摘要:采用菌絲生長速率法測定了8種藥劑及其混配劑對油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的室內(nèi)毒力,旨在篩選有效防治核盤菌的藥劑及其混配劑,為油菜菌核病的防治提供重要參考。結果表明,咪鮮胺錳鹽對核盤菌的毒力最高,其EC50值為0.067 6 μg/mL;丙環(huán)唑次之,EC50值為0.098 9 μg/mL;菌核凈、腐霉利、甲基硫菌靈、多菌靈、異菌脲EC50值在0.1~0.5 μg/mL之間;百菌清的EC50值為0.706 1 μg/mL。咪鮮胺錳鹽和百菌清以配比2∶1時增效系數(shù)為2.179 5,咪鮮胺錳鹽與甲基硫菌靈以配比1∶3時增效系數(shù)為2.952 7,咪鮮胺錳鹽與菌核凈以配比1∶1時增效系數(shù)為1.537 2。在防治油菜菌核病時,建議輪換使用咪鮮胺錳鹽、丙環(huán)唑單劑及上述篩選出的混配劑。
關鍵詞:油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum);殺菌劑;毒力;混配劑
中圖分類號:S482.2 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2015)07-1606-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.07.019
油菜(Brassica nanups L.)是我國的重要油料作物之一,種植面積和總產(chǎn)量均位居世界首位[1]。由核盤菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]侵染引起的油菜菌核病在油菜種植地區(qū)均有發(fā)生,在我國以長江流域和東南沿海地區(qū)最為普遍和嚴重,一般發(fā)病率為10%~20%,嚴重的達80%以上[2-4]。由于油菜種質(zhì)資源中缺少高抗菌核病的品種,目前生產(chǎn)上對于該病害的防治主要采用化學防治為主,輔以農(nóng)業(yè)防治和生物防治[5]。國內(nèi)雖然報道了不少防治油菜菌核病的化學藥劑,如苯并咪唑類的多菌靈、亞胺類的菌核凈、取代苯類的百菌清等,但長期使用單一的化學藥劑,導致大量的抗性菌株產(chǎn)生,化學藥劑的防治效果明顯降低[6,7]。基于此,本研究根據(jù)藥劑的不同作用機理,選取了8種藥劑進行室內(nèi)毒力測定,并測定了不同混配劑的毒力,以期篩選出對核盤菌具有較強抑制作用的單劑及混配劑,為油菜菌核病的防治提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 供試菌株 油菜菌核病菌(S. sclerotiorum),由長江大學農(nóng)學院植物病理研究室分離保存,于PDA平板[8]上培養(yǎng)2 d后使用。
1.1.2 供試藥劑 75%百菌清可濕性粉劑(WP)(廣東中迅農(nóng)科股份有限公司),40%菌核凈可濕性粉劑(WP)(山東科大創(chuàng)業(yè)生物有限公司),70%甲基硫菌靈可濕性粉劑(WP)(四川省藥化工有限公司),50%腐霉利可濕性粉劑(WP)(上海知農(nóng)化工有限公司),50%異菌脲可濕性粉劑(WP)(江西禾益化工有限公司),50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑(WP)(拜爾作物科學公司),25%多菌靈可濕性粉劑(WP)(廣東中迅農(nóng)科股份有限公司),250 g/L丙環(huán)唑乳油(EC)(瑞士先正達作物保護有限公司),均為市售商品藥劑。
1.2 方法
