金櫻子顆粒劑與金櫻子飲片對腎炎大鼠臨床藥效比較

呂孝佳，王建芬，陳 敏，肖 敏，湯 晴，陸 葉

(長沙醫(yī)學院，湖南 長沙 410219)

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金櫻子顆粒劑與金櫻子飲片對腎炎大鼠臨床藥效比較

呂孝佳，王建芬，陳 敏*，肖 敏，湯 晴，陸 葉

(長沙醫(yī)學院，湖南 長沙 410219)

目的：比較金櫻子顆粒劑與金櫻子飲片對腎炎模型大鼠的臨床療效。方法：制備金櫻子醇提濃縮物顆粒劑，建立實驗性腎炎大鼠模型，隨機將其分為正常組、模型組、飲片組和顆粒組，分別給予相應藥物。采用生化分析儀檢測各組腎炎大鼠尿蛋白、尿紅細胞、血清白蛋白、尿素氮、肌酐含量，并對其腎組織進行病理學顯微觀察。結(jié)果：金櫻子醇提顆粒劑及飲片均可降低IgA腎炎大鼠尿蛋白、尿紅細胞含量，并能減少因腎炎而升高的血清尿素氮及肌酐水平，減輕腎小球系膜增生，減少受損組織。結(jié)論：與金櫻子飲片相比，金櫻子醇提顆粒劑更能改善腎炎大鼠腎功能，減輕腎損傷。

金櫻子；腎炎；顆粒劑

金櫻子(RosalaevigataMickx)為薔薇科植物金櫻子的干燥成熟果實，性味酸、甘、平，歸腎、膀胱、大腸經(jīng)，具有固精縮尿、澀腸止瀉的功效[1]。近年來結(jié)合中醫(yī)藥現(xiàn)代化技術(shù)，許多學者對金櫻子對腎病的療效展開了大量研究[2-4]。本實驗在前人研究的基礎(chǔ)上進一步比較金櫻子顆粒劑與飲片在降低尿紅細胞、改善腎臟系膜組織增生方面的療效差異。利用腎炎大鼠實驗模型，觀察其服藥前后相關(guān)腎功能指標的變化情況，為金櫻子顆粒劑的臨床應用提供科學依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 動物

SD大鼠，無特定病原體級，雄性，50只，18～20周齡，個體體重差異小于平均體重的20%，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK(湘)2011-0003，含購入日飼養(yǎng)3天，去除外觀、一般狀態(tài)出現(xiàn)異常等可能對試驗造成影響的大鼠。

1.2 藥品

金櫻子飲片購自安國市神禾中藥材飲片有限責任公司，經(jīng)長沙醫(yī)學院生藥教研室彭電講師鑒定為金櫻子。

金櫻子顆粒劑制備方法：將70g金櫻子飲片與700mL 70%乙醇回流3h后濃縮成相對密度約為0.96的稠膏，加入稠膏-乳糖-可溶性淀粉(5∶3∶12)及適量10%淀粉漿，混勻過篩，干燥整粒后即得，每克顆粒相當于原藥材0.625g。制得顆粒符合《中國藥典》2010版附錄有關(guān)顆粒劑項下的檢查要求。

1.3 儀器與試劑

JA2003電子天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司)，KD-202-VI冷凍切片機(北京佳源興業(yè)科技有限公司)，生化自動檢測儀，光學顯微鏡。

牛血清白蛋白購自國藥集團化學試劑有限公司，批號：20121113；脂多糖(LPS)購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責任公司，原編號：L2880 LOT：032M4082V；蓖麻油購自天津市富宇精細化工有限公司，批號：20130317；四氯化碳購自天津市富宇精細化工有限公司，批號：20090516。

2 方法

2.1 腎炎大鼠模型建立

根據(jù)文獻[6-8]報道，將SD大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，除去外觀和狀態(tài)異常的大鼠，將剩余大鼠隨機分為正常組、模型組、飲片組、顆粒組，每組各8只。除正常組大鼠外，其余各組隔日灌服陽離子牛血清白蛋白(BSA)，劑量為400mg/kg，從第6周隔日尾靜脈注射1%BSA，持續(xù)3周。第9周起，皮下注射蓖麻油1.0mL+CCl40.2mL，每周1次，持續(xù)4周，并聯(lián)合運用脂多糖(LPS)，分別于第9、11周尾靜脈注射LPS 0.1mg，建立腎炎模型。

