Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2在胰腺疾病中的表達(dá)及其意義

朱中飛 馬洪運 歐陽柳 紀(jì)偉平 宋彬

Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2在胰腺疾病中的表達(dá)及其意義

朱中飛 馬洪運 歐陽柳 紀(jì)偉平 宋彬

Bcl-2是重要的凋亡抑制基因，表達(dá)于正常的外分泌導(dǎo)管上皮、癌前病變和某些上皮來源的腫瘤[1]。Bcl-2高表達(dá)與腫瘤分化程度、轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與年齡、性別、TNM分期無關(guān)。Cyclin D1和Ki-67均與細(xì)胞增殖活性有關(guān)，它們的表達(dá)與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)。Muc-2蛋白是一種腸道相關(guān)抗原，表達(dá)于結(jié)腸、直腸黏膜上皮，正常胰腺組織不表達(dá)，但在胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液性腫瘤(intraductal papillary mucinous neoplasm, IPMN)高表達(dá)。本研究檢測Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2在IPMN、胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)和慢性胰腺炎(CP)中的表達(dá)，探討它們對上述3類疾病的鑒別診斷及區(qū)分不同病理類型IPMN的價值。

一、材料和方法

1．病例資料：選取2010年1月至2013年12月間上海長海醫(yī)院胰腺外科住院手術(shù)標(biāo)本的存檔石蠟塊，共63例。其中PDAC 20例，IPMN 30例，CP 13例。30例IPMN中腺瘤(intraductal papillary mucinous adenoma, IPMA)13例，歸為良性組，腺癌(intraductal papillary mucinous cancer,IPMC)和交界性腺瘤(intraductal papillary mucinous borderline,IPMB)17例，歸為惡性組。所有病例的臨床資料完整。

2．方法：運用Envision兩步法對所有組織切片進(jìn)行免疫組化染色，分別檢測Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2蛋白表達(dá)。Envision試劑盒購自DaKo公司；鼠抗人Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2單克隆抗體均購自上海起亞生物科技有限公司。按照試劑盒說明書操作。用PBS替代一抗作空白對照。每張切片均由兩位病理醫(yī)師盲法讀片，Cyclin D1、Ki-67陽性表達(dá)為胞核呈棕黃色或褐色。Muc-2陽性表達(dá)為胞質(zhì)呈棕黃色或褐色。參考Hartmann等[2]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理評分，即在400倍鏡下任取5個視野計算陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率，<5%為-，5%～25%為+，26%～50%為++，>50%為+++。+、++、+++均歸為陽性組。

3．統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以百分率表示，采用Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

二、結(jié)果

1．Bcl-2表達(dá)：Bcl-2蛋白表達(dá)于胞質(zhì)或核膜(圖1)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達(dá)率分別為55%(11/20)、87%(26/30)、15%(2/13)，兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。良性IPMN及惡性IPMN的Bcl-2陽性表達(dá)率分別為77%(10/13)、94%(16/17)，良惡性IPMN間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.290)。

2．Cyclin D1表達(dá)：Cyclin D1蛋白表達(dá)于胞核(圖2)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達(dá)率分別為80%(16/20)、50%(15/30)、8%(1/13)，兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。良性IPMN及惡性IPMN的Cyclin D1陽性表達(dá)率分別為23%(3/13)、71%(12/17)，惡性IPMN的表達(dá)率顯著高于良性IPMN，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.025)。

3．Ki-67表達(dá)：Ki-67蛋白表達(dá)于胞核(圖3)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達(dá)率分別為85%(17/20)、50%(15/30)、8%(1/13)，兩兩比較的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。良性IPMN及惡性IPMN的Ki-67陽性表達(dá)率分別為23%(3/13)、71%(12/17)，惡性IPMN的表達(dá)率顯著高于良性IPMN，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.025)。

4．Muc-2表達(dá)：Muc-2蛋白表達(dá)于胞質(zhì)(圖4)。PDAC、IPMN、CP組織的陽性表達(dá)率分別為10%(2/20)、87%(26/30)、15%(2/13)，IPMN與PDAC及CP的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.01)。良性IPMN及惡性IPMN的Muc-2陽性表達(dá)率分別為85%(11/13)、88%(15/17)，良惡性IPMN間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.000)。

