部位與鱗莖生物堿含量研究不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限伊貝母地上部位與鱗莖生物堿含量研究

張鵬葛　盛萍　任慧梅

摘要 [目的]研究不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限伊貝母地上部位與地下鱗莖總生物堿含量。[方法]采用酸性染料比色法測(cè)定總生物堿的含量。[結(jié)果]在不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限的伊貝母中，其地上部位與地下鱗莖的生物堿含量存在差異，4年生的伊貝母總生物堿含量比3年和5年的含量高，地上部位中總生物堿含量為地下鱗莖中的1.258～2.870倍，新疆伊犁州新源縣中的伊貝母總生物堿含量均比其他產(chǎn)地的總生物堿含量低。[結(jié)論]不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限伊貝母中總生物堿含量因產(chǎn)地及生長(zhǎng)年限不同而存在差異，但總體上地上部分的總生物堿含量高于地下鱗莖，存在進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)的價(jià)值。

關(guān)鍵詞 伊貝母；地上部位；地下鱗莖；生物堿；含量；酸性染料比色法

中圖分類(lèi)號(hào) S567；R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）19-082-02

伊貝母是《中華人民共和國(guó)藥典》收載的、常用名貴大宗藥材，為百合科植物新疆貝母Fritillaria walujewii Regel 或伊犁貝母 Fritillaria pallidiflora Schrenk 的干燥鱗莖。性微寒，味苦，歸肺、心經(jīng)，具有清熱潤(rùn)肺、化痰止咳之功效。臨床上常用于肺熱燥咳、干咳少痰、陰虛勞咳、咳痰帶血等癥[1]。在臨床應(yīng)用方面與藥材川貝母相同，是中醫(yī)處方和中成藥生產(chǎn)常用的名貴藥材。其野生品種僅分布在我國(guó)新疆境內(nèi)[2-3]，為國(guó)家三級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生藥材。由于野生伊貝母藥材資源破壞嚴(yán)重，近年伊貝母作為新疆道地藥材的人工種植逐漸備受重視。

謝運(yùn)飛等積極探索了川貝母地上部位的開(kāi)發(fā)利用，結(jié)果表明川貝母地上部位含有與地下部位相同的有效成分，且含量可觀，這對(duì)貝母地上部位變廢為寶及資源的合理開(kāi)發(fā)利用提供了一條新思路[4]?，F(xiàn)代藥理研究表明，伊貝母主要活性成分為總生物堿類(lèi)成分[5]，但有關(guān)其地上部位與地下鱗莖中總生物堿含量差異以及不同產(chǎn)地和不同采收年限與藥材主要活性成分含量方面的聯(lián)系尚未見(jiàn)系統(tǒng)研究。因此，該試驗(yàn)采用酸性染料比色法對(duì)不同產(chǎn)地及年限的伊貝母地上部位與鱗莖生物堿含量進(jìn)行了測(cè)定，為地上部分變廢為寶、探討其最佳產(chǎn)地、最佳生長(zhǎng)年限及合理開(kāi)發(fā)伊貝母藥材資源提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 供試材料為不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限的新疆貝母和伊犁貝母新鮮莖、葉、鱗莖，樣品信息如表1所示。經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院盛萍教授鑒定為百合科植物新疆貝母Fritillaria walujewii Regel或伊犁貝母Fritillaria pallidiflora Schrenk。憑證標(biāo)本存放于新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中藥資源教研室。藥材經(jīng)60 ℃烘干后粉碎，過(guò)80 目篩，備用。對(duì)照品西貝素（批號(hào)110767-201005）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備。

精密稱(chēng)取0.005 1 g西貝素置5 ml容量瓶中，用少量氯仿溶解，并用氯仿定容至刻度，從中精密移取3 ml至25 ml容量瓶中并用氯仿定容至刻度（0.124 8 mg/ml），備用。

1.2.2 供試品溶液的制備。

精密稱(chēng)取樣品粉末（過(guò)80目篩）約1.000 0 g，置250 ml圓底燒瓶中，加濃氨試液2 ml，浸潤(rùn)12 h。精密加入三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液30 ml，混勻，置80 ℃水浴加熱回流提取4 h，放冷，濾過(guò)，用三氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶液洗滌2～3次圓底燒瓶，洗滌液與樣品液一起過(guò)濾后，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在60 ℃水浴上蒸干后，于烘箱中60 ℃干燥3 h，殘?jiān)由倭柯确路执稳芙猓恳迫?5 ml容量瓶中，加氯仿至刻度，搖勻備用。

1.2.3 方法學(xué)考察。

1.2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系考察。

從西貝素對(duì)照品溶液（0.124 8 mg/ml）中精密吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml分別至25 ml容量瓶中，分別精密加入pH 5.0的溴麝香草酚藍(lán)溶液4 ml、氯仿2.6 ml，密塞，振搖均勻后，移入分液漏斗中靜置30 min，分取氯仿層于裝有0.25 g無(wú)水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，在414 nm 處測(cè)定吸光度。以西貝質(zhì)量分?jǐn)?shù)為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.2.3.2 精密度考察。精密吸取對(duì)照品溶液5份，每份0.2 ml于25 ml容量瓶中，測(cè)定吸光度，并計(jì)算RSD值，要求該值小于3%。

