18β-甘草次酸長期灌胃對大鼠血細(xì)胞的影響*

席克虎,張小兵,王有虎,董 明,陳小婉,桂 巖,張福宏,馬春霞,洪 浩,劉翔毅,江 英,馬 毅,楊貴軍

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,甘肅 蘭州 730000)

·實驗研究·

18β-甘草次酸長期灌胃對大鼠血細(xì)胞的影響*

席克虎,張小兵,王有虎,董 明,陳小婉,桂 巖,張福宏,馬春霞,洪 浩,劉翔毅,江 英,馬 毅,楊貴軍

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,甘肅 蘭州 730000)

目的：研究18β-甘草次酸長期灌胃對正常大鼠血細(xì)胞的影響。方法 ：將96只Wistar大鼠隨機(jī)分成正常對照組、低劑量組(25 μg/g)、中劑量組(50 μg/g )和高劑量組(100 μg/g)4組。藥物組分別給予對應(yīng)劑量的甘草次酸灌胃，正常對照組給予等體積生理鹽水，1 d 1次。于給藥14周、22周、30周及停藥4周時，檢測大鼠紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白含量(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、白細(xì)胞數(shù)計數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞比例(N%)、淋巴細(xì)胞比值(L%)、血小板計數(shù)(PLT)。結(jié)果：14周、22周及30周時甘草次酸組(低、中、高劑量)RBC、HGB、MCHC、N%、PLT較正常對照組升高，MCV、L%較正常對照組降低，但3個劑量組之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義，且上述指標(biāo)于停藥4周時接近正常對照組(差別無統(tǒng)計學(xué)意義)。同一指標(biāo)于14周、22周及30周各時間點之間對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義，但與停藥4周時相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義。14周、22周、30周及停藥4周時HCT、MCH、WBC與正常對照組對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義；同一時間點各組之間對比、同一組不同時間點之間對比，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：18β-甘草次酸長期灌胃可引起一過性的RBC、HGB、MCHC、N%、PLT的升高和MCV、L%的降低，這種影響在停藥一定時間后消除；對HCT、MCH、WBC無明顯影響。

18β-甘草次酸/藥效學(xué)；長期灌胃；動物;大鼠；動物;血細(xì)胞/分析

18β-甘草次酸是甘草的主要活性成分之一[1]，具有較好的抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗?jié)?、抗病毒、降血脂、?zhèn)咳、平喘、祛痰、抗心律失常、抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用[2-4]，因其有較好的生理活性和較低的毒副反應(yīng)而被廣泛運(yùn)用。關(guān)于甘草次酸毒副反應(yīng)的報道主要是包括長期或大量服用甘草酸制劑產(chǎn)生的腎上腺皮質(zhì)激素樣作用[5-7]，而大劑量甘草次酸長期灌胃對正常大鼠血細(xì)胞的影響未見報道。

1 材料與方法

1.1 動 物

無特定病原體(specific pathogen free，SPF)級Wistar大鼠96只，雌雄各半，4～6周齡，體質(zhì)量180～220 g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院SPF動物實驗室提供，注冊許可證號：SCXK(甘)2011-0001。

1.2 試劑與儀器

18β-甘草次酸，500 g/袋，AR級，甘肅泛植生物科技有限公司生產(chǎn)，批號12081603。SF-3000型血細(xì)胞分析儀，日本SYSMEX株式會社產(chǎn)品。

1.3 動物分組與給藥

將96只大鼠隨機(jī)分為正常對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，每組24只。將甘草次酸25，50，100 μg/g溶于2 mL生理鹽水中，分別灌胃給予低、中、高劑量組大鼠，正常對照組以等量生理鹽水替代，1d 1次。

1.4 檢測指標(biāo)

各組分別于給藥14周、22周、30周及30周后停藥4周，隨機(jī)挑選6只大鼠，用100 g/L 的水合氯醛(3μL/g)腹腔注射麻醉，開胸后心臟采血。檢測不同時間點各組大鼠的紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白含量(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、白細(xì)胞數(shù)計數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞比例(N%)、淋巴細(xì)胞比值(L%)和血小板計數(shù)(PLT)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 對紅細(xì)胞的影響

2.1.1 各組紅細(xì)胞計數(shù)對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周及30周3個藥物組RBC升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),停藥4周時差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一組在給藥14周、22周、30周這3個時間點的RBC計數(shù)對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與停藥4周時對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組紅細(xì)胞計數(shù)對比