討論 雖然人們對IPMN的認(rèn)識在不斷深入，但由于IPMN的病理改變呈多樣性，可表現(xiàn)為增生、腺瘤、不典型增生、原位癌、浸潤及晚期癌等，因此IPMN的診斷需要依靠綜合分析和判斷，尤其是對少數(shù)病例，僅僅依靠臨床表現(xiàn)、影像學(xué)特征和病理還很難以與其他胰腺腫瘤鑒別。

圖1 IPMN(1A)、PDAC(1B)、CP(1C)組織的Bcl-2表達(dá)(免疫組化 ×200) 圖2 IPMN(2A)、PDAC(2B)、CP(2C)組織的Cyclin D1表達(dá)(免疫組化 ×200)

圖3 IPMN(3A)、PDAC(3B)、CP(3C)組織的Ki-67表達(dá)(免疫組化 ×200) 圖4 IPMN(4A)、PDAC(4B)、CP(4C)組織的Muc-2表達(dá)(免疫組化 ×200)

本研究結(jié)果表明，Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67和Muc-2在IPMN、PDAC和CP間確實存在明顯差異，因此這4項免疫組化指標(biāo)可能在IPMN診斷和鑒別診斷中有重要價值。

最新研究表明，Bcl-2家族在急性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病及實性腫瘤中過表達(dá)，通過多種通道抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤的形成和發(fā)展[3]。Geng等[4]采用siRNA技術(shù)沉默Bcl-2基因表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡并增加細(xì)胞對化療的敏感性。但也有研究認(rèn)為Bcl-2高表達(dá)不是某一腫瘤的特征，而是反映腫瘤細(xì)胞的一種增生狀態(tài)[5-6]。本研究結(jié)果顯示，Bcl-2在IPMN中陽性表達(dá)率最高，其次為PDAC，CP中表達(dá)率最低，提示Bcl-2的高表達(dá)可能是IPMA惡變的因素。

Guo等[7]檢測92例壺腹部腺癌的Cyclin D1表達(dá)，陽性率為71.7%，陽性表達(dá)的術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)及患者生存時間顯著低于低表達(dá)或不表達(dá)Cyclin D1的患者(P<0.05)，是判斷壺腹部腺癌預(yù)后的獨立因素。Zhao等[8]檢測2 041例食管鱗癌的Cyclin D1表達(dá)，結(jié)果顯示低分化、早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AJCC分期較晚的患者中Cyclin D1高表達(dá)。

McCall等[9]的研究結(jié)果顯示，作為增殖指數(shù)的Ki-67高表達(dá)與惡性腫瘤的分期相關(guān)。Carlinfante等[10]檢測53例胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤Ki-67的表達(dá)，顯示其表達(dá)水平在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的分級中有鑒別價值，特別是對G1、G2和低分化神經(jīng)內(nèi)分泌癌的鑒別。本研究結(jié)果顯示，Cyclin D1、Ki-67在CP、IPMN、PDAC組織中的表達(dá)陽性率依次升高且惡性IPMN的陽性表達(dá)率顯著高于良性IPMN的表達(dá)率，這可能是潛在的鑒別IPMN良惡性的指標(biāo)。

Masuda等[11]研究發(fā)現(xiàn)，混合型IPMN中高級別上皮內(nèi)瘤變和侵襲性癌的Muc-2的陽性表達(dá)率顯著高于低級別上皮內(nèi)瘤變，是預(yù)測IPMN惡變的獨立因素。Ideno等[12]報道，PDAC及侵襲性IPMN組織Muc-1高表達(dá)，提示Muc-2高表達(dá)腫瘤更具侵襲性。Castellano-Megías等[13]認(rèn)為，腸型IPMN中Muc-2表達(dá)陽性，Muc-1表達(dá)陰性，傾向于向膠質(zhì)瘤發(fā)展，而胰膽管型IPMN則可能發(fā)展為導(dǎo)管腺癌。本研究結(jié)果顯示，IPMN 的Muc-2陽性表達(dá)率顯著高于PDCA及CP，這是因為IPMN與PDCA、CP有不同的臨床病理特征，但良惡性IPMN的陽性表達(dá)率無顯著差異，說明Muc-2高表達(dá)僅可以作為區(qū)分PDAC和IPMN的重要指標(biāo)。

