高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧含量

錢永健，陳永壯

(廣州市婦女兒童醫(yī)療中心，廣東 廣州 510623)

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高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧含量

錢永健，陳永壯

(廣州市婦女兒童醫(yī)療中心，廣東 廣州 510623)

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧的含量。方法：采用DiamonsilTMC18柱(4.6mm×200mm,5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(pH=3.00), 流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長為251nm。結(jié)果：在40.2～281μg/mL范圍內(nèi)，炎琥寧峰面積與測(cè)定濃度線性范圍為0.520～0.157mg·mL-1，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)，平均回收率為99.9%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.49%。結(jié)論：采用高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧含量方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便快速，重現(xiàn)性好，值得在測(cè)定注射用炎琥寧制劑中推廣應(yīng)用。

注射用炎琥寧；高效液相色譜法；含量

炎琥寧主要用于治療病毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染，由穿心蓮提取物經(jīng)脫水、醋化、成鹽精制而成，可特異性興奮垂體-腎上腺皮質(zhì)功能和抑制早期毛細(xì)血管通透性增高，具有體外滅活腺病毒、呼吸道病毒及流感病毒等作用[1]。臨床通常采用紫外分光光度法測(cè)量炎琥寧含量，精密度低，重現(xiàn)性差，處理較為繁瑣。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧的含量，該方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便快速，重現(xiàn)性好，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

高效液相色譜儀器(美國安捷倫)；磷酸二氫鉀(分析純，山東省化工研究院)；甲醇(色譜純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司)[2]；脫水穿心蓮內(nèi)脂琥珀酸半脂對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111598-200301)；注射用炎琥寧(湖北德益醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：H20044463)。

1.2 色譜條件

DiamonsilTMC18柱(4.6mm×200mm,5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(pH=3.00), 流速為1.0mL/min,檢測(cè)波長為251nm，柱溫：室溫。在上述條件下，注射用炎琥寧與其他組分能達(dá)到基線分離。見圖1。

圖1 注射用炎琥寧高效液相色譜

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系

選取10.03mg脫水穿心蓮內(nèi)脂琥珀酸半脂對(duì)照品，精密稱取放置25mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。取濃度分別為0.6、0.9、1.2、1.5、1.8mg·mL-1溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄峰面積變化。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、濃度(C，mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：A=8.278×103C-9.295，r=0.999 1。試驗(yàn)結(jié)果表明：在40.2～281μg/mL范圍內(nèi)，炎琥寧峰面積與測(cè)定濃度線性范圍為0.52～0.157mg·mL-1，線性關(guān)系良好(r=0.999 9)。

2.2 溶液穩(wěn)定性

取相當(dāng)于炎琥寧20mg的本品適量，精密稱取后放置10mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，搖勻；按“1.2”項(xiàng)色譜條件分別于0、2、4、6、8h進(jìn)樣20μL，所測(cè)峰面積的平均RSD為1.36%，試驗(yàn)結(jié)果表明，在8h內(nèi)供試品溶液中炎琥寧穩(wěn)定。

2.3 干擾試驗(yàn)

按處方規(guī)定對(duì)空白輔料溶液進(jìn)行配制，選取15mg甘露醇精密稱量，放置25mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，搖勻。精密量取1mL，放置25mL容量瓶，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，搖勻。在液相色譜儀中注入20μL，并記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果表明：樣品不受空白輔料溶液影響。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取相同批次樣品，根據(jù)處方規(guī)定配制6份供試品溶液，按“1.2”項(xiàng)色譜條件測(cè)定計(jì)算含量，RSD為0.49%。見表1。

表1 樣品重復(fù)性測(cè)定結(jié)果 (%)

2.5 回收率試驗(yàn)

選取適量脫水穿心蓮內(nèi)脂琥珀酸半脂對(duì)照品和98.44%本品，精密稱取置于10mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，搖勻，選取5mL放置100mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，測(cè)定得平均回收率為99.9%。見表2。

表2 炎琥寧回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，又稱高分離度液相色譜、高壓液相色譜，以液體為流動(dòng)相，是色譜法的一個(gè)重要分支。該方法主要采用高壓輸液系統(tǒng)將不同極性的單一溶劑或緩沖液等流動(dòng)相泵裝入固定相色譜柱，各成分在柱內(nèi)被分離后進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)，分析試樣[3-4]。高效液相色譜法主要特點(diǎn)為：①高速：載液速度快，分析速度快，快于傳統(tǒng)色譜法速度，1個(gè)樣品可在15～30min內(nèi)完成測(cè)量，有些樣品僅需5min即可完成；②高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)受到較大阻力，故對(duì)載液加高壓才能迅速通過色譜柱；③高靈敏度：進(jìn)樣量為10-9數(shù)量級(jí)，紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng；④應(yīng)用范圍廣：高效液相色譜可分析70%以上的有機(jī)化合物，尤其對(duì)大分子、高沸點(diǎn)及熱穩(wěn)定性化合物優(yōu)勢(shì)最為明顯。

近年來，高效液相色譜法已成為藥物研制開發(fā)、藥品檢驗(yàn)部門及醫(yī)院臨床檢驗(yàn)等各個(gè)領(lǐng)域藥物質(zhì)量控制中的重要技術(shù)和方法。采用該方法測(cè)定藥物含量可消除藥物制劑中附加劑、共存藥物或雜質(zhì)對(duì)測(cè)定的干擾，因此高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于藥物成分含量的測(cè)定[5]。注射用炎琥寧化學(xué)名稱為19-二琥珀酸半酯鉀鈉鹽一水物,14-脫羥-11,12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為C28H34KNaO10·H2O，輔料為甘露醇和碳酸氫鈉，主要用于治療病毒性肺炎和病毒性上呼吸道感染疾病。本文采用高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧，炎琥寧保留時(shí)間約為6.65min，有較好的主峰對(duì)稱，具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，適用于炎琥寧及其制劑的生產(chǎn)及臨床質(zhì)量控制。

綜上所述，采用高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧含量方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便快速，重現(xiàn)性好，值得在測(cè)定注射用炎琥寧制劑中推廣應(yīng)用。

[1] 韋曦,歐陽小琳,許盈,等.炎琥寧的含量測(cè)定及其與常用輸液和藥物的配伍變化[J].兒科藥學(xué)雜志,2012,18(8):28-31.

[2] 史明,鄭芳,李鵬,等.注射用頭孢尼西鈉與注射用炎琥寧配伍穩(wěn)定性考察[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2011,30(2):254-256.

[3] 趙敏.反相高效液相色譜法測(cè)定注射用炎琥寧與注射用更昔洛韋的配伍使用[J].中外健康文摘,2012,09(22):135-136.

[4] 林恒寬,林恒道.氯霉素注射液與注射用炎琥寧的配伍穩(wěn)定性[J].臨床醫(yī)學(xué),2013,33(3):102-104.

[5] 楊勝利.注射用炎琥寧與注射用頭孢拉定的配伍穩(wěn)定性分析[J].中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志,2014(5):48-48.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-10-30

錢永健(1980-)，男，廣州市婦女兒童醫(yī)療中心主管藥師，研究方向?yàn)榕R床藥理。

R284.2

A

1673-2197(2015)04-0043-02

10.11954/ytctyy.201504019