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組7.01±0.617.07±0.497.08±0.337.10±0.55低劑量組7.88±0.66*#8.14±0.42*#8.28±0.31*#7.18±0.34中劑量組7.92±0.46*#8.32±0.52*#8.45±0.15*#7.14±0.41高劑量組7.94±0.41*#8.23±0.43*#8.51±0.58*#7.16±0.47

注：與同一時間點正常對照組對比，*P<0.05；與同組停藥4周對比，#P<0.05。

2.1.2 各組血紅蛋白含量對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周及30周3個藥物組HGB升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),停藥4周時差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一組在給藥14周、22周、30周這3個時間點的HGB對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與停藥4周時對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組血紅蛋白含量對比

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組146.67±9.26148.43±8.84149.11±9.34149.98±8.86低劑量組165.75±8.84*#164.21±7.91*#165.83±9.68*#149.42±7.02中劑量組170.75±8.34*#166.65±8.53*#164.61±8.04*#149.83±9.24高劑量組166.56±7.92*#168.83±7.41*#167.42±9.38*#150.67±6.53

注：與同一時間點正常對照組對比，*P<0.05；與同組停藥4周對比，#P<0.05。

2.1.3 各組紅細(xì)胞壓積對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周、30周及停藥4周時3個藥物組的HCT均升高，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，同一組不同時間點之間對比，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 各組紅細(xì)胞壓積對比

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組46.77±3.1946.89±3.2147.64±3.0247.07±2.84低劑量組47.79±1.2848.34±1.9049.72±1.7847.74±1.23中劑量組47.77±2.0448.22±2.0349.55±1.6447.32±1.21高劑量組47.45±1.8348.13±1.4149.84±1.5447.61±1.32

2.1.4 各組平均紅細(xì)胞體積對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周及30周3個藥物組的MCV均降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),停藥4周時差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一組在給藥14周、22周、30周這3個時間點的對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與停藥4周時對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組66.27±1.5166.94±1.1866.72±1.4567.14±1.62低劑量組58.71±1.82*#58.14±1.53*#58.67±2.33*#65.83±2.12中劑量組58.73±1.65*#58.36±2.14*#58.56±2.54*#66.06±1.33高劑量組58.81±2.24*#58.27±1.66*#58.45±2.24*#65.92±3.02

注：與同一時間點正常對照組對比，*P<0.05；與同組停藥4周對比，#P<0.05。

2.1.5 各組平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量對比

給藥14周、22周、30周及停藥4周3個藥物組的MCH與正常對照組對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),停藥4周時較之差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，同一組不同時間點之間對比，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組20.80±1.2820.68±1.1520.77±1.0920.83±1.21低劑量組20.91±0.8220.81±1.2420.77±1.1320.81±1.17中劑量組20.69±1.1520.76±1.1620.59±0.8420.14±1.12高劑量組20.83±1.0920.71±0.6820.58±1.2220.22±1.01

2.1.6 各組平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周及30周3個藥物組的MCHC均升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)； 停藥4周時差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一組在給藥14周、22周、30周這3個時間點的MCHC對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與停藥4周時對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表6。

表6 各組平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度對比

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組324.07±3.03324.54±2.13325.02±3.32325.13±4.24低劑量組340.91±0.82*#341.34±0.91*#348.82±1.23*#326.14±3.32中劑量組348.69±1.15*#349.62±1.63*#347.67±1.04*#327.87±2.11高劑量組342.83±1.09*#346.76±1.16*#342.96±1.24*#329.23±2.89

注：與同一時間點正常對照組對比，*P<0.05；與同組停藥4周對比，#P<0.05。

2.2 對白細(xì)胞的影響

2.2.1 各組中性粒細(xì)胞比例對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周及30周3個藥物組的N%均升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)； 停藥4周時差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一組在給藥14周、22周、30周這3個時間點的N%對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與停藥4周時對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表7。

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組10.81±2.3610.74±2.5311.45±3.3711.48±2.63低劑量組21.12±3.35*#21.32±2.43*#22.48±5.27*#11.97±2.49中劑量組21.27±3.65*#21.45±3.21*#22.14±2.38*#12.02±2.36高劑量組21.84±4.21*#21.23±4.16*#22.13±3.39*#11.73±3.41

