子宮內(nèi)膜樣腺癌組織FHIT與Survivin蛋白表達(dá)及意義

張娜，項(xiàng)鋒鋼

（1 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，山東 青島 266021； 2 中國人民解放軍第148醫(yī)院婦產(chǎn)科； 3 青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科）

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的三大惡性腫瘤之一，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%，其中以起源于子宮內(nèi)膜腺體的腺癌（子宮內(nèi)膜樣腺癌）最常見。近年來子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈上升趨勢，其發(fā)病機(jī)制目前仍不十分明了。研究原癌基因的激活、抑癌基因的失活是目前腫瘤研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化SP法檢測子宮內(nèi)膜樣腺癌及非典型性增生子宮內(nèi)膜、單純性增生子宮內(nèi)膜、正常子宮內(nèi)膜組織中FHIT蛋白、Survivin蛋白的表達(dá)情況，探討它們與子宮內(nèi)膜樣腺癌的臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料及其來源

2008年1月—2011年10月，中國人民解放軍第148醫(yī)院手術(shù)后經(jīng)病理確診的子宮內(nèi)膜樣腺癌組織60例、不典型性增生子宮內(nèi)膜20例、單純性增生子宮內(nèi)膜20例，以及因?qū)m頸病變及子宮脫垂等行子宮切除的正常子宮內(nèi)膜20例。所選病例臨床資料均完整，病人術(shù)前均未接受化學(xué)藥物、放射治療或相關(guān)激素治療。子宮內(nèi)膜樣腺癌病人60例，年齡29～71歲，平均55.8歲。病理分化程度：G1級(jí)20例，G2級(jí)21例，G3級(jí)19例。所有病例均行手術(shù)治療，其手術(shù)病理分期為Ⅰ期21例，Ⅱ期19例，Ⅲ期20例。其中淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者19例。

1.2 試劑與方法

免疫組化染色采用SP法。兔抗人FHIT多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，抗體工作濃度為1∶150。鼠抗人Survivin單克隆抗體（SD79）購自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司，抗體工作濃度為1∶40，超敏SP廣譜免疫組化試劑盒、DAB酶底物顯色劑等均購自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本經(jīng)40g／L中性甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度為4μm。按SP試劑盒說明書要求進(jìn)行操作，在22℃室溫下孵育1h，采用pH值9.0的EDTA修復(fù)液進(jìn)行高溫高壓修復(fù)后，采用SP法進(jìn)行免疫組化染色。以已知陽性標(biāo)本作為陽性對(duì)照，以正常羊血清代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷方法和標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)胞漿或核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒即為FHIT蛋白、Survivin蛋白的陽性表達(dá)［1］。參照有關(guān)文獻(xiàn)采用半定量積分法判定結(jié)果。按照染色強(qiáng)度評(píng)分：0分（無色），1分（淺黃色），2分（棕黃色），3分（棕褐色）；按照陽性細(xì)胞數(shù)占百分比計(jì)分：以陽性細(xì)胞＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；以兩者積分的乘積表達(dá)陽性等級(jí)：0～4分為陰性（－），5～8分為弱陽性（＋），9～12分為強(qiáng)陽性（）［1－2］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以秩和檢驗(yàn)對(duì)有序資料進(jìn)行分析，相關(guān)指標(biāo)應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同子宮內(nèi)膜組織FHIT蛋白與Survivin蛋白表達(dá)

FHIT蛋白的陽性表達(dá)率在子宮內(nèi)膜樣腺癌、不典型性增生子宮內(nèi)膜、單純性增生子宮內(nèi)膜、正常子宮內(nèi)膜組織中分別為 51.7%、85.0%、90.0% 和100.0%，與上述其他3種類型子宮內(nèi)膜組織相比，癌組織中的FHIT蛋白陽性表達(dá)率明顯降低，差異具有顯著性（Hc＝19.048，P＜0.001）。子宮內(nèi)膜樣腺癌、不典型性增生子宮內(nèi)膜、單純性增生子宮內(nèi)膜、正常子宮內(nèi)膜組織Survivin蛋白的陽性表達(dá)率分別為73.3%、70.0%、35.0%、15.0%，與上述其他3種類型子宮內(nèi)膜組織相比，癌組織中的Survivin蛋白陽性表達(dá)率明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Hc＝28.241，P＜0.001）。見表1。

2.2 FHIT蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌病理參數(shù)的關(guān)系

本文研究結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT蛋白陽性表達(dá)率隨著腫瘤分化程度的降低、臨床病理分期的進(jìn)展、肌層侵犯深度的增加以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而明顯降低（Hc＝18.435～24.443，P＜0.01），F(xiàn)HIT蛋白陽性表達(dá)率與病人的年齡、是否絕經(jīng)及大體類型均無相關(guān)性（Hc＝0.494～1.878，P＞0.05）。見表2。

表1 不同類型子宮內(nèi)膜組織中FHIT與Survivin蛋白的表達(dá)（例）

表2 FHIT蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌病理參數(shù)關(guān)系（例）

