正交法優(yōu)選苦參切制工藝研究

李月俠，吳 飛，金傳山*

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州 236800)

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正交法優(yōu)選苦參切制工藝研究

李月俠1，吳 飛2，金傳山1*

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州 236800)

目的：優(yōu)選苦參切制工藝，為中藥飲片企業(yè)提供切實可行的指導(dǎo)方案。方法：以浸泡時間、悶潤時間、切片厚度和干燥溫度作為考察因素，苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿及飲片外觀為指標(biāo)，通過正交試驗優(yōu)選苦參的最佳切制工藝。結(jié)果：優(yōu)選的苦參最佳切制工藝為浸泡30min，悶潤至透，切制厚度3mm，80℃干燥。結(jié)論：該法可作為苦參切制的可行方法。

苦參；切制工藝；正交試驗

苦參為豆科槐屬植物苦參(SophoraFlavescensAit.)的干燥根，性苦、味寒，具清熱燥濕、殺蟲、利尿等功效[1]?，F(xiàn)代藥理研究[2-3]發(fā)現(xiàn)：苦參有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肝纖維化、抗心律失常、抗惡性腫瘤、免疫抑制等作用。隨著苦參在醫(yī)藥行業(yè)、農(nóng)業(yè)殺蟲劑、護(hù)膚品等方面的廣泛應(yīng)用，苦參飲片需求量日益增加。但由于苦參切制工藝研究較少，各家藥企往往憑經(jīng)驗操作，導(dǎo)致苦參飲片的內(nèi)外質(zhì)量參差不齊。因此，本研究采用正交試驗優(yōu)選苦參的切制工藝，為苦參飲片生產(chǎn)提供切實可行的指導(dǎo)方案。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀(G1316A柱溫箱、G1329B自動機(jī)進(jìn)樣器、G1314C可變波長檢測器)、Thermo NH2柱，SK250HP型超聲清洗儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，AUW220D型十萬分之一電子天平(日本SHIMADZU公司)；HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋(金華市晶玻實驗儀器廠)。

1.2 試劑

三氯甲烷為分析純(天津大茂化學(xué)試劑廠)；水為純凈水(杭州娃哈哈飲料科技有限公司)；乙腈為色譜純(天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)；無水乙醇為色譜純(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)；磷酸為色譜純(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)；對照品苦參堿(中國食品藥品檢定研究院，批號110805-200508)；槐定堿(中國食品藥品檢定研究院，批號110784-200804)；氧化苦參堿(中國食品藥品檢定研究院，批號110780-201007)?？鄥⑺幉挠砂不諈f(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司提供，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)金傳山教授鑒定為豆科植物苦參(SophoraFlavescensAit.)的干燥根。

2 苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo-NH2(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：乙腈-無水乙醇-3%磷酸(80∶10∶10)，流速0.8mL/min,檢測波長210nm,柱溫40℃，進(jìn)樣量10μL。

圖1 苦參藥材HPLC色譜

2. 2 對照品溶液制備

分別取苦參堿、槐定堿和氧化苦參堿(以92.3%計算)對照品適量，精密稱定，加乙腈-無水乙醇(80∶20)溶解，分別制備含苦參堿0.457 0mg、槐定堿0.563 0mg、氧化苦參堿2.091 9mg的1mL溶液，作為對照品母液。分別精密量取苦參堿對照品母液0.05mL、槐定堿對照品母液0.15mL和氧化苦參堿對照品母液0.5mL移至10mL容量瓶，加乙腈-無水乙醇(80∶20)定容，得混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備[1]

取本品粉末(過三號篩)約0.3g，精密稱定，置于具塞錐形瓶，加濃氨試液0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min(250W，53kHz)，放冷，再稱定重量，加入三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，加入在中性氧化鋁柱(100～200目，5g，內(nèi)徑1cm)，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3)混合溶液各20mL洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶，加無水乙醇至刻度，搖勻，即得。

圖2 混合對照品HPLC色譜

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系 精密吸取“2.2”項已配制的混合對照品溶液5.0、15.0、25.0、35.0、45.0μL注入液相色譜儀，按“2.1”項色譜條件測定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程分別為苦參堿：Y=45.890X-25.030(r=0.999 9)；槐定堿：Y=138.54X-76.600(r=0.999 8)；氧化苦參堿：Y=1 893.5X-922.67(r=0.999 9)。結(jié)果表明苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿分別在0.011 4～0.102 6μg、0.042 2～0.379 8μg、0.523～4.707μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取“2.2”項已配制混合對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積。結(jié)果表明，苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿峰面積的RSD分別為0.69%、0.96%、0.14%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗 取苦參藥材粉末(過三號篩)6份，按“2.3”項供試品溶液制備方法同時制備供試品溶液6份，測定其含量，結(jié)果顯示苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿峰面積的RSD分別為1.46%、1.70%、1.36%，表明本方法重復(fù)性較好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 取同一苦參藥材供試品溶液，分別于0h、6h、12h、18h、24h進(jìn)樣測定，結(jié)果顯示苦參堿、槐定堿、氧化苦參堿峰面積的RSD分別為1.71%、1.82%、1.22%，表明供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密吸取“2.2”項已配制的苦參堿對照品母液0.15mL、槐定堿對照品母液0.5mL、氧化苦參堿對照品母液2.0mL置于具塞錐形瓶，揮干溶劑，共6份。分別取已知含量的苦參藥材粉末約0.15g，精密稱定，置上述對照品溶液中，按“2.3”項方法制備供試品溶液，同樣制備6份加樣回收溶液。精密吸取加樣回收溶液10μL，注入液相色譜儀，測定。計算回收率，結(jié)果見表1。