[1] Monaco G, Decrock E, Akl H, et al. Selective regulation of IP3-receptor-mediated Ca2+ signaling and apoptosis by the BH4 domain of Bcl-2 versus Bcl-XI[J]. Cell Death Differ, 2012, 19(2): 295-309.

[2] Hartmann K, Artuc M, Baldus SE, et al. Expression of Bcl-2 and Bcl-xl in cutaneous and bone marrow lesions of mastocytosis[J]. Am J Pathol, 2003, 163(3):819-826.

[3] Rooswinkel RW, van de Kooij B, deVries E, et al. Antiapoptotic potency of Bcl-2 proteins primarily relies on their stability, not binding selectivity[J]. Blood, 2014, 123(18): 2806-2815.

[4] Geng ZM, Zhang M, Pan XT, et al. Bcl-2 gene silencing by RNA interference inhibits the growth of the human gallbladder carcinoma cell line GBC-SD in vitro and in vivo[J]. Oncol Rep, 2013, 30(2): 793-800.

[5] Xie CY, Yang W, Ying J, et al. B-cell lymphoma-2 over-expression protects delta-elemene-induced apoptosis in human lung carcinoma mucoepidermoid cells via a nuclear factor kappa B-related pathway[J]. Biol Pharm Bull, 2011, 34(8): 1278-1286.

[6] Chen GG, Liang NC, Lee JF, et al. Over-expression of Bcl-2 against Pterissemipinnata L-induced apoptosis of human colon cancer cells via a NF-kappa B-related pathway[J]. Apoptosis, 2004, 9(5): 619-627.

[7] Guo R, Overman M, Chatterjee D, et al. Aberrant expression of p53, p21, cyclin D1, and Bcl2 and their clinicopathological correlation in ampullary adenocarcinoma[J]. Hum Pathol, 2014, 45(5): 1015-1023.

[8] Zhao J, Li L, Wei S, et al. Clinicopathological and prognostic role of cyclin D1 in esophageal squamous cell carcinoma: a meta-analysis[J]. Dis Esophagus, 2012, 25(6): 520-526.

[9] McCall CM, Shi C, Cornish TC, et al. Grading of well-differentiated pancreatic neuroendocrine tumors is improved by the inclusion of both Ki67 proliferative index and mitotic rate[J]. Am J Surg Pathol, 2013, 37(11):1671-1677.

[10] Carlinfante G, Baccarini PB, Erretti D, et al. Ki-67 cytological index can distinguish well-differentiated from poorly differentiated pancreatic neuroendocrine tumors:a comparative cytohistological study of 53 cases[J]. Virchows Arch, 2014, 465(1): 49-55.

[11] Masuda A, Arisaka Y, Hara S, et al. MUC2 expression and prevalence of high-grade dysplasia and invasive carcinoma in mixed-type intraductal papillary mucinous neoplasm of the pancreas[J]. Pancreatology, 2013, 13(6): 583-588.

[12] Ideno N, Ohtsuka T, Kono H, et al. Intraductal papillary mucinous neoplasms of the pancreas with distinct pancreatic ductal adenocarcinomas are frequently of gastric subtype[J]. Ann Surg, 2013, 258(1):141-151.

[13] Castellano-Megías VM, Andrés CI, López-Alonso G, et al. Pathological features and diagnosis of intraductal papillary mucinous neoplasm of the pancreas[J]. World J Gastrointest Oncol, 2014, 6(9):311-324.

(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.04.016

上海市自然科學(xué)基金(12ZR1453900)

200433 上海，第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院胰腺外科

宋彬，Email: smmusb@126.com

2015-01-04)