支原體肺炎伴喘息病兒血清Th1／Th2型細(xì)胞因子檢測

康玉亭，張建，王婷，康永桂

（咸陽市婦幼保健院兒科，陜西 咸陽 712000）

肺炎支原體（MP）是引起兒童非典型肺炎主要病原之一，兒童肺炎中10%～40%是由MP引起的［1］。MP肺炎（MPP）多發(fā)生于學(xué)齡期和少年期兒童，兒童感染MP后部分伴喘息發(fā)作［2］。已有研究顯示，反復(fù)喘息發(fā)作甚至支氣管哮喘與MPP有著密切的關(guān)系，其具體機(jī)制尚不清楚，但多數(shù)的研究傾向于免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制［3］。本研究以我院收治明確診斷為MPP的病兒為研究對(duì)象，測定其血清中Th1／Th2型細(xì)胞因子的水平，旨在進(jìn)一步研究MPP伴喘息發(fā)作的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2013年3月—2014年5月，我院收治MPP病兒63例，男34例，女29例；年齡8個(gè)月～10歲。MPP診斷符合文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)：①可能伴有其他肺部疾??；②有哮喘病史；③有肝臟或腎臟疾病；④接受支氣管擴(kuò)張劑治療；⑤接受糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療；⑥接受大環(huán)內(nèi)酯類等抗生素的治療。其中MPP伴喘息組（B組）30例，男17例，女13例，年齡（5.53±2.31）歲；MPP不伴喘息組（C組）33例，男17例，女16例，年齡（5.22±2.03）歲。同時(shí)隨機(jī)抽取健康兒童30例作為對(duì)照組（A組），男14例，女16例，年齡（5.38±2.17）歲；近3個(gè)月內(nèi)無任何感染性疾病以及發(fā)熱或咳嗽等病史。3組性別和年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 檢測指標(biāo)及方法

入院第2天采集病兒清晨空腹外周靜脈血3mL，室溫靜置1h，4℃條件下2000r／min離心10min，吸取上清，－20℃保存待測。血清中相關(guān)細(xì)胞因子檢測均采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法，檢測試劑盒IL－18（EH047）、IFN－γ（EH008）、TNF－α（EH009）、IL－4（EH003）和IL－6（EH004）購自ExCell Bio上海依科賽生物制品有限公司；檢測儀器均使用美國Thermo Multiskan Spectrum全波長酶標(biāo)儀，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料結(jié)果以表示，多組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析（One－Way ANOVA），組內(nèi)兩兩比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

MPP伴喘息組和不伴喘息組病兒血清中IL－18、TNF－α、IL－4和IL－6水平顯著高于對(duì)照組，差異有顯著性（F＝72.225～293.524，P＜0.01）；而3組血清中IFN－γ水平比較差異無顯著意義（F＝1.387，P＞0.05）。MPP伴喘息組與不伴喘息組比較，血清IL－18、IL－6、IFN－γ水平比較差異無顯著意義（P＞0.05），而 TNF－α、IL－4水平差異均有顯著意義（t＝2.993、2.533，P＜0.05）。見表1。

表1 各組血清中各細(xì)胞因子水平比較（ρ／ng·L－1，）

表1 各組血清中各細(xì)胞因子水平比較（ρ／ng·L－1，）

組別 n IL－18 Th1Th2 IFN－γ TNF－αIL－4 IL－6 A組30169.7±24.84.03±1.32109.4±17.52.2±0.521.7±5.3 B組30252.6±26.14.33±1.07261.6±24.45.0±0.851.1±11.5 C組33243.2±30.54.52±1.04239.2±33.84.4±0.946.6±12.6

3 討 論

急性下呼吸道感染是兒科最為常見的疾病之一。隨著生活環(huán)境和經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)的不斷變化，呼吸道感染的病原也發(fā)生了一定的變化，其中MP引起的呼吸道感染比例逐年增加［5－6］。MP是一種大小介于細(xì)菌與病毒之間的無細(xì)胞壁非典型性微生物，被認(rèn)為是導(dǎo)致社區(qū)獲得性肺炎（CAP）排名第3的病原體，大約占CAP的20%［7－8］。MP在人與人之間主要通過呼吸道飛沫傳播，在我國下呼吸道感染10%～30%是由 MP引起，而國外為9.6%～66.7%［9］。MPP多發(fā)于春季和冬季，且病人多為免疫力較低的學(xué)齡兒童以及青少年，發(fā)病率有呈低齡化的趨勢(shì)。通常該病的起病緩慢，主要的病變?yōu)榧毙詺夤埽夤苎?、支氣管肺炎、間質(zhì)性肺炎和毛細(xì)支氣管炎，同時(shí)少數(shù)MPP可出現(xiàn)肺囊腫、肺膿腫、肺門淋巴結(jié)大、縱隔增大以及胸膜增厚等［10］。在臨床上主要表現(xiàn)為咳嗽和發(fā)熱，而低氧或呼吸困難等癥狀不是很明顯，若不及時(shí)治療可引發(fā)嚴(yán)重的肺部損傷，甚至引起多系統(tǒng)、多器官并發(fā)癥如腦炎、肝炎、心肌炎和腎炎等，進(jìn)而危及生命。

