國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素體外抗菌活性比較

嵇金如， 沈 萍， 魏澤慶， 陳艷艷， 應(yīng)超群， 李蘭娟， 肖永紅

·論著·

國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素體外抗菌活性比較

嵇金如， 沈 萍， 魏澤慶， 陳艷艷， 應(yīng)超群， 李蘭娟， 肖永紅

目的 比較替加環(huán)素國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口制劑對(duì)常見臨床分離菌的體外抗菌效果。方法 標(biāo)準(zhǔn)肉湯稀釋法測(cè)定國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口替加環(huán)素制劑對(duì)臨床分離菌株最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果 國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素制劑均具有廣譜和強(qiáng)大體外抗菌活性。對(duì)于腸桿菌科細(xì)菌具有良好的體外抗菌作用，MIC90≤2 mg/L，其中對(duì)大腸埃希菌MIC90為0.25 mg/L；對(duì)碳青霉烯類敏感和耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC90均分別為0.5 mg/L和2 mg/L；對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腸球菌屬M(fèi)IC90均為 0.25 mg/L；對(duì)肺炎鏈球菌MIC90分別為0.25 mg/L和0.125 mg/L；對(duì)流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌MIC90≤0.125 mg/L；對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌抗菌活性稍差，MIC90為4 mg/L；2種制劑對(duì)各種細(xì)菌敏感率幾乎相同，對(duì)各種細(xì)菌的累積抑菌曲線也幾乎重疊。結(jié)論 替加環(huán)素具有強(qiáng)大廣譜體外抗菌活性，對(duì)各種耐藥菌抗菌作用突出；進(jìn)口與國(guó)產(chǎn)替加環(huán)素制劑體外抗菌效果相同。

替加環(huán)素； 體外抗菌活性； 最低抑菌濃度

替加環(huán)素是半合成四環(huán)素類藥物米諾環(huán)素的衍生物，被分類為甘氨酰環(huán)素類。該藥物具有非常廣的抗菌譜，對(duì)臨床常見耐藥菌具有強(qiáng)大抗菌活性，同時(shí)具有良好的藥動(dòng)學(xué)特征[1-2]。本品于2005年美國(guó)食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療18歲及以上患者敏感菌所致感染，包括復(fù)雜腹腔內(nèi)感染(如復(fù)雜闌尾炎、腹腔內(nèi)膿腫)和復(fù)雜的皮膚及軟組織感染(如燒傷感染、深部軟組織感染和潰瘍感染)，其后也被批準(zhǔn)為治療社區(qū)獲得性肺炎藥物[3]。

替加環(huán)素在我國(guó)沒有申請(qǐng)專利保護(hù)，國(guó)內(nèi)制藥企業(yè)對(duì)替加環(huán)素進(jìn)行了仿制并獲得我國(guó)食品藥品監(jiān)督管理總局的批準(zhǔn)。本研究比較國(guó)產(chǎn)替加環(huán)素(澤坦，江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司)和進(jìn)口替加環(huán)素(泰閣，輝瑞制藥有限公司產(chǎn)品)制劑對(duì)臨床常見細(xì)菌和主要耐藥菌的體外抗菌效果，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來(lái)源 分別收集2010―2013年浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院住院感染患者分離不重復(fù)菌株1 297株和2010―2011年全國(guó)216株苛養(yǎng)菌，細(xì)菌主要分離自血液、痰、尿、傷口分泌物等。菌株分布見表1。

質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922、大腸埃希菌ATCC 35218、金黃色葡萄球菌(金葡萄)ATCC 29213，為本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 抗菌藥物和培養(yǎng)基 2種注射用替加環(huán)素制劑分別為輝瑞制藥有限公司產(chǎn)品(泰閣)，50 mg/支(批號(hào) AHLB/15，有效期至2014年8月)和江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品(澤坦)，50 mg/支(批號(hào)130401，有效期至2014年9月)，均為市售商品。使用說(shuō)明：藥物加5.3 mL 0.9% NaCl配制10 g/L的溶液。Mueller-Hinton 肉湯(MHB)干粉為英國(guó)OXOID公司產(chǎn)品，分別用CaCl2·2H2O和MgCl2·6H2O調(diào)節(jié)陽(yáng)離子至20～25 mg/L Ca2+和10～12.5 mg/L Mg2+。

