桃紅四物湯促進(jìn)早期閉合性骨折大鼠愈合作用研究

李秀秀，李墨華，張 舸，金福厚

(黑龍江省齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

桃紅四物湯促進(jìn)早期閉合性骨折大鼠愈合作用研究

李秀秀，李墨華，張 舸，金福厚△

(黑龍江省齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

目的 探討桃紅四物湯對(duì)早期閉合性骨折大鼠愈合的促進(jìn)作用。方法 60只大鼠隨機(jī)分為正常組，骨折對(duì)照組和桃紅四物湯骨折治療組。取后2組制成早期閉合性骨折大鼠模型。骨折后第10天對(duì)血液流動(dòng)性和VEGF濃度進(jìn)行檢測(cè)，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 與正常組比較，骨折對(duì)照組全血黏度、血漿黏度均明顯增高(P<0.05)；與骨折對(duì)照組比較，桃紅四物湯骨折治療組的全血粘度、血漿黏度均明顯減少(P<0.01)。骨折對(duì)照組與正常組比較，VEGF濃度在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異(P>0.05)；與骨折對(duì)照組和正常組比較，桃紅四物湯骨折治療組VEGF濃度顯著增高(P<0.01)。結(jié)論 桃紅四物湯促進(jìn)大鼠骨折早期愈合的作用途徑與改善早期骨折血液流動(dòng)性和調(diào)節(jié)骨折早期VEGF濃度相關(guān)。

桃紅四物湯；骨折愈合；實(shí)驗(yàn)研究

桃紅四物湯首見于《醫(yī)宗金鑒》，是活血化瘀作用的經(jīng)典方劑之一，具有補(bǔ)血活血，止痛消腫，化瘀生新之功效，廣泛應(yīng)用于骨折的治療。臨床研究證實(shí)，桃紅四物湯可以通過調(diào)節(jié)骨折早期炎性指標(biāo)IL-1、IL-6和TNF-水平[1]，和改善骨折早期血液流動(dòng)性[2]等，對(duì)骨折愈合起到良好的促進(jìn)作用。本文采用實(shí)驗(yàn)性大鼠早期閉合性骨折模型，探討桃紅四物湯促進(jìn)骨折愈合的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物 60只SD大鼠，體重260 g～300 g，雌雄各半，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 藥物及試劑桃紅四物湯煎劑(藥物由齊齊哈爾中醫(yī)院制劑室提供) 其組成為熟地黃12 g，白芍9 g，紅花6 g，桃仁9 g，川芎6 g，當(dāng)歸9 g。以上藥物經(jīng)加水侵泡、常規(guī)煎煮、過濾以及蒸發(fā)，濃縮配置成生藥含量1.0 gmL-1的水煎液備用。大鼠血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒(上海凱博生化試劑有限公司批號(hào)：20130510)。生理鹽水(四川科倫大藥廠有限公司，批號(hào)：E030520)。

1.3 儀器 LBY-N7500A 全自動(dòng)血液流變儀(北京普利生儀器有限公司)、RAC-120全自動(dòng)血凝儀(上海天成科技有限公司)、熒光分光光度計(jì)(北京聯(lián)合科儀科技有限公司)。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型制作 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前均在實(shí)驗(yàn)室正常飼養(yǎng)7天。用張連方等的造模方法[3]，使用濃度為3.5%的水合氯醛，按體重10 Lg-1進(jìn)行麻醉，利用三點(diǎn)受力原理，采用骨折器造成脛骨閉合性骨折。拍X射線片檢驗(yàn)造模是否成功，術(shù)后3d肌肉注射青霉素40萬單位預(yù)防感染，每天1次。

2.2 分組與給藥 將大鼠隨機(jī)分成3組：正常組，骨折對(duì)照組和桃紅四物湯骨折治療組。每組20只。桃紅四物湯組灌胃量：6mlkg-1，正常組和骨折對(duì)照組均灌以等容量生理鹽水。每天給藥和生理鹽水均為1次，連續(xù)給藥10天。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 對(duì)骨折大鼠血液流動(dòng)性的影響 最后1次給藥1 h后，按前述用法用量，使用水合氯醛腹腔注射麻醉。在腹主動(dòng)脈取血6 mL，放入肝素抗凝管中，做大鼠全血粘度和血漿粘度檢測(cè)。并計(jì)算全血黏度/低切(10 s-1)、高切(120 s-1)和血漿粘度含量。

2.3.2 對(duì)骨折大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長因子(VEGF)的影響 最后一次給藥1 h后，按前述用法用量，使用水合氯醛腹腔注射麻醉。在腹主動(dòng)脈取血3 mL，放入一次性試管中，血液離心(3500轉(zhuǎn)/分)15 min，取上清液存放于冰箱(-20℃)中。嚴(yán)格按照大鼠血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)各組大鼠血清VEGF濃度。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)骨折大鼠血液流動(dòng)性的影響與正常組比較，骨折對(duì)照組全血黏度、血漿黏度均明顯增高(P<0.05)；與骨折對(duì)照組比較，桃紅四物湯骨折治療組的全血粘度、血漿黏度均明顯減少(P<0.01)。結(jié)果表明，桃紅四物湯能夠顯著降低大鼠骨折后的血液粘度。見表1。

