5 種尿沉渣染色方法的效果比較

嚴(yán)雪梅，劉 寶，夏曙華

(1.四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川成都 610064;2.貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州貴陽 550001;3.貴州醫(yī)科大學(xué)附院微生物免疫科，貴州 貴陽 550004;4.貴州醫(yī)科大學(xué) 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，貴州 貴陽 550004)

尿沉渣染色顯微鏡檢查是目前輔助臨床醫(yī)生診斷泌尿系統(tǒng)疾病的常規(guī)方法，能識(shí)別尿液有形成分，提高病理成分的鑒別［1－3］。由于尿沉渣中各種成分的多樣性、復(fù)雜性、易變性及各種染料的親和率不同，使尿沉渣各種有形成分在不同的染色方法下所表現(xiàn)的特點(diǎn)也各不同，因此根據(jù)臨床需要合理選擇染色方法，具有重要的臨床意義［4－8］。本研究采用美國(guó)DiaSys R/S500 尿沉渣分析工作站篩選180 例尿液異常標(biāo)本，采用常見的5 種尿沉渣染色方法進(jìn)行檢查，比較5 種方法的染色效果，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與標(biāo)本

美國(guó)DiaSys R/S500 尿沉渣分析工作站，帶圖像采集儀的OLYPUMS 顯微鏡，水平離心機(jī)，10 mL尿沉渣離心管。BASO 尿沉渣Sternheimer－Malbin改良染色液(S–M 染液，批號(hào)408111);Sternheimer 染色液(S 染液，批號(hào)409111);自配的Berhe－Muhlberg 染色液(B－M 染液)、阿利新蘭－中性紅染色液(阿－中染液)和瑞氏－姬姆薩復(fù)合染色液(瑞－姬染液)。所用標(biāo)本來源于美國(guó)DiaSys R/S500 尿沉渣分析工作站篩選180 例尿液異常標(biāo)本。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制備 取異常尿液標(biāo)本10 mL 置入尿沉渣離心管中，400 g，離心5min，棄上清液，保留下層0.2 mL 尿沉渣充分混勻，進(jìn)行尿沉渣染色條件的選擇、定性及半定量試驗(yàn)。

1.2.2 染色條件的選擇 隨機(jī)取60 例離心后的尿沉渣異常標(biāo)本，經(jīng)多次試驗(yàn)，選擇出不同染色時(shí)間、不同尿液與染液的比例，進(jìn)行染色效果的比較。S－M、S、阿－中及B－M 染色法按尿液∶染液比例為3 ∶1、2 ∶1、1 ∶1、1 ∶2 及1∶3，瑞－姬法按尿液∶染液比例為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4 及1∶5。

1.2.3 定性及半定量試驗(yàn)［2］取120 例離心后的尿沉渣異常標(biāo)本，按篩選出的最佳染色條件對(duì)其進(jìn)行染色，鏡檢，采圖;根據(jù)尿沉渣染色定性、半定量結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。

1.3 統(tǒng)計(jì)處理

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。半定量結(jié)果采用多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)，P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 染色時(shí)間

結(jié)果顯示，S－M、S、阿－中染色法最佳時(shí)間為2 ～5 min，B－M 染色法Ⅰ液最佳時(shí)間為1 ～2 min、Ⅱ液為2 ～3 min，瑞－姬法Ⅰ液最佳時(shí)間為1 min、Ⅱ液為10 ～15min。見表1。

表1 5 種尿沉渣染色方法不同染色時(shí)間的效果比較Tab.1 The effects of different dyeing time of five kinds of dyeing methods

2.2 尿液與染液比例

根據(jù)尿液與染液不同比例進(jìn)行染色，篩選出S－M、S、阿－中、B－M、瑞－姬5 種染色法的最佳尿液與染液比例分別為:1∶1、2∶1、1∶2 ～1∶3、1∶2及1∶3 ～1∶5。

2.3 定性結(jié)果

鏡下可見S 染液染色背景清晰或有少量雜質(zhì)分布，有形成分結(jié)構(gòu)清晰易辨別(圖1A);S－M 染液染色背景的清晰度、雜質(zhì)含量與S 法的染色效果相近，但有形成分與背景顏色的對(duì)比度和有形成分核、漿等層次結(jié)構(gòu)著色情況不如S 法鮮明(圖1B);B－M 染液染色背景較清晰，但有形成分結(jié)構(gòu)模糊，識(shí)別困難，細(xì)菌不著色(圖1C);阿－中染液染色背景雜質(zhì)較多，不清晰，有形成分結(jié)構(gòu)模糊，不易分類(圖1D);瑞－姬染液染色背景清晰，雜質(zhì)較多，有形成分與背景顏色相近，結(jié)構(gòu)模糊(圖1E)。

2.4 半定量結(jié)果

經(jīng)秩和檢驗(yàn)，S 與S－M 染色法之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，B－M、阿－中及瑞－姬染色法間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，而S、S－M染色法與B－M、阿－中染液及瑞－姬染色法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，見表2。

表2 5 種尿沉渣染色方法的半定量結(jié)果(n)Tab.2 The semi quantitative results of urinary sediment stained by five kinds of dyeing methods

圖1 尿沉渣5 種染色方法染色效果(×400)Fig.1 Staining effect of five kinds of dyeing methods

3 討論

尿沉渣染色顯微鏡檢查有助于臨床醫(yī)生對(duì)患者泌尿系統(tǒng)疾病的診斷，由于尿沉渣中有形成分的多樣性和對(duì)染料親和力的不同，導(dǎo)致尿沉渣在不同的染色方法下所表現(xiàn)的特點(diǎn)也各不相同，因此選擇較好的染色方法至關(guān)重要［1－4］。本文選擇臨床常用的5 種尿沉渣染色方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)S－M、S、阿－中染色法的最佳染色時(shí)間為2 ～5 min，阿－中染色法染色5 min 后有大量褐色集結(jié)成塊的雜質(zhì)逐漸覆蓋在管型或其它有形成分上，致使識(shí)別和分類困難;B－M 染色法，背景較清晰，但有形成分結(jié)構(gòu)模糊，識(shí)別困難，細(xì)菌不著色，與文獻(xiàn)［9］報(bào)告一致;B－M、瑞－姬染色法的最佳染色時(shí)間與文獻(xiàn)［4］相同。本研究中S－M、S、阿－中、B－M、瑞－姬染色法尿液與染液的最佳染色比例分別為:1∶1;2∶1;1∶2 ～1∶3;1∶2;1∶3 ～1∶5，此類研究未見報(bào)道。

從染色效果來看，5 種染色方法中，以S 染色法染色效果最佳，背景清晰，有形成分和背景顏色對(duì)比鮮明，各有形成分著色層次分明，結(jié)構(gòu)清晰，易于識(shí)別，并可進(jìn)行進(jìn)一步的分類;其次為S－M 染色法，而B－M，瑞－姬和阿－中3 種染色法，染色效果相對(duì)較差。半定量結(jié)果經(jīng)秩和檢驗(yàn)，S 與SM 染色法之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);BM、阿－中及瑞－姬染色法間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而S、S－M 染色法與B－M、阿－中染液及瑞－姬染色法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。以上研究結(jié)果均說明BASO 尿沉渣S－M染色法、S 染色法染色效果和方法最佳，尤以S 染色法染色效果更佳，更適合于臨床尿沉渣染色顯微鏡的檢查和應(yīng)用。

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