注：與同一時間點正常對照組對比，*P<0.05；與同組停藥4周對比，#P<0.05。

2.2.2 各組淋巴細(xì)胞比值對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周及30周3個藥物組的L%均降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)； 停藥4周時差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組之間對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一組在給藥14周、22周、30周這3個時間點的L%對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與停藥4周時對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表8。

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組85.21±3.3685.17±3.6485.14±4.1285.11±3.17低劑量組66.35±6.55*#65.32±8.41*#64.91±8.50*#83.36±5.49中劑量組67.67±4.47*#65.45±5.33*#66.88±4.82*#84.45±4.36高劑量組67.86±5.08*#66.53±4.56*#68.37±8.03*#84.03±5.41

注：與同一時間點正常對照組對比，*P<0.05；與同組停藥4周對比，#P<0.05。

2.2.3 各組白細(xì)胞計數(shù)對比

給藥14周、22周、30周及停藥4周時3個藥物組的WBC與正常對照組對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組WBC之間對比，同一組不同時間點之間WBC對比，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表9。

表9 各組白細(xì)胞計數(shù)對比

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組4.32±1.314.28±2.174.26±2.064.19±2.23低劑量組4.59±3.354.15±1.334.32±2.154.22±2.12中劑量組3.99±3.654.54±3.214.23±2.134.05±2.09高劑量組4.35±4.214.22±2.244.32±2.294.31±2.25

2.2.4 各組血小板計數(shù)對比

與正常對照組對比，給藥14周、22周及30周3個藥物組的PLT均升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)； 停藥4周時差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一時間點各組PLT之間對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同一組在給藥14周、22周、30周這3個時間點的PLT對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與停藥4周時對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表10。

表10 各組血小板計數(shù)對比

組 別14周22周30周停藥4周正常對照組741.33±81.59752.46±62.44748.64±53.26755.73±44.39低劑量組1022.50±49.14*#1108.46±57.93*#1117.74±56.35*#784.32±58.62中劑量組1101.33±61.12*#1113.24±72.45*#1121.64±70.84*#758.62±72.35高劑量組1116.67±89.82*#1089.82±50.24*#1125.94±65.48*#760.18±64.73

注：與同一時間點正常對照組對比，*P<0.05；與同組停藥4周對比，#P<0.05。

3 討 論

18β-甘草次酸是甘草中所含三萜類化合物甘草甜素水解后脫去兩分子葡糖醛酸的產(chǎn)物，常溫下為白色針狀結(jié)晶(C30H46O4),其化學(xué)結(jié)構(gòu)類似于腎上腺皮質(zhì)激素。甘草甜素及絕對多數(shù)甘草次酸衍生物在體內(nèi)先經(jīng)胃酸水解為甘草次酸[8]，然后經(jīng)由小腸吸收入血液，因此最終發(fā)揮藥效的是甘草次酸。甘草次酸是甾體激素代謝失活酶抑制劑，可提高內(nèi)源性和外源性皮質(zhì)激素的活性[9]。

血細(xì)胞是存在于血液中的細(xì)胞，其中紅細(xì)胞主要的功能是運(yùn)送氧，白細(xì)胞主要扮演免疫的角色，血小板在止血過程中起著重要作用。在正常生理情況下，血細(xì)胞有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并有相對穩(wěn)定的數(shù)量。蔣鋒等[10]觀察到加味炙甘草湯灌胃對放療小鼠的造血干細(xì)胞有明顯的刺激增生作用，任翠愛等[11]研究發(fā)現(xiàn)甘草酸口服可使再生障礙性貧血小鼠的HGB明顯升高，江南等[12]發(fā)現(xiàn)甘草酸二胺能抑制環(huán)磷酰胺引起的大鼠白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板的降低，Chanho Oh等[13]報道甘草酸通過促進(jìn)成熟淋巴細(xì)胞凋亡而有助于免疫誘導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠骨髓造血功能的恢復(fù)，王珺等[14]觀察到煎服甘草可使妊娠合并免疫性血小板減少的患者血小板數(shù)量升高。