3 苦參切制工藝優(yōu)選

3.1 正交設(shè)計

在預(yù)試驗基礎(chǔ)上，初步確定以苦參堿、槐定堿和氧化苦參堿為主要指標(biāo)，采用正交試驗考察苦參質(zhì)量的主要影響因素浸泡時間、切片厚度、干燥溫度，選用L9(34)優(yōu)選實驗，水平因素見表2。

表1 回收率測定結(jié)果

表2 水平因素

3.2 苦參飲片切制

取直徑1～2cm檔苦參干燥根適量，除去小支根和殘留根頭，洗凈，按上述設(shè)計水平因素考察涼水浸泡(用水量以剛好沒住藥材為宜)，悶潤至透，切厚片，干燥。

3.3 含量測定

3.3.1 苦參原藥材含量測定 精密吸取“2.2”項已配制的混合對照品溶液及苦參藥材制備的供試品溶液各10μL，按“2.1”項色譜條件測定苦參堿、槐定堿和氧化苦參堿的含量。結(jié)果見表3。

表3 苦參藥材含量測定 (%)

3.3.2 苦參飲片含量測定 精密吸取“2.2”項已配制的混合對照品溶液及按“3.1”項制備的的苦參飲片供試品溶液9份各10μL，按“2.1”項色譜條件測定苦參堿、槐定堿和氧化苦參堿的含量。直觀分析結(jié)果為：苦參切制影響因素A>C>B，見表4。

表4 苦參切制工藝正交試驗結(jié)果

3.4 方差分析

直觀分析，A、C因素對苦參生物堿含量均有顯著影響，B因素?zé)o顯著影響。

表5 苦參切制工藝方差分析

3.5 試驗結(jié)果分析

由表4、表5試驗結(jié)果可見，苦參切制主要影響因素為浸泡時間和干燥溫度，結(jié)合實際生產(chǎn)情況，確定苦參最佳切制工藝為A1B2C3，即浸泡0.5h，悶潤至透，切制3mm厚片，80℃干燥。

3.6 工藝驗證

按上述優(yōu)化工藝最佳條件，取三批苦參干燥根(直徑1～2cm檔)制備苦參飲片，對最佳工藝進(jìn)行驗證，結(jié)果表明確立的最佳切制工藝穩(wěn)定、適用。見表6。

表6 工藝驗證結(jié)果 (%)

4 討論

苦參所含生物堿種類較多，文獻(xiàn)研究[4-9]表明苦參堿、槐定堿和氧化苦參堿在抗病毒、抗炎、免疫抑制、抗心律失常、抗腫瘤等方面有著較為顯著的作用，因此苦參飲片內(nèi)在質(zhì)量控制選擇苦參堿、槐定堿和氧化苦參堿作為指標(biāo)。資料[10]表明，苦參堿和氧化苦參堿存在相互轉(zhuǎn)化，《中國藥典》2010版一部苦參含量項方法可測定苦參堿和氧化苦參堿的總量，本試驗以苦參堿和氧化苦參堿的總量為指標(biāo)。

通過正交試驗法，確立苦參的最佳切制工藝為：浸泡30min，悶潤至軟，切制3mm厚片，80℃干燥，對于規(guī)范苦參的切制工藝、指導(dǎo)飲片企業(yè)生產(chǎn)及保證苦參飲片質(zhì)量具有一定意義。

苦參切制工藝軟化環(huán)節(jié)受眾多因素影響，如原藥材大小、含水量和浸泡用水溫度、體積及天氣溫度、濕度等影響，浸泡和悶潤時間參數(shù)不能一概而論，且由于苦參干燥根質(zhì)地堅硬，所需軟化時間較長，嚴(yán)重制約了苦參的大規(guī)模生產(chǎn)；另一方面，隨著苦參的社會需求量日益增加，苦參資源逐步改為家種。因此，建立苦參的趁鮮切制工藝，以減少軟化環(huán)節(jié)帶來的困擾尤為重要。

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-09-18

李月俠(1985-),女，安徽中醫(yī)藥大學(xué)講師，研究方向為中藥炮制與質(zhì)量研究。E-mail：lyxttlkl@126.com

金傳山，男，安徽中醫(yī)藥大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向為中藥炮制與質(zhì)量研究。E-mail：7982026@qq.com

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1673-2197(2015)02-0034-03

10.11954/ytctyy.201502013