石菖蒲-遠志藥對不同配伍比例對小鼠胃腸形態(tài)的影響*

安 柳，吳 賽，陳海洋，呂銀娟，柳 琳，張智華△

(1.湖北中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院2013級本科生，湖北 武漢 430065；2.湖北中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院方劑學教研室，湖北 武漢 430065)

·實驗研究·

石菖蒲-遠志藥對不同配伍比例對小鼠胃腸形態(tài)的影響*

安 柳1，吳 賽1，陳海洋1，呂銀娟2，柳 琳2，張智華2△

(1.湖北中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院2013級本科生，湖北 武漢 430065；2.湖北中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院方劑學教研室，湖北 武漢 430065)

目的 探討石菖蒲-遠志藥對不同配伍比例和給藥時間對小鼠胃腸形態(tài)的影響。方法 昆明小鼠隨機分為正常對照組、石菖蒲組、遠志組、石菖蒲遠志1：1組、石菖蒲遠志1：2組和石菖蒲遠志2：1組，每組10只。以0.2 mL/10 g給藥量連續(xù)灌胃28 d，在7、14、28 d分別頸椎脫臼法處死3只小鼠，觀察小鼠的消化管，并取胃竇及十二指腸做HE染色。結果 經(jīng)大體觀察，與生理鹽水組相比，石菖蒲組、石菖蒲遠志2：1和1：1配伍組各消化管形態(tài)和結構基本正常，未見肉眼可見的異常增生、糜爛和潰瘍，黏膜色澤、紋理和結構正常。但遠志組胃腸脹氣明顯，腸壁菲薄。HE染色顯示，石菖蒲組各消化管顯示基本正常組織學結構，遠志組黏膜缺損，走向欠規(guī)則，而石菖蒲遠志2：1和1：1組接近正常組織。結論 石菖蒲未對小鼠的消化管造成明顯的毒副作用，遠志對消化管有副作用，但與石菖蒲配伍后能緩解這一不良作用。

石菖蒲；遠志；藥對；配伍；小鼠；胃腸形態(tài)

前期研究發(fā)現(xiàn)，“石菖蒲-遠志”是中醫(yī)治療老年性癡呆方劑中出現(xiàn)頻次最高的藥對[1]。但石菖蒲-遠志用于防治老年性癡呆往往需要長期用藥。藥理學研究已證實遠志有明顯的胃腸副作用[2-3]，兩藥配伍使用是否對胃腸存在不良作用還有待進一步驗證，為此筆者用正常小鼠作為實驗對象，探討石菖蒲-遠志藥對不同配伍比例、不同給藥時間對胃腸形態(tài)的影響，現(xiàn)匯報如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 雄性昆明種小鼠，體重(20±2)g，由武漢大學動物實驗中心提供。受試動物喂全價顆粒飼料，自由飲水，室溫(20±2)℃，濕度45-65%；受試動物購進后適應性喂養(yǎng)一周再進行正式試驗。

1.1.2 藥物和試劑 經(jīng)鑒定為正品的石菖蒲、遠志，均購于湖北順天醫(yī)藥有限公司(貨號140401、140301)；蘇木素(Sigma，貨號H9627)；伊紅Y(水溶性，貨號71014544)、無水乙醇、二甲苯、包埋石蠟等。

1.1.3 實驗器材 旋轉蒸發(fā)儀(RE-52AA，上海亞榮生化儀器廠)，SHZ-D(III)型循環(huán)水真空泵(天津華鑫儀器廠)、病理切片機(德國Leica RM 2016輪轉式切片機)、切片刀(日本羽毛R35一次性刀片)、組織攤烤片機(武漢俊杰JK-6生物組織攤烤片機)、載玻片及蓋玻片(江蘇世泰實驗器材有限公司)、顯微鏡(尼康E100型)、數(shù)碼單反相機(佳能550D)。