2.3 Survivin蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌病理參數(shù)關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中Survivin蛋白的陽性表達(dá)率隨著腫瘤分化程度的降低、臨床病理分期的增加、肌層浸潤深度的加深以及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而明顯增高（Hc＝11.114～41.560，P＜0.01），Survivin蛋白的陽性表達(dá)率與病人的年齡、是否絕經(jīng)及大體類型均無相關(guān)性（Hc＝0.264～0.438，P＞0.05）。見表3。

2.4 子宮內(nèi)膜樣腺癌組織FHIT蛋白與Survivin蛋白表達(dá)相關(guān)性

子宮內(nèi)膜樣腺癌60例中，F(xiàn)HIT蛋白陽性表達(dá)31例，其中Survivin蛋白陽性表達(dá)18例，陰性表達(dá)13例；FHIT蛋白陰性表達(dá)29例，其中Survivin蛋白陰性表達(dá)3例，陽性表達(dá)26例；二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.336，P＜0.01）。

表3 Survivin蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌病理參數(shù)關(guān)系

3 討 論

3.1 FHIT蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織表達(dá)及其臨床意義

FHIT是近期新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，它與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在著密切的關(guān)系［3］。因其表現(xiàn)出許多腫瘤抑制基因的特點(diǎn)，故被歸為侯選抑癌基因［4］。ZANDI等［5］研究表明，F(xiàn)HIT 在子宮內(nèi)膜癌組織中存在表達(dá)降低或缺失現(xiàn)象，與其發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，F(xiàn)HIT蛋白的陽性表達(dá)率隨著由正常子宮內(nèi)膜至不典型性增生子宮內(nèi)膜，再到子宮內(nèi)膜腺癌的演變過程呈逐漸下降趨勢。但也有學(xué)者得出與其不一致的結(jié)論，認(rèn)為FHIT基因的異常與子宮內(nèi)膜癌的組織學(xué)分級(jí)關(guān)系不大［6］。由此可見，F(xiàn)HIT蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)病理參數(shù)之間尚未有確切關(guān)系，還有待進(jìn)一步研究。

本文研究結(jié)果表明，與正常子宮內(nèi)膜、單純性增生子宮內(nèi)膜及不典型性增生子宮內(nèi)膜相比較，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中FHIT蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，從而提示FHIT蛋白基因表達(dá)下調(diào)或缺失可能參與了子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生過程。另外本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中FHIT蛋白的陽性表達(dá)率隨著腫瘤分化程度的降低、臨床病理分期的增加、肌層浸潤深度的加深以及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而明顯降低，提示FHIT蛋白表達(dá)下調(diào)或缺失與子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

3.2 Survivin蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織表達(dá)及其臨床意義

Survivin基因是AMBROSINI等于1997年在人類基因組的雜交篩選中分離并克隆出的，是目前發(fā)現(xiàn)的作用最強(qiáng)的凋亡抑制因子［7－8］。Survivin基因編碼的蛋白（Survivin蛋白）是目前發(fā)現(xiàn)的相對(duì)分子質(zhì)量最小也是抗細(xì)胞凋亡作用最強(qiáng)的凋亡抑制蛋白（IAP），它與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后均密切相關(guān)，是近年來研究的熱點(diǎn)［9］。

本研究結(jié)果顯示，Survivin蛋白在正常子宮內(nèi)膜、單純性增生子宮內(nèi)膜組織中均低表達(dá)，而在不典型性增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中則存在高表達(dá)現(xiàn)象，提示Survivin在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生中發(fā)揮一定作用，這與其他研究所得出的結(jié)論相一致［10］。Survivin蛋白在子宮內(nèi)膜不典型性增生中的陽性表達(dá)率較高（70.0%），提示Survivin可能在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生過程中是一個(gè)早期事件。因此，可能對(duì)子宮內(nèi)膜樣腺癌的早期診斷有一定的指導(dǎo)意義。另外，本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中Survivin蛋白陽性表達(dá)率隨著腫瘤分化程度的降低、臨床病理分期的增加、肌層浸潤深度的加深以及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而增高，提示Survivin蛋白表達(dá)增加與子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

3.3 子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中聯(lián)合檢測FHIT蛋白和Survivin蛋白的意義

本文的研究結(jié)果顯示，分化越差、分期越晚、肌層浸潤越深并伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中既會(huì)出現(xiàn)Survivin蛋白過表達(dá)，又存在FHIT蛋白表達(dá)降低，其二者表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。由此可知，癌基因的激活和抑癌基因的失活同時(shí)在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮作用。因此，聯(lián)合檢測癌基因（如Survivin蛋白）的激活和抑癌基因（如FHIT蛋白）的失活，可能對(duì)子宮內(nèi)膜癌的早期診斷有一定的價(jià)值，并可能對(duì)正確評(píng)估病情及制定最佳治療方案具有積極的意義。

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