中各種酶的活性。圖6表明,培養(yǎng)基初始pH在3.0時(shí),總酯產(chǎn)量達(dá)到最大值,為4.23g/L,但隨著pH增大總酯生成量減少,本研究表明產(chǎn)酯酵母在較低pH下,能夠產(chǎn)生大量的酯類,這與關(guān)陽(yáng)等對(duì)產(chǎn)酯酵母特性的研究結(jié)果基本是一致的[15]。

圖6 pH對(duì)總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.6 Effect of pH on the yield of total ester(n=3)

2.3.4 發(fā)酵時(shí)間對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 發(fā)酵時(shí)間對(duì)總酯產(chǎn)量的影響見圖7。由圖7可知,發(fā)酵3d時(shí)總酯產(chǎn)量最高,為4.58g/L。但隨著發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng),總酯產(chǎn)量逐漸減少,與廖永紅等[16]在對(duì)3種產(chǎn)酯酵母總酯的生成特性研究時(shí)發(fā)現(xiàn)的結(jié)論一致,其可能原因是隨發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng),在發(fā)酵中難揮發(fā)性酯類也逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橐讚]發(fā)性酯類或其他物質(zhì)所致,因此J10合成總酯的適宜發(fā)酵時(shí)間為3d。

圖7 發(fā)酵時(shí)間對(duì)總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.7 Effect of fermentation time on the yield of total ester(n=3)

2.3.5 發(fā)酵溫度對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 不同溫度對(duì)總酯產(chǎn)量的影響見圖8。圖8表明,發(fā)酵溫度在25℃時(shí)總酯產(chǎn)量最大,達(dá)5.13g/L,表明在較低溫度下發(fā)酵有利于產(chǎn)酯酵母的產(chǎn)酯。

圖8 發(fā)酵溫度對(duì)總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.8 Effect of fermentation temperature on the yield of total ester(n=3)

2.3.6 不同底物對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 由圖9可知,分別添加乙醇、乙酸和磷酸二氫鉀均可提高總酯產(chǎn)量,但發(fā)酵液里共同添加乙醇、乙酸和磷酸二氫鉀最有利于總酯的形成,其總酯產(chǎn)量達(dá)5.03g/L。在培養(yǎng)基中添加乙醇、乙酸和磷酸二氫鉀等底物明顯利于產(chǎn)酯酵母發(fā)酵產(chǎn)酯,分析原因可能與產(chǎn)酯酵母酯酶代謝合成酯類的機(jī)制密切相關(guān)。產(chǎn)酯酵母能耐受一定濃度的酒精,能以乙醇作為碳源正常生長(zhǎng)代謝,且有較強(qiáng)的氧化特性,從而促進(jìn)了產(chǎn)酯酵母的呼吸作用[17];乙酸是形成乙酸乙酯的重要底物,而磷酸根離子是微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝的必需成分,適宜的磷含量有利于產(chǎn)酯酵母代謝形成酯類。因此,可以通過在發(fā)酵液中適當(dāng)添加乙醇、乙酸和磷酸二氫鉀等成分,提高產(chǎn)酯酵母產(chǎn)酯能力,促進(jìn)白酒提香和增強(qiáng)后味。

圖9 不同底物對(duì)總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.9 Effect of the substrate on the yield of total ester(n=3)注：1:CK;2:乙醇;3:乙酸;4:乙醇+乙酸; 5:磷酸二氫鉀;6:乙醇+乙酸+磷酸二氫鉀。

2.3.7 接種量對(duì)總酯產(chǎn)量的影響 接種量對(duì)總酯產(chǎn)量的影響見圖10。適宜的接種量有利于菌體合理利用有限的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行大量繁殖。由圖10可知,總酯的產(chǎn)量隨著接種量的增大而升高,但當(dāng)接種量大于4%時(shí),總酯產(chǎn)量降低。因此,菌株J10合成總酯的適宜接種量是4%。

表3 發(fā)酵條件正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 The results in the orthogonal

表4 正交設(shè)計(jì)方差分析表Table 4 Analysis of variance of orthogonal test

#,注:**表示該指標(biāo)影響極顯著。

圖10 接種量對(duì)總酯產(chǎn)量的影響(n=3)Fig.10 Effect of inoculating rate on the yield of total ester(n=3)

2.3.8 產(chǎn)酯發(fā)酵條件優(yōu)化 根據(jù)單因素對(duì)產(chǎn)酯影響的極差值,選擇對(duì)產(chǎn)酯影響較為顯著的四個(gè)因素,即培養(yǎng)基的初始糖度、pH、發(fā)酵溫度和時(shí)間,采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)考察其對(duì)J10菌株合成總酯的影響,結(jié)果見表3和表4。

由表3極差分析和表4方差分析可知,在發(fā)酵過程中,對(duì)J10菌株總酯產(chǎn)量影響的因素大小為B pH>D時(shí)間>A糖度>C溫度,四個(gè)因素對(duì)總酯的產(chǎn)量影響均達(dá)極顯著(p<0.01)。同時(shí)從表3可以得出J10生成總酯的最優(yōu)組合為A1B3C3D2,即培養(yǎng)基的初始糖度為10°Bx,pH為4.0,發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵時(shí)間為3d,接種量為4%,添加2%乙醇,0.2%乙酸和0.1%磷酸二氫鉀作為發(fā)酵底物。