1.2 方法

1.2.1 藥物制備 分別取石菖蒲與遠志藥材共180 g依次以1：1、1：2、2：1比例加水8倍煎煮，大火煎開，小火煎40 min，第2次加4倍量水，同法操作，合并2次的藥液。將藥液轉移至旋轉蒸發(fā)儀，于75℃減壓回收水，濃縮至1 g/mL生藥量的藥液，保存在-20℃冰箱中，臨用時取出。

1.2.2 動物分組及給藥 將實驗動物隨機分為正常對照組、石菖蒲組、遠志組、石菖蒲遠志1：1組、石菖蒲遠志1：2組和石菖蒲遠志2：1組，每組10只。各組分別灌胃相應藥物，給藥量為0.2 mL/10 g，對照組灌胃等容積生理鹽水，給藥4周。

1.2.3 胃腸取材及HE染色 分別在7、14 d和28 d末次灌胃后3 h，各組動物隨機取3只小鼠頸椎脫臼法處死，迅速打開腹腔取胃、腸組織。取材后仔細觀察各實驗鼠的胃腸，先從外面觀察胃壁和腸壁是否光整、是否有結節(jié)或腫塊形成。然后切開胃壁和腸壁，觀察胃、腸黏膜是否完整，有無潰瘍、糜爛或腫瘤形成。肉眼觀察后分別取胃竇部和十二指腸部，并于10%福爾馬林液中固定。常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，HE常規(guī)染色，光鏡下觀察胃腸病理學改變并拍照。

2 結果

2.1 一般情況及大體觀察 給藥組在灌胃后約3 d開始，部分小鼠出現(xiàn)進食減少，體質量下降，活動減少等，尤以遠志組明顯。而空白組小鼠均未出現(xiàn)上述情況。遠志組和石菖蒲遠志1：2組各有1只小鼠死亡，石菖蒲組因灌胃誤操作死亡1只。

小鼠取材后，立即解剖胃、腸。解剖胃時，先沿胃大彎處剪開；解剖腸時沿腸系膜緣的對側剪開。用生理鹽水將內容物沖洗干凈，然后將之展開、平攤，用肉眼及解剖顯微鏡觀察胃、腸黏膜，發(fā)現(xiàn)對照組、石菖蒲和2：1、1：1配伍組小鼠的胃、腸黏膜均呈現(xiàn)基本正常的黏膜形態(tài)，未見出血、糜爛、潰瘍和腫瘤形成等，但遠志組胃腸脹氣明顯，腸壁菲薄，未見明顯出血、糜爛和潰瘍，1：2配伍組也表現(xiàn)出一定程度的胃腸脹氣，腸壁薄，無出血、糜爛等。

2.2 各組小鼠胃壁HE染色觀察 對照組小鼠胃竇組織經(jīng)HE染色顯示：黏膜呈粉紅色，被覆黏液，黏膜皺襞表面光滑，走向規(guī)則；胃底腺之間可見少量的結締組織；固有層下可見平滑肌層。與對照組相比，石菖蒲組、2：1配伍組和1：1配伍組灌胃小鼠均未發(fā)現(xiàn)其胃壁黏膜出現(xiàn)損傷；高倍鏡下可見主細胞和壁細胞符合正常的形態(tài)學結構，未出現(xiàn)病變特征；也未發(fā)現(xiàn)有明顯的毛細血管擴張等現(xiàn)象。但遠志組胃黏膜組織不同程度充血水腫，固有層和黏膜下層可見大量中性粒細胞、嗜酸性粒細胞堆積，有少量潰瘍點，并隨著給藥時間的延長，黏膜損傷程度逐漸加重(見圖1)。