3.2 對(duì)骨折大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長因子(VEGF)的影響骨折對(duì)照組與正常組比較，VEGF濃度在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異(P>0.05)；與骨折對(duì)照組和正常組比較，桃紅四物湯骨折治療組VEGF濃度顯著增高(P<0.01)。說明桃紅四物湯具有提高骨折大鼠體內(nèi)VEGF濃度的作用。見表2。

表1 桃紅四物湯對(duì)早期閉合性骨折大鼠血液流動(dòng)性的影響±s，n=20)

注：與正常組比較，*P<0.05，與骨折對(duì)照組比較，**P<0.05

表2 桃紅四物湯對(duì)骨折大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長因子(VEGF)的影響

注：與正常組比較，*P>0.05，與骨折對(duì)照組比較，**P<0.01

4 討論

《圣濟(jì)總錄·傷折門》云：“脈者，血之府，血行脈中……若因傷折，內(nèi)動(dòng)經(jīng)絡(luò)，血行之道不得宣通，瘀積不散，則為腫為痛，治宜除去惡瘀”?！动冡t(yī)大全》曰：“有跌傷骨折，宜活血化瘀為先，血不活則瘀不去，瘀不去則骨不能接也”?？梢妭鹘y(tǒng)中醫(yī)理論，對(duì)活血化瘀法在骨折早期治療中的重視。桃紅四物湯方中，桃仁、紅花為君，活血化瘀力強(qiáng)；再加上四物湯養(yǎng)血和血，去瘀血，生新血，消腫止痛，切合病機(jī)，促進(jìn)骨折愈合。

VEGF是一種特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長因子。文獻(xiàn)報(bào)道顯示[4]，VEGF能夠促進(jìn)骨折早期斷端骨痂新生微血管的增生，特異性增加骨折局部的血流量，增進(jìn)成骨細(xì)胞與軟骨內(nèi)骨化之間的相互作用，誘導(dǎo)成骨，加快骨折愈合過程。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以看出，桃紅四物湯能夠明顯增加骨折大鼠VEGF濃度，從而對(duì)早期骨折的愈合產(chǎn)生促進(jìn)作用。

血液流變學(xué)指標(biāo)是血液循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的反映。其中，全血黏度是反映血液流變學(xué)基本特征的參數(shù)，也是反映血液黏滯程度的重要指標(biāo)。全血黏度有高切變和低切變兩種黏度：高切變黏度反映紅細(xì)胞的變形能力，變形能力低，血液黏度便高；低切變黏度則反映紅細(xì)胞的聚集能力，紅細(xì)胞相互聚集，血液黏度升高。血漿黏度是血液黏滯性和濃稠性的反映，血漿黏度是影響全血黏度的重要因素之一。任映等的研究顯示[5]，骨折后骨膜微血管損傷、骨內(nèi)血液系統(tǒng)破壞等因素，引起血液黏度增加，以早期更為明顯。而骨折的愈合需要良好的微循環(huán)和充足的血運(yùn)[6]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，桃紅四物湯降低了血液黏度，使血液流動(dòng)性增加，從而改善了骨折部位血供，促進(jìn)早期骨折的愈合。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桃紅四物湯具有促進(jìn)早期骨折愈合的作用，其作用途徑與改善早期骨折血液流動(dòng)性和調(diào)節(jié)骨折早期VEGF濃度相關(guān)。

[1]劉善明.桃紅四物湯對(duì)下肢脛腓骨骨折早期炎性指標(biāo)水平影響分析[J].四川中醫(yī)，2014，32(8)：78-80.

[2]王威，廖蘇平，危蕾.桃紅四物湯對(duì)上肢閉合性骨折早期血液流變學(xué)和炎癥因子水平的影響[J].中藥材，2014，37(2)：361-362.

[3]張連方，齊進(jìn)，王晉申，等.小鼠閉合性股骨骨折模型的建立與評(píng)估[J].中國矯形外科雜志，2010，18(2)：143-146.

[4]鐘剛，裴福興，樊瑜波.血管內(nèi)皮生長因子基因轉(zhuǎn)染促進(jìn)骨折愈合的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國矯形外科雜志，2004，12(8)：604-606.

[5]任映，王琨，朱志慧，等.大分子葡萄糖酐血瘀大鼠偶氮藍(lán)體表特征與血液流變性的相關(guān)性[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(8)：105.

[6]趙志強(qiáng)，王體沛，王俊芳.丹參與川芎嗪對(duì)家兔骨折后血液流變學(xué)的影響[J].中華中醫(yī)學(xué)雜志，2005，29(5)：374-375.

李秀秀(1974-)，女，齊齊哈爾，研究方向：中藥方劑。

R285.5

A

1007-2349(2015)08-0066-02

2015-06-01)

△通信作者：金福厚，Tel：15845207022。