雞傳染性法氏囊病的診斷綜述

摘 要：雞傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病病毒引起雞和火雞的一種急性、高度接觸性傳染病。病毒損傷雛雞的法氏囊，導致免疫抑制，干擾各種疫苗的免疫效果，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大經濟損失。本文從該病的流行病學、臨床癥狀與病理變化、病原分離鑒定、免疫學診斷、聚合酶鏈式反應診斷等方面進行綜述，以期為科學防控雞傳染性法氏囊病提供參考。

關鍵詞：雞傳染性法氏囊?。浑u傳染性法氏囊病病毒；診斷

中圖分類號：S852.65 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2015）04-0069-02

傳染性法氏囊病 （Infectious bursal disease，IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（IBDV）引起雞和火雞的一種急性、高度接觸性傳染病。IBD主要侵害3～6周齡雛雞的中樞免疫系統(tǒng)——法氏囊，造成法氏囊器質性及功能性損傷，使病雞的抗體生產受阻，抵抗力明顯下降。由于IBD極易造成免疫抑制，有些學者形象地稱該病為雞的“艾滋病”[1]。造成的危害不僅是雞嚴重委頓、腹瀉、食欲減退等，更重要的是病毒損傷法氏囊導致免疫抑制，從而影響雞的免疫應答和抗病力的產生，使病雞對腺病毒、大腸桿菌、沙門氏桿菌、雞球蟲等病原更易感，對馬立克疫苗、新城疫疫苗等免疫接種的疫苗應答下降或喪失[2]，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經濟損失。有關IBD的診斷技術，國內外學者進行了大量的研究，可分為流行病學、臨床癥狀與病理變化、病原分離鑒定、免疫學診斷、聚合酶鏈式反應診斷等，本文對此作簡要綜述。

1 流行病學特點

自然感染主要發(fā)生于雞，各種品種的雞都能感染。多侵害2～15周齡的幼雞，以3～6周齡的幼雞最為易感。該病一般突然發(fā)生，迅速傳播，雞通常在感染后第3天開始死亡，5 d～7 d達到高峰，以后很快停息。病雞是主要傳染源，主要通過糞便排毒，被病毒污染的飲水、飼料、車船、用具、人員、塵埃、老鼠、甲蟲等都可直接或間接傳播該病。該病可在任何管理和氣候條件下發(fā)生，但炎熱潮濕、雞群擁擠、通風不暢、營養(yǎng)缺乏等原因是都會加重病情，發(fā)病率和死亡率也隨之升高。另外，當有IBD超強毒毒株（vvIBDV）存在時，死亡率可高達70 %。

2 臨床癥狀與病理變化

2.1 臨床癥狀

IBD的潛伏期為2 d～3 d，易感雞群感染后突然發(fā)病，最初有啄食自己泄殖腔的行為。病雞精神萎靡、嗜睡，采食和飲水減少或廢絕，排白色水樣稀糞，羽毛蓬亂，震顫、弓背或蹲伏不起，腹瀉脫水，常因機體極度衰竭而死亡，病程5 d～7 d。病愈雞生長發(fā)育不良，全身免疫機能降低，易感染其他疾病。

2.2 病理變化

病死雞尸體脫水，胸、腿肌肉出血，腺胃和肌胃交接處有條狀出血點，腎臟蒼白腫大，腎小管和輸尿管擴張，內有尿酸鹽潴留。脾臟輕度腫脹，表面有彌散性灰色點狀壞死灶。感染后法氏囊內黏液增多，法氏囊水腫和出血，體積和重量可達正常值的2～3倍，漿膜覆蓋淡黃色膠狀滲出物，囊本身由正常的白色變成奶油黃色，發(fā)病5 d后法氏囊開始萎縮。

3 病原分離鑒定

取發(fā)病典型雞的法氏囊和脾，經磨碎后加入滅菌生理鹽水作1∶5或1∶10稀釋，高速離心后，取上清液加入青、鏈霉素各1 000 U/mL，作用1 h后，經絨毛尿囊膜接種10～12日齡SPF雞胚。受感染的雞胚在3 d～5 d死亡，可見到胚胎水腫、出血。為了鑒定是否為IBDV，可用已知的陽性血清在雞胚或雞胚成纖維細胞培養(yǎng)物上做病毒中和試驗。

4 免疫學診斷

4.1 瓊脂免疫擴散試驗（AGP）

1968年Wagner等首次運用AGP試驗檢測IBDV。利用抗原、抗體在瓊脂凝膠中自由擴散并發(fā)生特異性結合，形成免疫沉淀帶。該方法簡便快速，在感染5 d～6 d后，取病雞法氏囊制作懸液，離心后取上清，再用陽性血清按常規(guī)瓊擴法進行。AGP試驗操作簡單方便、無需昂貴的儀器設備，適合基層使用，并且能夠區(qū)分血清Ⅰ型和血清Ⅱ型，但敏感性較低[3]。曹洪敬等研制了IBD瓊脂擴散試驗診斷試劑，用于檢測免疫雞群的IBD抗體，指導疫苗免疫以及檢測發(fā)病雞群的法氏囊組織IBD抗原，達到確診的目的[4]。