經(jīng)驗(yàn)證,在該條件下,總酯的生成量可達(dá)8.51g/L,乙酸乙酯的產(chǎn)量為8.05g/L,比優(yōu)化前提高了158.04%。

3 結(jié)論

目前應(yīng)用于白酒中的產(chǎn)酯酵母多屬于漢遜酵母屬、產(chǎn)朊酵母屬、假絲酵母屬和球擬酵母屬等[18-19],本研究分離鑒定的產(chǎn)酯酵母J10為異常畢赤酵母,通過對(duì)Jl0的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,其總酯產(chǎn)量可達(dá)8.51g/L,乙酸乙酯8.05g/L,比優(yōu)化前提高了158.04%,與已報(bào)道的同類菌相比[9,20-21],有較強(qiáng)的產(chǎn)乙酸乙酯能力,是白酒生香的重要菌種,具有較好的應(yīng)用前景。有研究表明[22-23],異常畢赤酵母能耐受低pH、低水分活度、高滲透壓、厭氧等極端環(huán)境,相比有氧,限氧條件不僅能夠誘導(dǎo)異常畢赤酵母進(jìn)行酒精發(fā)酵,激活發(fā)酵途徑中的關(guān)鍵酶,而且對(duì)葡萄糖的吸收率和乙醇、甘油、乙酸乙酯等代謝物含量都有所增加。本研究為豉香型白酒的品質(zhì)提升提供了優(yōu)良的菌種資源,有關(guān)其在豉香型白酒中的應(yīng)用還需進(jìn)一步研究。

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食鹽生產(chǎn)限額年度計(jì)劃審批取消 鹽業(yè)去行政化

國(guó)務(wù)院再取消49項(xiàng)非行政許可審批事項(xiàng)，今后不再保留“非行政許可審批”這一審批類別。至此，國(guó)務(wù)院部門非行政許可審批事項(xiàng)清理工作全面完成，“非行政許可審批”這一概念退出了歷史舞臺(tái)，其中就包括食鹽生產(chǎn)限額年度計(jì)劃審批、食鹽分配調(diào)撥計(jì)劃和干線運(yùn)輸計(jì)劃審批。業(yè)內(nèi)認(rèn)為，食鹽生產(chǎn)配額取消后，企業(yè)將根據(jù)市場(chǎng)供求關(guān)系生產(chǎn)產(chǎn)品，逐漸發(fā)揮市場(chǎng)配置資源的作用，為將來的鹽業(yè)市場(chǎng)化改革打下基礎(chǔ)。

我國(guó)鹽業(yè)市場(chǎng)行政色彩一直比較濃重，目前省、市、縣三級(jí)鹽務(wù)管理局，不僅具有區(qū)域內(nèi)鹽業(yè)監(jiān)管、計(jì)劃調(diào)配職能，還掌握著食鹽的經(jīng)銷業(yè)務(wù)。而經(jīng)銷業(yè)務(wù)則由管理局的另一塊牌子“鹽業(yè)公司”來負(fù)責(zé)。鹽務(wù)管理局與鹽業(yè)公司“兩塊牌子，同一套班子”，在食鹽專營(yíng)體制下，既是“裁判”又是“運(yùn)動(dòng)員”。

除了相關(guān)體制改革外，食鹽價(jià)格改革也是市場(chǎng)關(guān)注的焦點(diǎn)。國(guó)家發(fā)改委發(fā)布《中央定價(jià)目錄》(征求意見稿)，向社會(huì)公開征求意見，與2001年版中央定價(jià)目錄相比，新的目錄中定價(jià)種類約減少46%，具體項(xiàng)目約減少80%，但備受關(guān)注的食鹽價(jià)格仍然沒有放開。

來源：中國(guó)食品科技網(wǎng)

Isolation and identification of a high-yield ethyl acetate yeast from xiaoqu of Soybean-flavor liquor and its fermentation characterization

HUANG Guang-jian1,XU Xue-feng1,+,GUO Mei-jun2,CAO Jin1,YANG You-hui1,*

(1.College of Food Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China;2.Guangdong Jiujiang Distillery Company Limited,Foshan 528203,China)

A high-yield ethyl acetate yeast J10 was isolated from the xiaoqu of soy-flavor liquor by screening and ethyl acetate analysis. The highest ethyl acetate was observed as 3.119g/L. According to the morphological properties and 5.8S rDNA-ITS sequence analysis of J10,the strain was identified asWickerhamomycesanomalus. Furthermore,the single factor and orthogonal experiments were adopted to optimize the fermentation conditions of J10. The initial concentration of wheat hydrolyzed liquid was 10°Bx,pH4.0,and J10 was fermented at 28℃ for 3d. The highest ethyl acetate of 8.05g/L was achieved after the optimization. It’s higher 158.04% than that of the control.

soybean-flavor liquor;ethyl acetate;Wickerhamomycesanomalus;optimization of fermentation process

2014-08-25 +并列第一作者。

黃光建(1987-),男,碩士,研究方向:發(fā)酵工程、釀酒。 徐學(xué)鋒(1977-),男,博士,副教授,研究方向:應(yīng)用微生物學(xué)。

*通訊作者:楊幼慧(1956-),女,碩士,教授,研究方向:發(fā)酵工程、釀酒。

國(guó)家科技部農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目(2012E0002005)。

TS201.3

A

1002-0306(2015)11-0153-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.11.022