2.2 腎炎大鼠給藥方案

金櫻子飲片組按照10g/kg的劑量[7]將藥物添加在飼料里，金櫻子顆粒劑組按照16g/kg的劑量(相當于含金櫻子藥材量計)將藥物添加在飼料里，模型組和正常組大鼠則給予等量飼料，持續(xù)喂養(yǎng)4周(每周按稱重后調(diào)整給藥劑量)。給藥期間每日觀察各組大鼠體征、進食、行為及陰部尿染等變化。

2.3 統(tǒng)計學分析

3 結(jié)果

3.1 造模過程尿蛋白和尿紅細胞測定

造模期間，于第7、12周收集各組大鼠24h尿液，分別取10mL和1mL測定尿蛋白和尿中紅細胞變化。連續(xù)3周尾靜脈注射BSA后，除正常組外，其他組大鼠尿蛋白均有所升高，但組間差異不明顯。進一步連續(xù)皮下注射蓖麻油和CCl4，并聯(lián)合運用LPS后，除正常組外，各組大鼠尿蛋白水平均顯著增加(P<0.05)，并出現(xiàn)中度血尿。見表1。

組別例數(shù)(n)尿蛋白(g·L-1)造模前第7周第12周尿紅細胞造模前第7周第12周正常組82.46±0.514.26±0.436.25±0.72---模型組82.21±0.266.36±1.4637.82±6.35*--++飲片組83.2±0.357.21±1.4635.67±7.21*--++顆粒組82.1±0.286.89±2.1341.23±8.35*--++

注：與正常組比較，*P<0.05。血尿強度用半定量評分：陰性(-)；陽性：輕度(+)，中度(++)，(重度+++)。

3.2 給藥期間尿蛋白和尿紅細胞測定

根據(jù)實驗給藥方案，分別于給藥后第2周、第4周收集各組大鼠24h尿液，測定其尿蛋白和尿中紅細胞變化。結(jié)果表明，飲片組和顆粒組大鼠尿蛋白和尿紅細胞含量均明顯下降(P<0.05)，模型組大鼠尿蛋白和尿紅細胞含量呈明顯上升趨勢，與給藥前比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。給藥4周后，飲片組和顆粒組大鼠血尿強度均降為輕度，且顆粒組大鼠尿蛋白下降程度更明顯，見表2。

組別例數(shù)(n)尿蛋白(g·L-1)給藥第2周給藥第4周尿紅細胞給藥第2周給藥第4周正常組87.06±0.866.38±0.54--模型組842.28±5.85*45.28±5.26*+++++飲片組832.67±6.21*26.33±4.38*+++顆粒組831.75±7.18*25.46±5.45*+++

注：與正常組比較，*P<0.05。血尿強度用半定量評分：陰性(-)；陽性：輕度(+)，中度(++)，(重度+++)。

3.3 服藥后腎炎大鼠血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量比較

連續(xù)用藥4周后，用乙醚麻醉實驗大鼠，腹主動脈取血，凝固后立即離心分離血清，采用生化自動檢測儀測定各組大鼠血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量。結(jié)果表明，飲片組和顆粒組大鼠血清白蛋白含量均有所升高，尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量均明顯低于模型組 (P<0.05)；顆粒組大鼠血清肌酐(Cr)含量趨近于正常組，由此可見金櫻子飲片和金櫻子顆粒劑均可改善腎炎大鼠血清生化指標，但就降低血清尿素氮和肌酐含量而言，顆粒組略顯優(yōu)勢，見表3。

組別例數(shù)(n)Alb(g·L-1)BUN(mmol·L-1)Cr(μmol·L-1)正常組839.21±1.394.42±1.8341.00±2.11模型組834.85±1.545.49±1.22﹡60.00±2.64*飲片組843.59±1.454.38±1.33⊿55.00±3.13⊿顆粒組842.21±1.354.26±1.35◇42.00±3.15◇