1.2.3.3 重現(xiàn)性考察。取同一樣品粉末5份，每份約1.000 0 g，精密稱(chēng)定，按“1.2.2”方法進(jìn)行制備。測(cè)定吸光度，計(jì)算總生物堿的含量，并計(jì)算RSD值，要求該值小于3%。

1.2.3.4 穩(wěn)定性考察。取同一供試品溶液，分別于配置溶液后0、1、2、3、4、6、8 h，精密吸取0.2 ml至25 ml容量瓶中，加pH 5.0的溴麝香草酚藍(lán)4 ml、氯仿2.6 ml，測(cè)定吸光度，計(jì)算總生物堿的含量，并計(jì)算RSD值。

1.2.3.5 回收率試驗(yàn)。取已知總生物堿含量的樣品粉末（總生物堿含量為0.65%）5份，每份約0.5 g，精密稱(chēng)定，置250 ml圓底燒瓶中，分別精密吸取含有西貝素80%、100%、120%樣品中總生物堿量加入樣品中，按“1.2.2”方法進(jìn)行制備，測(cè)定吸光度，并計(jì)算平均回收率和RSD值。

1.2.4 樣品含量測(cè)定。

精密吸取供試品溶液于25 ml容量瓶中，加入pH 5.0的溴麝香草酚藍(lán)溶液4 ml、氯仿2.6 ml，密塞，振搖均勻后，移入分液漏斗中靜置，分取氯仿層于裝有0.25 g無(wú)水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，在414 nm 處測(cè)定吸光度，計(jì)算含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 線(xiàn)性關(guān)系考察。按“1.2.3.1”方法操作，在414 nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，數(shù)據(jù)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得西貝素的回歸方程為A =0.008 4 C + 0.007 62（r=0.999 4），表明西貝素在 12.48～74.88 μg范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.1.2 精密度考察。按“1.2.3.2”方法操作，測(cè)得RSD值為1.2%，表明精密度良好，符合含量測(cè)定要求。

2.1.3 重現(xiàn)性考察。按“1.2.3.3”方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算總生物堿的含量，RSD值為1.9%，表明用此方法測(cè)定生物堿含量重現(xiàn)性良好。

2.1.4 穩(wěn)定性考察。按“1.2.3.4”方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算總生物堿的含量，RSD值為0.8%，表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.5 回收率試驗(yàn)。按“1.2.3.5”方法操作，測(cè)得平均加樣回收率為101.53%（n=5），RSD為2.67%，表明該方法回收率較好，方法可行。

2.2 樣品含量測(cè)定 對(duì)不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限新疆貝母和伊犁貝母地上部位與地下鱗莖按“1.2.4”方法測(cè)定吸光度，并計(jì)算相應(yīng)含量。由表1可見(jiàn)，不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限新疆貝母和伊犁貝母地上部位與地下鱗莖的生物堿含量存在差異，同品種在不同年限中的總生物堿含量不同，但所有樣品中地上部分的總生物堿含量均高于地下鱗莖部分，地上部分的總生物堿含量為地下部分的1.258～2.870倍，且4年生的伊貝母總生物堿含量比3年生和5年生的含量高；新疆伊犁州新源縣中的伊貝母總生物堿含量均比其他產(chǎn)地的總生物堿含量低。

3 小結(jié)與討論

該試驗(yàn)中新疆貝母和伊犁貝母的生長(zhǎng)年限為3、4、5年，結(jié)果表明，同品種在不同年限中的總生物堿含量不同，但所有樣品中均4年生的伊貝母總生物堿含量均比3年生和5年生的含量高，這一結(jié)果與張鵬葛等的研究結(jié)果[6]相一致。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)同品種在不同產(chǎn)地中的總生物堿含量存在差異，但新疆伊犁州新源縣產(chǎn)的新疆貝母及伊犁貝母總生物堿含量均比其他產(chǎn)地的總生物堿含量低，表明不同產(chǎn)地的溫度、水分、光照、土壤等條件均可能對(duì)生物堿含量有所影響。這為指導(dǎo)伊貝母人工種植環(huán)境提供了科學(xué)依據(jù)。

一直以來(lái)，人們都習(xí)慣用地下鱗莖作為貝母藥用部位，而其植株的地上部分則在果期以后被丟棄。但根據(jù)現(xiàn)代研

究發(fā)現(xiàn)，川貝母的生物堿類(lèi)化合物為其主要活性成分，且地上和地下部分的化學(xué)成分相似，只是各部位生物堿類(lèi)化合物的含量有所差異。該試驗(yàn)結(jié)果表明，不同產(chǎn)地和生長(zhǎng)年限新疆貝母和伊犁貝母地上部分的總生物堿含量為地下部分的1.258～2.870倍，這一結(jié)果與馬微微等的研究結(jié)果[7]相一致，表明地上部位莖和葉同樣具有一定的藥用價(jià)值，為伊貝母地上部位用藥提供了理論依據(jù)，但由于伊貝母中的有效成分不僅僅為生物堿類(lèi)成分，因此，合理評(píng)價(jià)伊貝母地上部位能否入藥，尚需要進(jìn)一步從多組分及藥效試驗(yàn)比較進(jìn)行深入研究。

參考文獻(xiàn)

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安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，Journal of Anhui Agri. Sci.2015，43（19）：141-144