MK在胰腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理及預(yù)后的關(guān)系

馬勤英，姚 俊

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MK在胰腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理及預(yù)后的關(guān)系

馬勤英1，姚 俊2

目的 檢測(cè)Midkine(MK)蛋白在胰腺癌中的表達(dá)情況，探討MK蛋白與胰腺癌臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。方法 收集河南科技大學(xué)第三附屬醫(yī)院病理科2007年7月至2012年6月經(jīng)外科手術(shù)切除且病理確診的胰腺癌及癌旁組織各42例及10例正常胰腺組織，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)MK蛋白的表達(dá)，并分析其臨床意義。結(jié)果 在胰腺癌、癌旁組織和正常胰腺中MK蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.2%(32/42)、11.9%(5/42)、10%(1/10)，各組間表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。MK蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=4.748，P<0.05)及TNM分期(χ2=2.231，P<0.05)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Kaplan-Meier生存分析顯示MK陽(yáng)性表達(dá)組的3 a生存率及中位生存時(shí)間均低于陰性表達(dá)組，兩組生存曲線比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (P<0.05)。結(jié)論 在胰腺癌中MK蛋白的表達(dá)增高，且與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期及患者的預(yù)后相關(guān)，而與患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織分化程度無(wú)關(guān)，提示它有可能成為胰腺癌發(fā)生的促進(jìn)因素之一。

胰腺癌；中期因子；生存分析

胰腺癌是胰外分泌部的惡性腫瘤[1]，在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中發(fā)病率相對(duì)少見(jiàn)，但惡性程度高、發(fā)展快、預(yù)后差。中期因子(midkine，MK)是一種分泌型肝素結(jié)合性生長(zhǎng)因子[2]，主要在胃癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等惡性腫瘤中高頻率、高強(qiáng)度表達(dá)，其在胰腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系尚不明確，本研究采用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistray，IHC)方法，對(duì)胰腺癌中MK蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)和分析，并討論MK與臨床病理分期及預(yù)后的關(guān)系，為胰腺癌的早期診斷、治療及判斷預(yù)后提供客觀依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 收集河南科技大學(xué)第三附屬醫(yī)院在 2007年7月至2012年6月行手術(shù)切除，經(jīng)病理科診斷明確的病例臨床資料與胰腺癌組織、距離腫瘤邊緣2 cm的癌旁組織蠟塊42例，且手術(shù)前未行放療及化療。取同時(shí)期10例正常胰腺組織作為對(duì)照。

1.2 主要試劑 兔抗人Midkine蛋白多克隆抗體購(gòu)自武漢三鷹生物工程公司(濃縮型，工作濃度1∶100)；兔抗人 MK抗體購(gòu)自武漢三鷹生物工程公司；免疫組化超敏(streptavidin-perosidase, S-P)試劑盒(產(chǎn)品編號(hào)：KIT-9706)，購(gòu)自武漢三鷹生物科學(xué)技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟 按照免疫組化超敏(S-P法)試劑盒操作步驟檢測(cè)42例胰腺癌組織、癌旁組織與10例正常胰腺組織中MK的表達(dá)情況。

1.4 生存分析 隨訪采用門診、電話及家訪等方式進(jìn)行，截止日期到2014年10月。生存時(shí)間以月為計(jì)算單位，自手術(shù)后第1日至末次隨訪日或死亡時(shí)間。所有患者均接受隨訪，隨訪時(shí)間2～46個(gè)月，中位時(shí)間23個(gè)月。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)及Fisher精確概率法檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman法。生存曲線按Kaplan-Meier分析。以P<0.05作為有顯著性差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 MK在胰腺癌組織中的表達(dá) MK以腫瘤細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)清晰棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，否則為陰性細(xì)胞。MK在胰腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織及正常胰腺組織，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義χ2=15.261，P<0.001)，而MK在癌旁組織及正常胰腺組織中陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.27，P>0.05)，詳見(jiàn)表1、圖1。

表1 MK蛋白在胰腺組織中的表達(dá) 例(%)

圖1 MK在胰腺癌組織胞漿表達(dá)，箭頭所示(SP,×200)

2.2 MK蛋白在胰腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理的關(guān)系 MK蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況(χ2=4.748，P<0.029)及TNM分期(χ2=2.231，P<0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而與患者的年齡、性別、腫塊大小、組織分化程度均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。胰腺癌組織中MK蛋白表達(dá)與腫瘤的惡性程度有關(guān)，見(jiàn)表2。

表2 MK的表達(dá)與胰腺癌臨床病理之間的關(guān)系 例(%)

臨床特點(diǎn)n陽(yáng)性數(shù)陰性數(shù)χ2P性別2.6700.102 男2622(84.62)4(15.38) 女1610(62.50)6(37.50)年齡0.3650.546 >602619(73.10)7(26.90) ≤601613(81.30)3(19.70)分化程度0.1220.941 高54(80.00)1(20.00) 中2217(77.20)5(22.80) 低1511(73.30)4(26.70)腫塊大小0.0080.930 T≤5cm3426(76.50)8(23.50) T>5cm86(75.00)2(25.00)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4.7480.029 有2522(88.00)3(12.00) 無(wú)1710(58.80)7(41.20)TNM分級(jí)4.7250.030 I+II2111(52.40)10(47.60) III+Ⅳ2119(90.48)2(9.54)