4.2 病毒血清中和試驗（VN）

VN常用于區(qū)分IBDV的血清型，是工人的衡量體液免疫的最佳參考方法，準確性、敏感性相對較高，且能夠測定交叉保護中和抗體的滴度，缺點是耗時、費力、需無菌操作，難用于生產中的大規(guī)模檢測[5]。

4.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA具有敏感性高、特異性強、便捷等優(yōu)點，適用于大規(guī)模樣品的檢測。Maqrquardt等建立了間接ELISA檢測血清中IBDV抗體；Synder等首次采用單克隆抗體建立抗原捕獲ELISA（AC-ELISA），用于檢測樣品中IBDV抗原。通過對不同毒株檢測結果表明，采用單克隆抗體建立的AC-ELISA方法可以鑒別IBDV血清亞型。吳曉悠制備IBDV VP2蛋白的單克隆抗體，建立了IBDV雙抗體夾心ELISA，檢測IBDV和VP2蛋白，發(fā)現都具有良好的反應特異性、敏感性和重復性，可用于IBDV的臨床檢測和診斷[6]。

4.4 免疫熒光技術

免疫熒光技術又稱熒光抗體技術，它是把抗原抗體反應的敏感性和特異性同顯微形態(tài)學

相結合，可以特異、敏感、快速地檢測和定位某些未知抗原和抗體。自Coons等（1941）建立免疫熒光技術以來，免疫熒光技術已在醫(yī)學、農學等領域廣泛應用。國內張晨生等最早利用IBD-CJ801毒株制備的高免血清制備了熒光抗體用于IBDV的診斷，達到了良好的效果[7]。李翠等建立了間接免疫熒光方法用于雞傳染性法氏囊病活疫苗（B87株）病毒的含量，研究表明比傳統(tǒng)雞胚半數致死量（ELD50）方法具有更高的敏感性[8]。

4.5 膠體金免疫層析技術

膠體金免疫層析技術是20世紀90年代初在免疫滲透技術的基礎上建立的一種快捷簡單的免疫學檢測技術，該方法使用極為方便，具有快速、敏感、特異的特點。河南省農業(yè)科學院生物技術研究所張改平[9]等運用膠體金免疫層析技術研制成功了IBDV快速檢測試紙條，并申請了國家發(fā)明專利（專利號：ZL99101537.1）。該試紙條在檢測IBDV時，無需附加任何儀器和試劑，1 min～5 min內憑目測便可得出可靠結果，結果判定形象直觀，真正實現了特異、敏感、簡便、快速的目標，適合在養(yǎng)殖場和獸醫(yī)臨床推廣中應用?？梢姡z體金免疫層析試紙條相比其它檢測手段，具有無可比擬的優(yōu)勢。朱瑞良等報道了利用免疫膠體金試紙膜能夠識別不同的IBDV毒株，包括強毒株和弱毒株[10]。

5 聚合酶鏈式反應（PCR）診斷技術

PCR診斷技術有著眾多的優(yōu)點：特異性高、針對性強；靈敏度高、簡便快速、對檢測

樣品要求低、安全檢測病原體等。PCR診斷技術是目前病毒學診斷最常用的技術之一。

5.1 逆轉錄PCR（RT-PCR）

王永山等將IBD病雞糞便及飼料經PEG濃縮處理后用RT-PCR進行IBDV的檢測，糞便與飼料的陽性檢出率均為100 %，而用夾心ELISA法，飼料中未檢出IBDV，可見RT-PCR法比夾心ELISA法具有更高的靈敏度[11]。

5.2 實時熒光定量逆轉錄PCR（Real-time RT-PCR）

何秀苗等建立了基于IBDV-VP2基因的熒光定量RT-PCR檢測（qRT-PCR）技術，并檢測該qRT-PCR體系的特異性、靈敏度和重復性，結果表明所建立的反應體系特異性、靈敏度高，并具有很好的穩(wěn)定性，可應用于病毒復制水平的檢測和臨床樣品的檢測[12]。汪正興亦建立了熒光定量RT-PCR方法，實現了IBDV超強毒株與經典疫苗毒株的鑒別診斷，檢測超強毒株和經典毒株的敏感性分別可達420和320個拷貝，可檢出1∶320倍稀釋的陽性法氏囊樣品[13]。

6 結語

近年來，IBDV的流行出現了新的特點，其臨床癥狀呈不典型性，免疫失敗現象亦非常嚴重，因此對本病的早期診斷就顯得尤為重要。隨著分子生物學技術的快速發(fā)展，相信今后會有更多的IBDV快速診斷技術問世，為科學有效防控IBD提供有力支持。

參考文獻：（13篇，略）