本實驗研究發(fā)現(xiàn)：長期灌胃18β-甘草次酸對正常Wistar大鼠血細(xì)胞的影響與之前報道的甘草及其衍生物對疾病或疾病模型的小鼠、大鼠、人的血細(xì)胞的影響基本一致。14周、22周及30周時甘草次酸組(低、中、高劑量)RBC、HGB、MCHC、N%、PLT較正常對照組升高，MCV、L%較其降低；同時我們還觀察到這種影響于停藥4周后消失。14周、22周、30周及停藥4周時HCT、MCH、WBC與正常對照組對比，差別無統(tǒng)計學(xué)意義。同一時間點低、中、高劑量組各組之間對比差別無統(tǒng)計學(xué)意義。由此我們認(rèn)為：18β-甘草次酸長期灌胃對Wistar大鼠血細(xì)胞的影響呈現(xiàn)出類皮質(zhì)激素樣作用，可引起一過性的RBC、HGB、MCHC、PLT升高和MCV、L%降低，這種影響在停藥后消除；對HCT、MCH、WBC無明顯影響。此為進(jìn)一步探討18-β甘草次酸的藥理、毒副作用、安全使用劑量及用藥周期提供了支持。

[1]Kim DH，Lee SW，Han MJ.Biotransformation of glycyrrhizin to 18 beta-glycyrrhetinic acid-3-O-beta-D-glucuronide by Streptococcus LJ-22,a human intestinal bacterium[J].Biol Pharm Bull，1999,22(3):320-322.

[2]Imanishi N，Kawi H，Hayashi Y，et al .Effects of glycyrrhizin and glycyrrhetinic acid on dexamethasone-induced changes in histamine synthesis of mouse mastocytoma P-815 cells and in histamine release from rat peritoneal mast cells[J].Biochemical Pharmacology，1989，38(15):2521-2526.

[3]Chan HT,Chan C,Ho JW.Inhibition of glycyrrhizic acid on aflatoxin B1-induced cytotoxicity in hepatoma cells[J].Toxicology，2003，188(2/3):211-217.

[4]Matsui S，Matsumoto H，Sonoda Y，et al.Glycyrrhizin and related compounds down-regulate production of inflammatory chemokines IL-8 and eotaxin 1 in a human lung fibroblast cell line[J].International Immunopharmacology，2004,4(13):1633-1644.

[5]Van Rossum TG,De Jong FH,Hop WC,et al.'Pseudo-aldosteronism' induced by intravenous glycyrrhizin treatment of chronic hepatitis C patients[J].Journal of Gastroenterology and Hepatology,2001,16(7):789-795.

[6]Sontia B,Mooney J,Gaudet L,et al.Pseudohyperaldosteronism,liquorice,and hypertension[J].J Clin Hypertens (Greenwich),2008,10(2):153-157.

[7]Takeda R,Morimoto S,Uchida K，et al.Prolonged pseudoaldosteronism induced by glycyrrhizin[J].Endocrinol Jpn,1979,26(5):541-547.

[8]金建軍，夏德全.甘草甜素藥代動力學(xué)的研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)：中醫(yī)中藥分冊，1994，16(1)：13-15.

[9]張明發(fā)，沈雅琴.甘草酸及其苷元甘草次酸的糖皮質(zhì)激素樣作用[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2011,26(1):33-35.

[10]蔣鋒，袁金聲，孫亞明.加味炙甘草湯對放療小鼠造血功能影響的實驗研究[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，28(27)：2577-2579.

[11]任翠愛，張芬蓮，趙秀蘭，等.甘草酸對免疫誘導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠骨髓造血功能的影響[J].山東大學(xué)學(xué)報，2006，44(1)：10-14.

[12]江南，劉翠霞，但漢雄，等.甘草酸二銨對大鼠環(huán)磷酰胺損傷的保護(hù)作用[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2004，9(3):326-328.

[13]Chanho Oh,Youngahn Kim,Jaesoon Eun,et al.Induction of T lymphocyte apoptosis by treatment with glycyrrhizin[J].Am J Chin Med，1999，27(2):217-226.

[14]王珺，宋文秀，翟文，等.中藥甘草治療妊娠合并免疫性血小板減少患者的療效觀察[J].天津醫(yī)藥，2008，36(9):730-731.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)09-0066-05

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.09.33

席克虎(1961-),男(漢族)，甘肅蘭州人，副主任醫(yī)師，研究方向為鼻黏膜生理。

張小兵，主任醫(yī)師，博士， 790736924@qq.com

國家自然科學(xué)基金項目(81160449)；甘肅省衛(wèi)生廳行業(yè)科技計劃項目(GSWST2011-06)；甘肅省中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究課題(GZK-2011-22)

2015-03-26；

2015-07-03