圖1 給藥14 d、28 d，各組胃竇HE染色：A-F分別為對照組、石菖蒲組、遠志組、1：1組、1：2組、2：1組

2.3 各組小鼠腸HE染色觀察 對照組小鼠腸組織經(jīng)HE染色顯示正常的腸黏膜結構，黏膜和黏膜下層向腸腔突起，形成皺襞，可見許多的葉狀、指狀絨毛突向腸腔，柱狀細胞、杯狀細胞等排列正常；黏膜下層有許多黏液性的腸腺，在大腸的黏膜下層內有大量的脂肪細胞；平滑肌排列規(guī)則，邊界清晰。與對照組相比，石菖蒲組及2：1、1：1配伍組小鼠灌胃后未發(fā)現(xiàn)其黏膜和黏膜下層結構出現(xiàn)明顯變化，未發(fā)現(xiàn)腸腔有明顯的毛細血管擴張等現(xiàn)象。但遠志組和1：2配伍組腸黏膜絨毛完整性被破壞，黏膜組織充血水腫，上皮脫落、壞死，大量炎細胞浸潤，且隨著給藥時間的延長，病變加劇(見圖2)。

圖2 給藥7d、28d，各組腸HE染色：A-F分別為對照組、石菖蒲組、遠志組、1：1組、1：2組、2：1組

3 討論

石菖蒲為天南星科多年生草本植物石菖蒲的根莖，有開竅醒神，化濕和胃，寧神益智之功。有研究發(fā)現(xiàn)石菖蒲通過抑制胃腸(主要是胃)收縮活動而對胃脘脹痛具有治療作用。石菖蒲對胃頭區(qū)無明顯作用，但對胃尾區(qū)的平滑肌具有興奮作用[4]，并有促進消化液的分泌及制止胃腸異常發(fā)酵、延緩平滑肌痙攣的作用[5]。至于其副作用，有人認為石菖蒲長期給藥可導致實驗動物胃腸道腫瘤[6-7]，存在潛在的致畸、致癌作用，但也有文獻報道否認了這一點[8]，認為其對胃腸形態(tài)無影響。

遠志為遠志科多年生草本植物遠志或卵葉遠志的根，具有安心寧神，祛痰開竅，消散癰腫等功效?，F(xiàn)代研究證實遠志在常規(guī)用量時即可引起輕度惡心、腹脹，能使胃黏膜損傷，胃壁變薄，胃腸道脹氣，抑制胃排空及小腸推進運動，嚴重影響胃腸道消化功能，若大劑量服用可引起惡心、嘔吐、腹瀉、溶血等不良反應，并可導致實驗動物胃黏膜出血、脫落，呈現(xiàn)出明顯的胃腸靶器官副作用。研究還發(fā)現(xiàn)遠志較強的祛痰作用是其所含皂苷對胃黏膜的刺激作用，反射性地促進支氣管分泌液增加所致[9]。生遠志提取液能夠降低胃部興奮性神經(jīng)遞質P物質含量，減弱Ca2+-ATP酶活性，增加NO含量，從而干預胃腸肌電慢波，并且還可以通過減少胃腸道cajal間質細胞的數(shù)量抑制胃腸運動[10-11]。鑒于生遠志明顯的毒副作用，傳統(tǒng)多通過炮制來降低毒性。研究發(fā)現(xiàn)生遠志與姜遠志能顯著抑制胃腸運動及消化功能，其蜜炙品、甘草炮制品的抑制作用相對弱[2-3]，配伍厚樸可在一定程度上緩解遠志胃腸動力抑制的作用[12-13]。也有研究發(fā)現(xiàn)打破遠志糖基可降低其胃腸毒性[14]。

到目前為止，石菖蒲遠志配伍后對胃腸作用方面的研究報道較少。如前所述，遠志大量或長期使用對胃腸有毒副作用，然而研究發(fā)現(xiàn)石菖蒲遠志散(由石菖蒲、遠志、豬牙皂角組成)屬于毒性較小的藥物，且急性毒副作用較少[15]。已證實石菖蒲可能通過抑制遠志皂苷溶出而對遠志有減毒作用[16]。當兩種單味藥配伍合煎時，藥對化合物群的組成發(fā)生了明顯變化，有大量微量組分被檢出，也有部分來自遠志或石菖蒲的成分消失或含量發(fā)生了明顯變化[17]。因此石菖蒲能否降低遠志的胃腸毒副作用值得我們思考，通過以上分析我們可以設想兩藥配伍后有可能達到“糾偏減毒”的效果。

