益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑抑制左旋多巴神經(jīng)毒性作用實(shí)驗(yàn)研究

朱紅紅

(鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院 藥劑科，江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

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益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑抑制左旋多巴神經(jīng)毒性作用實(shí)驗(yàn)研究

朱紅紅

(鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院 藥劑科，江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

目的：探討益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑在抑制左旋多巴神經(jīng)毒性中的作用。方法：將40只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各20只，對(duì)照組大鼠采用常規(guī)方法治療，實(shí)驗(yàn)組大鼠采用益精調(diào)氣中藥復(fù)方治療，采用細(xì)胞凋亡、行為學(xué)、Niss染色以及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)治療10天、12天、14天時(shí)大鼠黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)、旋轉(zhuǎn)行為及bFGF蛋白水平。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組大鼠12天與14天灌胃時(shí)間旋轉(zhuǎn)行為均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)完畢后將大鼠處死，大鼠14天時(shí)黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)、bFGF蛋白表達(dá)顯著多于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑治療帕金森大鼠效果理想，能夠減輕左旋多巴神經(jīng)毒性作用。

帕金森；左旋多巴神經(jīng)毒性；益精調(diào)氣；中藥；復(fù)方制劑

帕金森是臨床常見(jiàn)疾病，發(fā)病率較高，隨著人們生活節(jié)奏的加快其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前臨床上對(duì)于帕金森尚缺乏理想的治療方法，常規(guī)治療方法雖然能夠改善患者癥狀，緩解患者病情，但部分患者用藥后容易產(chǎn)生神經(jīng)毒性，影響預(yù)后[1]。近年來(lái)，益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑在帕金森疾病中廣泛使用，并取得了階段性進(jìn)展。但是，臨床上對(duì)于益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑是否產(chǎn)生左旋多巴神經(jīng)毒性尚不完全明確[2]。本研究旨在探討益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑抑制大鼠左旋多巴神經(jīng)毒性作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇健康Wistar雄性3月齡大鼠(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重180～200g，采用強(qiáng)迫游泳測(cè)試對(duì)大鼠行為進(jìn)行篩選，取合格大鼠，進(jìn)行PD建模。將40只模型大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組20只。

1.2 方法

入選大鼠采用改良的Thomas方法確立右側(cè)黑質(zhì)致密部，確定坐標(biāo)為：前囟后4.8mm，中線右側(cè)2.0mm，硬膜下7.5mm；中腦腹側(cè)被蓋區(qū)域坐標(biāo)為前囟后4.4mm，中線右側(cè)1.2mm，硬膜下7.5mm，在兩坐標(biāo)點(diǎn)交叉位置注射0.3% 的6-OHDA 3.3μL。大鼠腹腔注射去水嗎啡，誘發(fā)大鼠發(fā)生旋轉(zhuǎn)行為，建立PD模型。對(duì)照組大鼠采用常規(guī)方法治療：大鼠造模成功后每天采用GBE混懸液進(jìn)行灌胃。實(shí)驗(yàn)組根據(jù)大鼠情況每天給予生理鹽水以及益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑進(jìn)行灌胃治療[3]。

1.3 觀察指標(biāo)

①在大鼠連續(xù)灌胃第10、12、14天對(duì)大鼠行為進(jìn)行觀察，灌胃14天后在大鼠腹腔注射0.5mg/kg APO，連續(xù)觀察2h，并采用4%多聚甲醛灌注液透心灌注，取出大鼠中腦，并采用石蠟包裹；②細(xì)胞凋亡檢測(cè)。切口石蠟組織，厚度控制在5pm，根據(jù)Seaton法對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)；③黑質(zhì)細(xì)胞Nissl染色。將石蠟包塊切片，厚度控制在5μm，然后采用濃度為5%的天竹牡丹水溶液進(jìn)行1～2min染色，然后進(jìn)行洗滌，采用95%酒精分色約2min，并采用顯微鏡觀察。④堿性成纖維生長(zhǎng)因子：采用免疫組化法檢測(cè)大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠灌胃時(shí)間旋轉(zhuǎn)行為比較