MP感染不僅可以導(dǎo)致惡性肺部病變，還可進(jìn)一步誘發(fā)以及加重支氣管哮喘的發(fā)生，已成為除病毒以外誘發(fā)哮喘遷延不愈的重要因素［11］。MP感染后機(jī)體細(xì)胞通過細(xì)胞因子，上調(diào)輔助性T淋巴細(xì)胞Th2型細(xì)胞免疫反應(yīng)，導(dǎo)致Th1／Th2比例失衡，從而發(fā)展為哮喘［12］。

IL－18是一種前炎癥細(xì)胞因子，主要由活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，在結(jié)構(gòu)上與IL－1β相似，功能上與IL－12相似，其生物學(xué)功能主要是誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞產(chǎn)生IFN－γ以及促進(jìn)促炎細(xì)胞因子 TNF－α、IL－1β、IL－4、ICAM－1、GM－CSF和IL－8等的表達(dá)。本文研究結(jié)果顯示，MPP組病兒血清中IL－18水平與對(duì)照組比較顯著升高，說明其在疾病發(fā)病過程中發(fā)揮了促炎作用；但MPP伴喘息組與不伴喘息組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明IL－18在病兒喘息發(fā)病過程中不起主要作用，但其水平的升高可能會(huì)影響其他促炎因子水平。

Th1型細(xì)胞主要通過分泌Th1型細(xì)胞因子，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的抗感染和抗細(xì)胞內(nèi)病原體感染的免疫反應(yīng)。其最主要的細(xì)胞因子為IFN－γ，它可活化巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞以及CD8＋T細(xì)胞，進(jìn)而清理掉細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌和病原體。同時(shí)，IFN－γ也可通過活化誘導(dǎo)性一氧化氮合酶（iNOS）釋放NO自由基直接發(fā)揮生物學(xué)作用。本研究結(jié)果顯示，MPP病兒血清中TNF－α水平顯著高于對(duì)照組，說明其促進(jìn)炎癥反應(yīng)的同時(shí)也介導(dǎo)淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生其他細(xì)胞因子；同時(shí)，MPP伴喘息組明顯高于MPP不伴喘息組，說明TNF－α在病兒喘息發(fā)病過程中發(fā)揮了重要作用。Th2型細(xì)胞主要通過分泌Th2型細(xì)胞因子介導(dǎo)對(duì)抗細(xì)胞外多細(xì)胞寄生蟲的免疫反應(yīng)。其主要的效應(yīng)細(xì)胞因子為IL－4，其通過嗜酸性粒細(xì)胞募集、趨化和浸潤等過程在哮喘的發(fā)病過程中發(fā)揮主要作用。本研究結(jié)果顯示，MPP組病兒血清中IL－4水平顯著高于對(duì)照組，說明MP刺激并激活了Th2型細(xì)胞因子介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)；同時(shí)，MPP伴喘息組IL－4水平顯著高于MPP不伴喘息組，說明IL－4在病兒喘息發(fā)病過程中發(fā)揮了重要的作用。由于IFN－γ和IL－4在免疫反應(yīng)中呈現(xiàn)相互拮抗的作用，而IL－4在MPP組 病兒血清中的水平顯著升高，抑制了IFN－γ的表達(dá)，故引起Th2型細(xì)胞的主導(dǎo)反應(yīng)，破壞了Th1／Th2細(xì)胞比例的平衡。提示IL－4水平的升高可能是MPP發(fā)病過程中喘息甚至哮喘的發(fā)病機(jī)制之一。IL－6是多種淋巴細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等非淋巴細(xì)胞自發(fā)或在刺激條件下產(chǎn)生的，特別是可由TNF－α和IL－1誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生。IL－6參與體液免疫的調(diào)節(jié)，出現(xiàn)在炎癥反應(yīng)的急性期，特別是肺部炎癥反應(yīng)過程，其水平的高低可說明肺部感染程度［13］。本文研究結(jié)果顯示，MPP組病兒血清中IL－6水平顯著升高，但MPP伴喘息組與不伴喘息組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明IL－6在病兒喘息發(fā)病過程中為不起主要作用的因素。

本文研究結(jié)果顯示，MPP組病兒血清中IL－18、TNF－α、IL－4和IL－6水平均顯著高于對(duì)照組，表明Th1型和Th2型細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在MPP發(fā)展過程中起到了十分重要的作用，其中IL－18的升高可以促進(jìn)TNF－α產(chǎn)生，TNF－α再誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生IL－6；同時(shí)，MPP組病兒血清中IFN－γ水平有所升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是由于IL－4的升高抑制了IFN－γ的水平。

綜上所述，IL－6和IL－4的升高導(dǎo)致機(jī)體主導(dǎo)Th2型細(xì)胞反應(yīng)，最終使得Th1／Th2比例失衡，這可能是MPP發(fā)病過程中發(fā)生喘息甚至哮喘的發(fā)病機(jī)制之一。

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