實驗發(fā)現(xiàn)石菖蒲組及2：1配伍組對胃腸影響較小，其次為1：1配伍組，而遠志組和1：2配伍組有一定的胃腸毒性，證實遠志確有胃腸毒性，而石菖蒲對其毒性有一定的拮抗作用。

由實驗結果可知，若要減低遠志的胃腸毒性，石菖蒲遠志以2：1配伍為最佳。為了進一步探討兩藥配伍后對實驗動物胃腸消化功能的影響，我們又選用了大鼠作為實驗對象，給藥28 d后，分別在7、28 d行HE染色觀察其胃及空腸的形態(tài)學變化，檢測其胃酸、胃蛋白酶、胃泌素及生長抑素的水平，初步探討了其作用機制，限于篇幅，另文報道。

總之，石菖蒲-遠志是古今抗癡呆方劑中出現(xiàn)頻次最高的藥對之一，此藥對在益智抗衰方面應用前景廣闊，若能深入、系統(tǒng)研究，為這一藥對的臨床安全及合理使用提供科學依據(jù)，具有重要的學術價值和科學意義。

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Effect of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia on Mice Gastrointestinal Form with Different Compatibility Proportions

AN Liu1, HUA Du-ping1, WU Sai1, YE Wen-jing1, CHEN Hai-yang1, ZENG Zi-xuan1,LV Yin-juan2, LIU Lin2, ZHANG Zhi-hua2

(1.SchoolofBasicMedicine,HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Wuhan430065,Hubei; 2.PrescriptionsTeachingSection,DepartmentofBasicMedicine,HubeiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Wuhan430065,Hubei)

Objective: To study the effect of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia on mice gastrointestinal form with different compatibility proportions. Methods: Kunming mice were randomly divided into a normal control group, an Acorus Tatarinowii (AT) group, a Polygala Tenuifolia (PT) group, a 1:1 AT group, a 1:2 AT group and a 2:1 AT-PT group, 10 mice per group. Each group was intragastrically administrated with 0.2 mL/10g dose of these drugs for successive 28 days, and three mice were respectively killed by cervical dislocation at the 7th, 14th and 28th day, to observe their digestive tract and take their gastric antrum and duodenum to do HE staining. Results: When compared with the saline group, the digestive tract morphology and structure of AT group, 2:1 AT-PT group and 1:1 AT group were normal, no visible dysplasia, erosions and ulcers and their mucous membrane color, texture and structure were normal, but in PT group, the flatulence of the mice was obvious and their intestinal were meager. HE staining showed that AT group showed normal histology of the digestive tract while PT group showed mucosal defect, towards irregular, but 2:1 AT-PT group and 1:1 AT group were close to normal tissue. Conclusion: Acorus Tatarinowii do not cause significant side effect on the digestive tract of the mice and Polygala Tenuifolia do cause side effect on the digestive tract of the mice, but the compatibility of Acorus Tatarinowii and Polygala Tenuifolia can alleviate the adverse effect.

Acorus Tatarinowii, Polygala Tenuifolia, medicine pair, compatibility, mice, gastrointestinal form

國家自然科學基金青年項目(NO：81202734)；湖北中醫(yī)藥大學2014“挑戰(zhàn)杯”大學生課外學術科技作品項目。

安柳(1991-)，女，湖北，湖北中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院2013級中醫(yī)學七年制學生。

△通信作者：張智華，E-mail：zzhor@163.com。

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1007-2349(2015)08-0063-04

2015-05-21)