1.2.1 不同單劑對核盤菌的毒力測定 采用菌絲生長速率法[9],根據(jù)藥劑的推薦劑量及預備試驗結果,將供試的8種藥劑配制成系列濃度的含藥PDA培養(yǎng)基。丙環(huán)唑、咪鮮胺錳鹽、多菌靈的濃度為0.6、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025 μg/mL,百菌清的濃度為1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1 μg/mL,腐霉利的濃度為0.6、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025 μg/mL,異菌脲、菌核凈、甲基硫菌靈的濃度為1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05 μg/mL。用打孔器從PDA培養(yǎng)基上取直徑為5 mm的核盤菌菌餅,接種于含藥PDA平板中央,置于25 ℃倒置培養(yǎng),每處理重復3次。待對照菌落長滿培養(yǎng)皿時,用十字交叉法測量菌落直徑,取平均值,計算抑制率。以藥劑濃度的對數(shù)值為橫坐標,不同濃度下抑制率的幾率值為縱坐標,繪制毒力曲線,求得8種殺菌劑對油菜菌核病菌的毒力回歸方程、EC50值和相關系數(shù)。
抑制率=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對照菌落直徑-菌餅直徑)×100%
1.2.2 不同混配劑對核盤菌的毒力測定 參照文獻[10],根據(jù)藥劑單劑的毒力及作用機理,將咪鮮胺錳鹽(A)、百菌清(B)、甲基硫菌靈(C)、菌核凈(D)進行兩兩配比,按質(zhì)量比3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3進行混配,三次重復。根據(jù)文獻[11]計算混劑的增效系數(shù)SR,SR≥1.5表示具有增效作用;SR≤0.5,表示具有拮抗作用;0.5 混劑的EC50理論值=(混劑中A的質(zhì)量分數(shù)+混劑中B的質(zhì)量分數(shù))/(混劑中A的質(zhì)量分數(shù)/A的EC50+混劑中B的質(zhì)量分數(shù)/B的EC50) 混劑的增效系數(shù)(SR)=混劑的EC50理論值/混劑的EC50實際值 2 結果與分析 2.1 單劑對核盤菌的毒力 單劑對核盤菌的毒力測定結果如表1所示,從表1中可以看出,在供試的8種藥劑中,咪鮮胺錳鹽對油菜菌核病菌的毒力最大,其EC50值為0.067 6 μg/mL;其次是丙環(huán)唑,其EC50值為0.098 9 μg/mL;菌核凈、腐霉利、甲基硫菌靈、多菌靈、異菌脲EC50值在0.1~0.5 μg/mL之間;百菌清的毒力最小,其EC50值為0.706 1 μg/mL。 2.2 混配劑對核盤菌的毒力 不同混配劑的毒力測定結果如表2所示,由此可見,咪鮮胺錳鹽(A)和百菌清(B)混配時,增效系數(shù)(SR)在1.346 6~2.179 5之間,配比2∶1時增效系數(shù)最大,為2.179 5;咪鮮胺錳鹽(A)與甲基硫菌靈(C)混配時,增效系數(shù)(SR)在1.511 1~2.952 7之間,均表現(xiàn)增效作用,其中配比1∶3時增效系數(shù)最大,為2.952 7;咪鮮胺錳鹽(A)與菌核凈(D)混配時,配比1∶1時增效系數(shù)最大,為1.537 2;其余藥劑配比均表現(xiàn)相加作用。 3 小結與討論 本研究測定了8種藥劑對油菜菌核病菌的室內(nèi)毒力,結果表明,供試的藥劑對核盤菌菌絲生長均具有一定的抑制作用,抑制作用依次為50%咪鮮胺錳鹽WP>250 g/L丙環(huán)唑EC>25%多菌靈WP> 50%腐霉利WP>40%菌核凈WP>50%異菌脲WP> 70%甲基硫菌靈WP>75%百菌清可濕性粉劑WP。咪鮮胺錳鹽和丙環(huán)唑?qū)τ筒司瞬【亩玖^高,其余藥劑的毒力較低,建議這兩種藥劑經(jīng)田間防效驗證后,可輪換用于油菜菌核病的田間防治。任莉等[12]比較了核盤菌對咪鮮胺錳鹽、多菌靈、多·酮及菌核·錳鋅殺菌劑的敏感性,結果表明核盤菌對殺菌劑咪鮮胺錳鹽高度敏感,而對其余3種殺菌劑敏感性稍差,本研究結果與此相一致。秦虎強等[13]報道陜西漢中地區(qū)的油菜菌核病菌對咪鮮胺錳鹽、腐霉利、異菌脲、多菌靈、甲基托布津、戊唑醇及菌核凈的敏感性較強,其次為乙霉威與丙環(huán)唑,對百菌清中度敏感,本研究結果與此存在一定差別,推測原因可能與不同地區(qū)油菜菌核病菌的抗藥性有關,有待于進一步研究。 長期使用單一藥劑易造成病原菌的抗藥性,使用混配劑可達到比單劑更為理想的防治效果,減少病原菌抗藥性產(chǎn)生的風險。