1.2 方法

按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)[4]，微量肉湯稀釋法測(cè)定國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素制劑的最低抑菌濃度(MIC)，按照該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的K-B法進(jìn)行大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBL)的檢測(cè)。2種制劑均以生理鹽水配制為10 g/L的貯存液，-70 ℃保存?zhèn)溆茫粶y(cè)定前再進(jìn)一步稀釋為1 g/L溶液，用全自動(dòng)抗生素倍比稀釋系統(tǒng)(MDS-1100，大日本精機(jī)株式會(huì)社)，用調(diào)節(jié)好陽(yáng)離子濃度的肉湯即CAMHB稀釋為0.015、0.03、0.06、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16 mg/L，再用全自動(dòng)微孔分液系統(tǒng)(MDS-1200，大日本精機(jī)株式會(huì)社)分注到96孔板。

凍存菌株復(fù)蘇后，純培養(yǎng)鑒定，接種于MHB過(guò)夜培養(yǎng)，所得菌液進(jìn)一步稀釋為 0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝唬?∶10稀釋后，用全自動(dòng)菌懸液接種系統(tǒng)(MDS-1300，大日本精機(jī)株式會(huì)社)接種到預(yù)制藥物96孔板，每孔接種4 μL。96孔板置于35 ℃孵箱孵育 16 ～20 h，觀察。

表1 1 513株菌株分布

1.3 數(shù)據(jù)分析

分析2種制劑對(duì)不同細(xì)菌MIC范圍、MIC50和MIC90，繪制二者對(duì)主要細(xì)菌的累積抗菌曲線。根據(jù)美國(guó)FDA替加環(huán)素折點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算其對(duì)各種細(xì)菌的敏感率[3]。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)革蘭陰性菌抗菌活性比較

國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素制劑對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的MIC范圍均為0.06～8 mg/L，兩者差異不大，個(gè)別菌種MIC范圍相差一個(gè)稀釋度；對(duì)肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌和摩根摩根菌MIC90值2 mg/L，較其他腸桿菌科細(xì)菌MIC90值偏高；對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC為0.06～16 mg/L，對(duì)碳青霉烯類敏感和耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌MIC90值均分別為0.5 mg/L和 2 mg/L；對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌的MIC分別為0.06～8 mg/L和0.06～16 mg/L；對(duì)流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌具有相似抗菌活性，MIC90值均為 0.125 mg/L。各種革蘭陰性菌對(duì)2種制劑敏感率基本相同。見表2。

表2 國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素制劑對(duì)1 036株革蘭陰性菌的體外抗菌活性比較

-: no breakpoint.

2.2 對(duì)革蘭陽(yáng)性菌抗菌活性比較

2種替加環(huán)素制劑對(duì)金葡菌和表皮葡萄球菌MIC范圍是0.03～0.5 mg/L，MIC90為 0. 25 mg/L。對(duì)腸球菌MIC范圍是0.03～0.25 mg/L，MIC90為 0.125 mg/L 或0.25 mg/L。對(duì)肺炎鏈球菌MIC值與其他陽(yáng)性菌的MIC值相近，且MIC與細(xì)菌對(duì)青霉素的敏感性無(wú)關(guān)。2種制劑對(duì)肺炎鏈球菌MIC50值分別為0.06 mg/L和 0.125 mg/L, MIC90值分別為0.125 mg/L和0.25 mg/L。各種革蘭陽(yáng)性菌對(duì)2種制劑敏感率基本相同。見表3。

2.2 國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素制劑累積抗菌曲線

2種制劑對(duì)各種細(xì)菌累積抗菌曲線基本重合。從圖1、圖2可見，替加環(huán)素對(duì)流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、葡萄球菌、肺炎鏈球菌和腸球菌曲線偏左，MIC值低，而對(duì)腸桿菌科、不發(fā)酵糖革蘭陰性菌曲線偏右，MIC值偏高。

表3 國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素制劑對(duì)477株革蘭陽(yáng)性菌的體外抗菌活性比較

-: no breakpoint.