兩組大鼠治療10天時(shí)灌胃時(shí)間旋轉(zhuǎn)行為比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)組治療12天、14天灌胃時(shí)間旋轉(zhuǎn)行為均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 兩組大鼠不同灌胃時(shí)間旋轉(zhuǎn)行為結(jié)果比較 ±s，r/30min)

2.2 兩組大鼠灌胃14天時(shí)黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)、bFGF蛋白表達(dá)比較

大鼠14天時(shí)天黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)為(379±26)個(gè)/mm2，bFGF蛋白表達(dá)為(0.75±0.17)%，兩項(xiàng)數(shù)據(jù)均優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 兩組大鼠灌胃14天時(shí)黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)、bFGF蛋白

表達(dá)比較

組別大鼠數(shù)(只)黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)(個(gè)/mm2)bFGF蛋白表達(dá)(%)實(shí)驗(yàn)組20379±260.75±0.17對(duì)照組20368±300.11±0.01t26.0419.77P<0.05<0.05

3 討論

帕金森患者黑質(zhì)紋狀體細(xì)胞很容易受到攻擊，造成PC12細(xì)胞凋亡和壞死，這個(gè)過(guò)程中細(xì)胞核中線粒體雙鏈DNA是自由基攻擊的主要對(duì)象。在治療大鼠帕金森疾病時(shí)給予益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑胃灌注，藥物能夠有效清除自由基，拮抗血小板活化因子，同時(shí)，能夠通過(guò)血小板活化因子的膜效應(yīng)影響DA能系統(tǒng)功能，能夠有效抑制DA代謝作用[5]。

實(shí)驗(yàn)中，將大鼠旋轉(zhuǎn)數(shù)作為反映黑質(zhì)DA能神經(jīng)元受損程度的重要指標(biāo)，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組治療12天后黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)顯著多于對(duì)照組，表明益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑對(duì)PD大鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用，有助于抑制帕金森大鼠左旋多巴治療時(shí)的神經(jīng)毒性。本研究中實(shí)驗(yàn)組12天、14天灌胃時(shí)間旋轉(zhuǎn)行為顯著高于對(duì)照組，結(jié)果也與相關(guān)學(xué)者研究成果類似。bFGF蛋白對(duì)機(jī)體神經(jīng)功能具有一定的保護(hù)作用，該蛋白能夠在多種原因下表達(dá)[6]。本次研究中，實(shí)驗(yàn)完畢后將大鼠處死，14天時(shí)大鼠黑質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)、bFGF蛋白表達(dá)顯著多于對(duì)照組，也表明益精調(diào)氣中藥復(fù)方能夠誘導(dǎo)bFGF蛋白表達(dá)，說(shuō)明益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑能夠抑制神經(jīng)毒性作用。

綜上所述，益精調(diào)氣中藥復(fù)方制劑治療帕金森大鼠效果理想，能夠減輕左旋多巴神經(jīng)毒性作用，可作為帕金森病的治療藥物。

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[2] 劉振國(guó).醫(yī)學(xué)影像學(xué)在帕金森病臨床診斷中的應(yīng)用[J].中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志,2010,17(3):163-166.

[3] 錫金,張煜,陳生弟.帕金森病發(fā)病機(jī)制治療研究十年進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志,2010,11(1):36-42.

[4] 譚林敏,王立.成都地區(qū)帕金森氏病的現(xiàn)況調(diào)齊分析[J].廣西醫(yī)學(xué),2010,10(22):1169-1170.

[5] DEREK A， DRECHSEL， MANISHA PATE I. Role of reactive oxygen species in the neurotoxicity of environmental agents implicated in parkinson's disease[J].Free Radic Biol Med， 2008， 44(11):1873-1886.

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2015-04-22

朱紅紅(1978-)，女，江蘇省鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院主管藥師,研究方向?yàn)獒t(yī)院藥學(xué)。

R285.5

A

1673-2197(2015)17-0013-02

10.11954/ytctyy.201517007