HPLC法測定心速寧膠囊中鹽酸小檗堿含量

毛 鵬，姜建東

(陜西摩美得制藥有限公司，陜西 咸陽 712000)

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HPLC法測定心速寧膠囊中鹽酸小檗堿含量

毛 鵬，姜建東

(陜西摩美得制藥有限公司，陜西 咸陽 712000)

目的：建立HPLC法測定心速寧膠囊中鹽酸小檗堿含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙睛-水(48∶52)(1 000μL中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸鈉1.2g)為流動(dòng)相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算，應(yīng)不低于3 500。結(jié)果：鹽酸小檗堿在0.0563～0.4508μg進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積值呈良好線性關(guān)系,平均回收率為96.96%，RSD為0.58%(n=6)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、快速、專屬性強(qiáng)，可作為心速寧膠囊的質(zhì)量控制方法。

心速寧膠囊； 鹽酸小檗堿；HPLC法；含量測定

心速寧膠囊由黃連、半夏、 茯苓、枳實(shí)、 常山、蓮子心、苦參、青蒿、人參、麥冬、甘草11味中藥組方而成。具有清熱化痰、定心定悸的功效，主治痰熱憂心所致的心悸、胸悶、心煩、易驚、口干口苦、失眠多夢(mèng)、眩暈、脈結(jié)代等癥。適用于冠心病、病毒性心肌炎引起的輕、中度室性過早搏動(dòng)見上述癥狀者。本研究旨在建立HPLC法測定心速寧膠囊中鹽酸小檗堿含量的方法。

1 儀器與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

日立高效液相色譜儀；L-2130色譜泵；L-2450檢測器。

1.2 試驗(yàn)試劑

乙腈為色譜純，水為重蒸餾水；鹽酸、甲醇、磷酸二氫鉀和十二烷基磺酸鈉為分析純?cè)噭?。鹽酸小檗堿(110713-201212)購自中國食品藥品檢定研究院。實(shí)驗(yàn)用樣品：心速寧膠囊樣品(陜西摩美得制藥有限公司，批號(hào)131001、131002、131003)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：安捷倫Extend-C18柱，5μm填充料，4.6×250mm；流動(dòng)相：乙睛-水(48∶52)(1000μL中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸鈉1.2g)；檢測波長：270nm；流速1.0μL/min；進(jìn)樣量10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1μL含25μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品10粒內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)的混合溶液25μL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2μL，置10μL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性溶液制備 按照心速寧膠囊處方比例，除去黃連，按照供試品溶液的制備方法制備陰性溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按照以上儀器及方法，取本品供試品溶液(131001批)，對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取10μL注入色譜儀，照上述色譜條件測定。結(jié)果供試品溶液HPLC圖譜中鹽酸小檗堿色譜峰的保留時(shí)間為8.140min，鹽酸小檗堿色譜峰峰形好，陰性樣品色譜中，在鹽酸小檗堿色譜峰相對(duì)應(yīng)的位置上未見色譜峰，陰性對(duì)照無干擾。因此，照上述方法測定黃連中有效成分鹽酸小檗堿，方法可行。

2.4 供試品溶液制備方法考察

本品含量測定項(xiàng)下供試品溶液制備方法參照《中國藥典》2010年版一部黃連藥材項(xiàng)下含量測定中的供試品溶液制備方法，對(duì)超聲提取時(shí)間進(jìn)行考察，選擇最佳提取條件。具體制備方法：取本品131001批樣品的內(nèi)容物，研細(xì)，分別稱取6份，各取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)的混合溶液25μL，密塞，稱定重量，分別超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min、40min、50min，放冷，再稱定重量，分別用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2μL，置10μL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。試驗(yàn)結(jié)果見表1,結(jié)果表明，本品按上述制備方法制備供試品溶液，在超聲處理(功率250W，頻率40kHz)40min條件下，測得的含量最高，故本品供試品溶液制備時(shí)，選擇超聲處理時(shí)間為40min。

表1 不同超聲處理時(shí)間下含量測定結(jié)果

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取批號(hào)為131001的供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣測定，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，本品6次測定峰面積平均值為7139324.5，RSD為0.23%(n=6)，表明本品供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.2 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1μL 0.022542mg/1μL 2.5、5、7.5、10、12.5、15、20μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以鹽酸小檗堿色譜峰面積值為Y，進(jìn)樣量為X(μg)，進(jìn)行線性回歸，得線性方程：Y=2×107X+253 264，r=0.998 2。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在0.0563～0.4508μg進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 取本品(131001批樣品)同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為10μL，以峰面積計(jì)算 RSD%， RSD%=0.21(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)131001)6份，照上述供試品溶液制備方法制備，并按以上色譜條件測定，分別計(jì)算每份樣品中鹽酸小檗堿含量，并以含量計(jì)算RSD%，RSD%=0.16(n=6),結(jié)果表明本品按上述色譜條件試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.5.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品(批號(hào)131001)，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取6份(每份約0.1g)，分別精密稱定，置具塞三角瓶中，分別精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量(約相當(dāng)于樣品中鹽酸小檗堿含量)，加入上述樣品中，按供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜條件測試，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2，平均回收率為96.96%，RSD為0.58%。

2.5.6 含量測定 取本品10批樣品(批號(hào)分別為130101、130102、130301、130302、130401、130402、130601、131001、131002、131003)，用上述方法分別測定鹽酸小檗堿的含量，本品鹽酸小檗堿含量在9.10～11.47mg/粒之間，平均值為10.06mg/粒，故參照原標(biāo)準(zhǔn)含量限度，規(guī)定本品每粒含黃連以鹽酸小檗堿(C20H17NO4·HCl)計(jì)，不得少于8.0mg。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

心速寧膠囊由11味中藥組成，黃連是君藥，黃連中主要成分為鹽酸小檗堿，原標(biāo)準(zhǔn)方法采用薄層掃描法測定鹽酸小檗堿，精確度較差，本方法參照《中國藥典》2010年版一部黃連藥材項(xiàng)下含量測定供試品溶液制備方法，以乙睛-水(48∶52)(1 000μL中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸鈉1.2g)為流動(dòng)相，鹽酸小檗堿色譜峰的保留時(shí)間為8.140min，峰形好，分離效果好，可以作為心速寧膠囊的質(zhì)量控制方法。

[1] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社：2010.

[2] 楊帝順.用RP-HPLC法測定愈腸顆粒中小檗堿和異白茅苷的含量[J].藥學(xué)服務(wù)與研究，2014，14(6)：447-449.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2015-06-26

毛鵬(1977-)，男，陜西摩美得制藥有限公司工程師，研究方向?yàn)樾滤庨_發(fā)。

R284.2

A

1673-2197(2015)23-0037-02

10.11954/ytctyy.201523014