2.3 MK在胰腺癌中的表達(dá)與預(yù)后 截止2014年10月，隨訪時(shí)間2～46個(gè)月，中位時(shí)間23個(gè)月。42例胰腺癌患者中，隨訪到40人，失訪2人，隨訪率95.2%，全組共死亡27人。40例胰腺癌患者3 a總生存率為32.5%，Kaplan-Meier生存分析法顯示，胰腺癌MK陽(yáng)性與陰性組患者3 a生存率分別為25.8%、55.6%，MK陰性表達(dá)組的3 a生存率及中位生存時(shí)間均高于MK陽(yáng)性表達(dá)組，Logrank法對(duì)生存曲線進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)顯示兩組生存曲線比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033)。提示MK蛋白可能與胰腺癌的發(fā)生呈正相關(guān)，見(jiàn)圖2。

圖2 胰腺癌組織中MK表達(dá)生存曲線

3 討論

1988年Muramatsa等，采用差異雜交法利用視黃酸誘導(dǎo)小鼠胚胎腫瘤細(xì)胞系HMl細(xì)胞，從cDNA蛋白庫(kù)中篩選出的MK蛋白，它僅表達(dá)于腎臟組織中，這種蛋白被命名為Midkine(MK)。它既是一種血管生成誘導(dǎo)因子，又是一種肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子，MK蛋白含有大量的半胱氨酸和堿性氨基酸，其可以顯著地影響和調(diào)控腫瘤新生血管的形成。它與PTN(多效營(yíng)養(yǎng)因子，又稱為肝素結(jié)合相關(guān)因子)的基因組成結(jié)構(gòu)十分相似[3-5]。特別是MK蛋白在多種實(shí)體腫瘤如乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌和肺癌以及所有消化系統(tǒng)腫瘤中均呈現(xiàn)出陽(yáng)性表達(dá)或者高表達(dá)[6-9]。目前有60%左右胰腺癌患者被確診時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，25%左右的胰腺癌患者為局部晚期，且不能行根治性手術(shù)切除術(shù)，中位生存期僅為6～9個(gè)月[10-11]；可以行手術(shù)切除的僅占15%左右，其中位生存期為15個(gè)月，5 a生存率為5%左右。研究和探索胰腺癌的早期診斷方法和胰腺癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制，找到一種與胰腺癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的分子生物學(xué)標(biāo)志物，并使相關(guān)的分子生物學(xué)標(biāo)志物能夠被運(yùn)用于胰腺癌的篩查、早期診斷或使其成為治療靶標(biāo)是腫瘤研究工作人員最緊迫的任務(wù)之一。

本研究免疫組化染色顯示在胰腺組織和胰腺癌旁組織中，Midkine多呈陰性表達(dá)，少部分為弱陽(yáng)性， 而MK蛋白在胰腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為76.2%(32/42)，明顯高于癌旁組織及正常胰腺組織。這與國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道MK蛋白高表達(dá)于各種惡性腫瘤，陽(yáng)性表達(dá)率45%～90%，而在正常組織中不表達(dá)或呈現(xiàn)低表達(dá)的結(jié)果相一致[12-13]。本組生存分析顯示胰腺癌MK陽(yáng)性與陰性組患者3 a生存率分別為25.8%、55.6%，MK陰性表達(dá)組的3 a生存率及中位生存時(shí)間均高于MK陽(yáng)性表達(dá)組，MK蛋白可能與胰腺癌的發(fā)生呈正相關(guān)。結(jié)果提示MK蛋白可能是胰腺癌蛋白診斷標(biāo)記物之一，并可能是判斷胰腺癌患者預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)因子，這需要在以后進(jìn)一步去驗(yàn)證MK蛋白在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起作用。因此，MK 在腫瘤演化過(guò)程中可能具有直接的作用，檢測(cè)MK 蛋白表達(dá)水平能夠?qū)δ[瘤的早期診斷、預(yù)后、評(píng)價(jià)療效和檢測(cè)復(fù)發(fā)提供客觀依據(jù)，故MK 很有可能成為一種新的有價(jià)值的腫瘤標(biāo)記物應(yīng)用于臨床和科研。

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Expression of MK in Pancreatic Carcinoma and its Relationship Between Clinical Pathology and Prognosis

MA Qin-ying,YAO Jun

(Third Affiliated Hospital, Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

ObjectiveTo detect of Midkine (MK) protein expression in cancer tissues,to investigate the relationship between MK protein and pancreatic cancer patients with clinical pathological characteristics and prognosis.MethodsThe Pathological Department of the Third Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology from July,2007 to June,2012 collected menstrual surgical operation excision and pathological diagnosis of pancreatic cancer tissues. and paracancerous tissues of all 42 cases and 10 cases of normal pancreatic tissue. Immunohistochemistry was used to detect MK protein expression in the comparison. The relationship between the clinical and pathological features with the statistical analysis was performed with pancreatic cancer.ResultsThe positive expressions of MK protein in pancreatic cancer, paracancerous and normal pancreas in rates were 76.2% (32/42) 11.9% (5/42), 10% (1/10), and each group was statistically different (P<0.05).The expression of MK protein was statistically significant difference between lymph node metastasis(χ2=4.748,P<0.05)and TNM stage(χ2=2.231,P<0.05). Kaplan-Meier survival analysis showed the 3 year survival rate of MK positive expression group, and median survival time were lower than the negative expression group. Survival curves of two groups were statistically significant difference (P<0.05).ConclusionIn pancreatic cancer, the expression of MK protein is increased, and the prognosis is relative to lymph node metastasis, clinical pathological stage, regardless of patient age, gender, tumor size, histological differentiation. It shows that MK may be a promoting factor of pancreatic cancer.

pancreatic cancer；midkine protein；survival analysis

2015-04-03

1.河南科技大學(xué)第三附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南洛陽(yáng) 471003 2.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南洛陽(yáng) 471003

馬勤英(1980-)，女，河南洛陽(yáng)人，主治醫(yī)師，從事腫瘤內(nèi)科臨床工作。

姚俊，博士，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，E-mail：yaojun74@163.com

R735.9

A

1672-688X(2015)02-0087-03