注：正常組與模型組比較，*P<0.05；模型組與飲片組比較，⊿P<0.05；模型組與劑型組比較，◇P<0.05。

3.4 大鼠腎組織病理變化

服藥4周后，各組大鼠取出腎組織，取10%福爾馬林固定液固定、30%蔗糖脫水制成10μm厚的冰凍切片，以蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察各組大鼠腎小球變化情況，見圖1。腎炎大鼠腎臟病變主要表現(xiàn)為彌漫型中重度系膜組織增生(系膜區(qū)增寬)、基質(zhì)增多，腎小管上皮細胞腫脹。HE染色光鏡下顯示，與模型組相比，飲片組和顆粒組大鼠系膜組織增生程度較輕，且顆粒組增生程度較飲片組輕，說明金櫻子顆粒對腎炎有更好的治療效果。

圖1 各組大鼠腎組織病理顯微觀察結(jié)果 (HE,×400)

4 討論

本實驗結(jié)果表明，金櫻子顆粒劑與飲片在含有相同含量有效成分的條件下均能減輕腎炎模型大鼠蛋白尿和血尿情況，減緩腎臟腎小球系膜增生，減少受損組織，降低蛋白尿和尿紅細胞含量，且金櫻子顆粒劑效果優(yōu)于飲片?？紤]到金櫻子顆粒劑是在金櫻子水醇提取物[9]的基礎(chǔ)上經(jīng)過劑型開發(fā)而得到的制劑，因此未將更多的腎炎病理檢測指標列入考察內(nèi)容，其劑型優(yōu)化仍需進一步深入研究。

[1] 李時珍.本草綱目[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1978:243.

[2] 張庭延,聶劉旺,劉愛民,等.金櫻子多糖的免疫活性研究[J].中國實驗方劑學雜志,2005,11(4):55.

[3] 陳敬民,李友娣.金櫻子醇提物對血清病型腎炎大鼠模型的藥理作用[J].時珍國醫(yī)國藥,2006,17(8):1404.

[4] 張庭延,潘繼紅,聶劉旺,等.金櫻子多糖的抑菌和抗炎作用研究[J].生物學雜志,2005,22(2):41.

[5] 唐紅梅,常麗新,丁存寶,等.回流法提取山楂葉懸鉤子葉片中黃酮類化合物的工藝研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2011,39(32):19772-19774.

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(責任編輯：尹晨茹)

Comparison Between Fructus Rosae Laevigatae from Fructus Rosae Laevigatae Granules and Slices On the Efficacy of Nephropathy

Lv Xiaojia,Wang Jianfen,Chen Min*, Xiao Min,Tang Qing, Lu Ye

(Changsha Medical School, Changsha 410219,China)

Objective:To compare pharmacological equivalent test on nephropathy in rats Jinyingzi alcohol extract granules and herbal.Methods:To preparate Jinyingzi alcohol extract granules, nephropathy model was established, rats were devided into normal group，model group , herbal group and granules group. The levels of Urinary protein，Red blood cells in urine,serum albumin,creatinine and urinary nitrogen were determined by Automatic biochemical analyzer. Renal pathology was observated by optical microscoper.Results:The levels of Urinary protein and Red blood cells in urine of nephropathy in rats were decreased,and the number of increased serum urea nitrogen and creatinine of nephropathy in rats were reduced both Jinyingzi alcohol extract granules and herbal,Conclusion:Fructus rosae laevigatae fructus rosae laevigatae alcohol granules than yinpian treating nephritis rats have better effect.

RosalaevigataMichx;Nephropathy;Granules

2014-09-23

湖南省大學生研究性學習和創(chuàng)新性實驗計劃項目(湘教通[2012]402號)

呂孝佳,男，長沙醫(yī)學院在讀生，研究方向為藥物制劑。

陳敏(1994-)，女，長沙醫(yī)學院在讀生，研究方向為藥學。E-mail:lightysun@163.com

R285.5

A

1673-2197(2015)02-0011-02

10.11954/ytctyy.201502005