周鋒等[14]報道戊唑醇和菌核凈以配比為1∶20、5∶44、5∶26、10∶33、5∶11、15∶22、12∶11、20∶11和21∶5復配后對油菜菌核病病原菌具有增效作用,且當二者配比為12∶11時增效系數(shù)最高。本研究選取了毒力強且作用機理不同的4種藥劑進行兩兩混配,聯(lián)合毒力測定結果表明,咪鮮胺錳鹽與百菌清配比2∶1、咪鮮胺錳鹽與甲基硫菌靈配比1∶3、咪鮮胺錳鹽與菌核凈配比1∶1時都具有明顯的增效作用。本研究篩選的增效作用明顯的混配劑,不僅可以明顯提高藥劑的殺菌效果,而且有利于防止或延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生,為開發(fā)防治油菜菌核病的混配制劑提供了重要的參考依據(jù)。 參考文獻: [1] 高小寧,陳亞菲,韓青梅,等.內(nèi)生細菌EDR2的鑒定及其對油菜菌核病的防治[J].西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版),2013,41(2):175-181. [2] LI H, LI H B, BAI Y, et al. The use of Pseudomonas fluorescens P13 to control Sclerotinia stem rot(Sclerotinia sclerotiorum) of oilseed rape[J]. The Journal of Microbiology, 2011, 49(6):884-889. [3] YANG D J, WANG B, WANG J, et al. Activity and efficacy of Bacillus subtilis strain NJ-18 against rice sheath blight and Sclerotinia stem rot of rape[J]. Biological Control,2009,51(1):61-65. [4] 趙丹丹,臧 新,田保明,等.菌核菌及油菜菌核病相關研究進展[J].河南農(nóng)業(yè)科學,2010(2):120-123. [5] MAKOWSKI D,TAVERNE M,BOLOMIER J,et al.Comparison of risk indicators for sclerotinia control in oilseed rape[J]. Crop Protection,2005,24(6):527-531. [6] 李 偉,李 偉,周益軍,等.江蘇省油菜菌核病對多菌靈的敏感性[J].中國油料作物學報,2007,29(1):63-68. [7] 康育光,韓巨才,劉慧平,等.核盤菌對幾種殺菌劑的敏感性研究[J].山西農(nóng)業(yè)大學學報,2006,26(1):19-21. [8] 陳天壽.微生物培養(yǎng)基的制造與應用[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1995. [9] 顧廣杰,崔林開,王樹和,等.新奧霉素對7種植物病原真菌的室內(nèi)毒力測定[J].農(nóng)藥,2013,52(4):293-294. [10] 王小藝,王躍龍,歐曉明,等.農(nóng)藥混劑配比研究的一種實用尋優(yōu)方法初探[J].農(nóng)藥學學報,2005,7(1):40-44. [11] 肖 星,蒲金基,陳 照,等.兩種不同殺菌劑混配對香蕉黑星病菌的增效作用研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學,2008(7):92,100. [12] 任 莉,陳坤榮,王成玉,等.咪鮮胺錳鹽防治油菜菌核病的潛力研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學,2010,43(20):4183-4191. [13] 秦虎強,陳芳穎,付鼎程,等.油菜菌核病菌對10種殺菌劑的敏感性及不同藥劑田間防效[J].西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版),2011,39(7):117-122. [14] 周 鋒,張小磊,胡承勇,等.戊唑醇和菌核凈復配對油菜菌核病病原菌的增效作用[J].農(nóng)藥,2013,52(8):602-605.