圖1 國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口替加環(huán)素制劑對(duì)各種革蘭陰性菌的累積抗菌曲線

3 討論

替加環(huán)素作為一種甘氨酰環(huán)素類藥物，在米諾環(huán)素9位分子上添加叔丁基甘氨酞胺基團(tuán)而衍生的一種新型四環(huán)素類抗生素。由于9位替代基團(tuán)形成的空間位阻作用，使其與核糖體靶位的親和性比米諾環(huán)素或四環(huán)素高5倍以上，克服了2種主要的獲得性四環(huán)素耐藥機(jī)制核糖體保護(hù)和主動(dòng)外排(tet和otr基因介導(dǎo))機(jī)制。因此替加環(huán)素具有廣譜抗菌活性，特別是對(duì)各種耐藥菌具有強(qiáng)大的抗菌活性，并已用于臨床治療[1-2,5]。

本研究表明替加環(huán)素對(duì)革蘭陰性菌，如流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、大腸埃希菌抗菌活性非常突出，對(duì)其他腸桿菌科細(xì)菌次之，對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌MIC90為2～4 mg/L；對(duì)葡萄球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌MIC90≤0.25 mg/L。測(cè)定結(jié)果也表明，替加環(huán)素抗菌活性不受細(xì)菌特有的耐藥機(jī)制影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道相似[1-2,6-8]。本次研究中發(fā)現(xiàn)少量對(duì)替加環(huán)素中介和耐藥肺炎克雷伯菌，值得注意。

“澤坦”是我國(guó)江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司開發(fā)的替加環(huán)素仿制劑，于2012年由國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)上市，其適應(yīng)證與進(jìn)口替加環(huán)素(泰閣，輝瑞制藥有限公司)相同。本研究結(jié)果顯示，兩者均具有良好抗菌效果。與泰閣相比較，澤坦對(duì)個(gè)別細(xì)菌MIC90高一個(gè)稀釋倍數(shù)，如不產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌、產(chǎn)氣腸桿菌和肺炎鏈球菌，但兩者對(duì)所有細(xì)菌敏感率基本相同，累積抑菌曲線也基本呈重疊狀態(tài)，這種微小差異無(wú)臨床意義[4]。

鑒于成品藥物在配制過(guò)程中，制劑工藝、藥品裝量、制劑穩(wěn)定性、可溶性等均可對(duì)藥物效能造成影響[9]，本研究特意使用從市場(chǎng)購(gòu)置國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口2種制劑進(jìn)行比較，所得結(jié)果能反映成為藥物成品后兩者之間的情況，為臨床用藥提供直接對(duì)照數(shù)據(jù)。結(jié)果2種制劑具有幾乎相同的體外抗菌效果，這為臨床用藥提供了基本保障。

本研究為保證結(jié)果可靠準(zhǔn)確，選擇標(biāo)準(zhǔn)肉湯稀釋法測(cè)定替加環(huán)素MIC值。大量文獻(xiàn)報(bào)道，可能由于替加環(huán)素本身結(jié)構(gòu)與其親脂性特點(diǎn)，紙片擴(kuò)散法測(cè)定結(jié)果與肉湯稀釋法之間存在較大差異，即使是定量E試驗(yàn)擴(kuò)散法，所得MIC值也較肉湯稀釋法高。Piller等[10]發(fā)現(xiàn)，E試驗(yàn)測(cè)定替加環(huán)素的MIC值較肉湯稀釋法高一倍，雖然兩法一致性尚在可接受范圍，但對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌、黏質(zhì)沙雷菌和肺炎鏈球菌則差異在4倍以上；Zarkotou等[11]研究也發(fā)現(xiàn)，與肉湯稀釋法比較，VITEK2 和E試驗(yàn)所得MIC值偏高，且均存在明顯大誤差；另外，K-B紙片擴(kuò)散法與肉湯稀釋法也存在明顯差異[12]。有鑒于此，在進(jìn)行替加環(huán)素體外抗菌活性測(cè)定時(shí)，應(yīng)盡量選用肉湯稀釋法，E試驗(yàn)可作為替代方法，而臨床常用的自動(dòng)化藥敏測(cè)定系統(tǒng)以及K-B法結(jié)果大多不可靠。

[ 1 ] Doan TL, Fung HB, Mehta D, et al. Tigecycline: a clycylcycline antimicrobial agent[J]. Clin Ther,2006, 28(8):1079-1106.

[ 2 ] Dowzicky MJ, Park CH. Update on antimicrobial susceptibility rates among Gram-negative and Gram-positive organisms in the United States: results from the Tigecycline Evaluation and Surveillance Trail(TEST) 2005-2007[J]. Clin Ther, 2008,30(11):2040-2050.

[ 3 ] TYGACIL?(tigecycline) for injection for intravenous use initial U.S.[EB/OL]. http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2013/021821s026s031lbl.pdf.

[ 4 ] Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S]. Twenty-third infromational suplement, 2013, M100-S23.

