消幻湯合并利培酮對精神分裂癥模型小鼠曠場行為的影響

張燕 楊春娟 劉飛虎 肖凡 張曼 權(quán)偉 王慧

1.西安市精神衛(wèi)生中心，陜西西安710061；2.西安醫(yī)學(xué)：，陜西西安710068

消幻湯合并利培酮對精神分裂癥模型小鼠曠場行為的影響

張燕1*▲楊春娟2*劉飛虎1肖凡1張曼1權(quán)偉1王慧1

1.西安市精神衛(wèi)生中心，陜西西安710061；2.西安醫(yī)學(xué)：，陜西西安710068

目的觀察消幻湯合并利培酮治療后的精神分裂癥小鼠在曠場自主活動和探究行為的變化。方法昆明小鼠60只隨機(jī)分為五組，空白組、模型組、利培酮組、消幻湯組及消幻湯合并利培酮組（合并組），每組12只。腹腔注射MK-801每日0.36 mg/kg，連用2周，制作精神分裂癥小鼠模型。造模成功后，采用灌胃方式，分別給予利培酮組、消幻湯組及合并組相應(yīng)藥物；模型組和空白組給予生理鹽水，連續(xù)給藥4周。采用曠場觀察五組的自主活動和探究行為的變化。結(jié)果利培酮組、消幻湯組和合并組與模型組相比，活動總路程、外周區(qū)和中央?yún)^(qū)活動路程以及3個時間段的活動路程均不同程度減少（P＜0.05）；利培酮組與消幻湯組相比，僅外周區(qū)活動路程減少（P＜0.05）；合并組與消幻湯組相比，活動總路程、外周區(qū)活動路程和T1時間活動路程明顯減少（P＜0.01或P＜0.05）；合并組與利培酮組相比，各活動路程測定值均有減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論消幻湯合并利培酮對精神分裂癥模型小鼠自主活動和探究行為的增多具有明顯的抑制作用。在相同時間內(nèi)消幻湯合并利培酮使用控制精神分裂癥模型小鼠的紊亂行為優(yōu)于單獨使用消幻湯。

曠場實驗；精神分裂癥；消幻湯；利培酮

曠場實驗（open field test，OFT）是評價嚙齒類實驗動物狀態(tài)焦慮行為的經(jīng)典方法，廣泛用于精神神經(jīng)藥理學(xué)的基礎(chǔ)研究[1-2]。OFT是利用動物對新奇環(huán)境的探究習(xí)性和空曠場地危險恐懼的矛盾沖突原理，反映動物的自主行為（locomotor activity）和探究行為（exploratory behavior）。消幻湯（又名清幻靈）是西安市精神衛(wèi)生中心的經(jīng)驗方，主要用于肝膽濕熱引起的幻聽、情緒不穩(wěn)、脈玄舌尖紅、苔薄黃的患者，臨床應(yīng)用已四十余年。經(jīng)過文獻(xiàn)查閱和前期研究表明，消幻湯中主要組成成分的龍膽草、磁石、酸棗仁、柴胡等對中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有明顯的調(diào)節(jié)作用[3-5]。前期研究顯示，消幻湯可以保護(hù)人神經(jīng)瘤細(xì)胞的正常增殖和形態(tài)[6]，同時對于谷氨酸功能低下的小鼠模型與利培酮合用時有很好的保護(hù)作用[7]。本實驗探討消幻湯合并利培酮使用對于MK-801誘導(dǎo)的精神分裂癥模型小鼠自主活動及探究行為的影響，為中西藥物合并使用治療精神分裂癥的理論研究提供詳實資料。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

60只健康昆明種小鼠雌雄各半，體重為（20±2）g，清潔級，購自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)：實驗動物中心（動物質(zhì)量合格證號：醫(yī)動字第08-005號）。標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類飼料飼養(yǎng)且自由飲食，維持室溫為（22±2）℃。動物適應(yīng)3 d后開始實驗。

1.2 藥物與試劑

MK-801（購自美國Sigma公司）溶于生理鹽水；利培酮（購自西安市楊森制藥有限公司，批號H2001 0309）研成粉末以生理鹽水溶解。消幻湯方劑藥材（龍膽草∶磁石∶柴胡∶鉤丁∶生地∶丹參∶炒棗仁重量比為9∶24∶5∶6∶9∶6∶9，均購自陜西省老百姓大藥房），將磁石加入水中煮沸10 min，后加其余藥物煮沸40 min，過濾取汁，二煎30 min，兩次濾液合并濃縮成每毫升含生藥0.799 g的藥液，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要儀器

曠場實驗視頻分析系統(tǒng)采用Smart 3軟件，購自深圳市瑞沃德生命科技有限公司。

1.4 分組與造模

昆明種小鼠60只隨機(jī)分為五組，每組12只，適應(yīng)3 d，其中一組作為空白組腹腔注射給予生理鹽水，其余四組連續(xù)腹腔注射MK-801（0.36 mg/kg）2周造模。

1.5 給藥

造模后給藥，隨機(jī)分為模型組、利培酮組、消幻湯組、利培酮及消幻湯合并使用組（合并組），其中空白組、模型組灌胃給予生理鹽水，利培酮組、消幻湯組、合并組分別給予利培酮1.21 mg/kg；消幻湯0.799 g/mL；利培酮1.21 mg/kg和消幻湯0.799 g/mL，均以體重10 mL/kg給予相對應(yīng)的藥物。