[ 5 ] van Duin D, Kaye KS, Nueuner EA, et al. Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae: a review of treatment and outcomes[J]. Diagn Microbiol Infect Dis, 2013,75(2):115-120.

[ 6 ] 張小江，徐英春, 原英, 等. 替加環(huán)素等14種抗菌藥物對(duì)多重耐藥菌的體外抗菌活性研究[J].中國(guó)感染與化療雜志，2009, 9(5): 366-368.

[ 7 ] 張冀霞，王占偉，王啟，等. 替加環(huán)素對(duì)臨床常見多重耐藥菌的體外抗菌活性研究[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013, 36(4)：308-313.

[ 8 ] Andrasevic AT, Dowzicky MJ.Invitroactivity of tigecycline and comparators against Gram-negative pathogens isolated from blood in Europe (2004-2009)[J]. Int J Antimicrob Agent, 2012,39(2):115-123.

[ 9 ] Tattevin P, Cremieux AC, Rabaud C, et al. Efficacy and quality of antibacterial generic products approved fro human use: a system reivew[J]. Clin Infect Dis, 2014, 58(4):458-469.

[10] Piller CM, Draghi DC, Dowzichy MJ, et al.Invitroactivity of tigecycline against Gram-positive and Gram-negative pathogens as evaluated by broth microdilution and Etest[J]. J Clin Microbiol, 2008, 46(9):2862-2867.

[11] Zarkotou O, Pourmaras S, Altouvas G, et al. Comparative evaluation of tigecycline susceptibiltiy testing methods for expanded-spectrum cephalosporin-and carbapenem-resistant Gram-negative pathogens[J]. J Clin Microbiol, 2012,50(11):3747-3750.

[12] Liu JW, Ko WC, Huang CH, et al. Agreement assessment of tigecycline susceptibility determined by the disk diffusion and broth microdiltion methods among commonly encountered resistant bacterial isolates: results from the tigecyclineinVitroSurveillance in Taiwan(TIST) study,2008 to 2010[J]. Antimicrob Agents Chemother,2012,56(3):1414-1417.

Invitroantibacterial activity of imported and domestic tigecycline

JI Jinru, SHEN Ping, WEI Zeqing, CHEN Yanyan, YING Chaoqun, LI Lanjuan, XIAO Yonghong

. (Collaborative Initiative Center for Diagnosis and Treatment of Infectious Diseases, State Key Laboratory for Diagnosis & Treatment of Infectious Diseases, First Affiliated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310003, China)

Objective To compare theinvitroantibacterial activity of imported and domestic tigecycline against clinical isolates. Methods Standard broth microdilution method was used to determine the minimum inhibition concentration (MIC) of tigecycline against bacterial isolates.Results Both the imported and domestic tigecycline showed potent and broad spectrum antibacterial activity. Tigecycline demonstrated powerful antibacterial activity againstEnterobacteriaceaewith MIC90of≤2 mg/L. The MIC90of tigecycline was 0.25 mg/L againstEscherichiacoli. Both tigecycline products had the same MIC90against carbapenem-sensitive and -resistantAcinetobacterbaumannii, 0.5 and 2 mg/L, respectively. The MIC90s of the two tigecycline products were 0.25 mg/L againstStaphylococcusaureus,StaphylococcusepidermidisorEnterococcus. The MIC90s of domestic and imported tigecycline againstStreptococcuspneumoniaewere 0.25 and 0.125 mg/L, respectively. Both tigecycline products had significantinvitroantibacterial activity (MIC90≤0.125 mg/L) againstHaemophilusinfluenzaeandMoraxellacatarrhalis. Tigecycline showed relatively weak activity (MIC904 mg/L) againstStenotrophomonasmaltophilia. The domestic and imported tigecycline shared almost the same susceptibility rates for all the bacterial isolates tested. The cumulative bacterial inhibition curves of the two products nearly overlapped. Conclusions Tigecycline has potent and broad antibacterial activity against clinical isolates including the common resistant isolates. Both domestic and imported tigecycline have comparableinvitroantibacterial activity.

tigecycline; antibacterial activity; minimum inhibitory concentration

浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院傳染病診治國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，感染性疾病協(xié)同創(chuàng)新中心，杭州 310003。

嵇金如(1987—)，女，初級(jí)技師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)。

肖永紅, E-mail:xiao-yonghong@163.com。

R978.14

A

1009-7708(2015)04-0330-05

2014-08-18

2015-02-04