1.6 曠場實驗

曠場實驗實驗裝置由4個40 cm×40 cm×40 cm無頂黑色觀察箱（自制）、攝像機(jī)（SONY）和Smart 3自主活動視頻分析系統(tǒng)組成，整個實驗在自然光源室內(nèi)進(jìn)行。實驗前灌胃給藥1 h，將4只小鼠放入觀察箱內(nèi)，視頻攝錄小鼠活動30 min，自動記錄小鼠活動軌跡和活動路程。以小鼠放入觀察箱內(nèi)的前10 min（為新異環(huán)境）的活動路程代表小鼠的探究行為，以后20 min的活動路程代表小鼠的自主活動。實驗結(jié)果從不同區(qū)域和不同時間段分析小鼠的自主活動和探究行為。以小鼠在外周區(qū)域活動為自主行為，以中央?yún)^(qū)域活動為探究行為。以小鼠在前10 min（T1）為探究行為，以中間10 min（T2）和后10 min（T3）活動為自主行為。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠不同區(qū)域的自主活動和探究行為

6周實驗后，各組小鼠活動路程軌跡如圖1所示：外框以內(nèi)內(nèi)框以外表示外周活動區(qū)域，內(nèi)框表示中心活動區(qū)域。模型組小鼠軌跡較多且雜亂無章，消幻湯組軌跡接近空白組，利培酮組軌跡明顯較空白組、模型組減少，合并組軌跡最少。

從不同區(qū)域分析小鼠的自主活動及探究行為，結(jié)果顯示，模型組與空白組和消幻湯組比較，活動總路程明顯增加（P＜0.05），外周區(qū)和中心區(qū)活動路程均有不同程度增加（P＜0.05）；給藥各組與空白組比較，總活動路程及不同區(qū)活動路程均差別不明顯（P＞0.05）；利培酮組、消幻湯組和合并組與模型組相比，活動總路程明顯減少（P＜0.01），外周區(qū)和中心區(qū)活動路程有明顯不同程度減少（P＜0.05）；與消幻湯組相比，利培酮組的活動總路程有所減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），利培酮組在外周區(qū)的活動路程減少（P＜0.05）；與消幻湯組相比，合并組的活動總路程明顯減少（P＜0.05），主要表現(xiàn)為在外周區(qū)活動路程明顯減少（P＜0.01）。見表1。

圖1 不同區(qū)域小鼠的自主活動探究行為的軌跡

2.2 各組小鼠不同時間段的自主活動和探究行為

從不同時間段分析小鼠的自主活動及探究行為，結(jié)果顯示，與模型組比較，空白組T1、T2、T3活動路程明顯減少（P＜0.01）；給藥各組與空白對照組比較，不同時間段活動路程差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組相比，利培酮組、消幻湯組和合并組T1、T2、T3的活動路程均明顯減少（P＜0.01）；利培酮組與消幻湯組相比，3個時間段的活動路程減少，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；合并組與消幻湯組相比，T1活動路程明顯減少（P＜0.01），T2和T3活動路程差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表1 小鼠在曠場不同區(qū)域的活動路程（m，，n=12）

表1 小鼠在曠場不同區(qū)域的活動路程（m，，n=12）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與消幻湯組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別外周區(qū)活動路程中心區(qū)活動路程總活動路程空白組模型組利培酮組消幻湯組合并組110.05±22.71*166.42±24.75 80.86±16.66**#104.02±22.64*72.35±16.66**##13.71±3.18*16.53±8.88 9.43±21.33**8.28±29.73**6.56±4.78**123.76±75.51*186.92±41.08 89.12±19.71**112.31±26.28**78.92±36.18**#

表2 小鼠在曠場不同時間段的活動路程（m，，n=12）

表2 小鼠在曠場不同時間段的活動路程（m，，n=12）

注：與模型組比較，**P＜0.01；與消幻湯組比較，#P＜0.01

組別T1活動路程T2活動路程T3活動路程空白組模型組利培酮組消幻湯組合并組40.49±8.12**59.79±14.33 32.30±8.40**44.33±7.79**28.42±19.90**#39.20±28.46**73.02±20.30 27.81±5.66**36.24±9.01**27.13±12.35**44.06±40.96**64.39±19.31 29.01±6.98**31.74±10.27**23.36±11.96**

3 討論

隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，社會競爭及生活壓力的增加，與之相關(guān)的精神障礙日益增多。精神分裂是精神障礙中最常見的一組疾病。經(jīng)過長期的臨床觀察和大量實驗研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用NMDA受體拮抗劑MK-801可引發(fā)實驗動物出現(xiàn)精神的某些陽性、陰性癥狀以及認(rèn)知功能損害[8-9]。MK-801是目前制作精神分裂癥動物模型的最常選的藥物。臨床精神分裂癥的治療主要以第二代抗精神病藥為主，但其不良反應(yīng)較多，患者服藥±從性下降，療效降低。隨著研究的深入，中西藥物合并使用治療精神分裂癥已顯示出明顯的優(yōu)勢及前景[10-15]。

本實驗分析小鼠周邊區(qū)活動路程、中央?yún)^(qū)活動路程、不同時間段活動路程、總路程指標(biāo)，觀察各組小鼠的探究行為和自主活動的變化。模型組比空白組小鼠活動路程明顯增加（P＜0.05），表明精神分裂癥小鼠造模成功，模型小鼠的活動紊亂性大幅度增加。但模型小鼠給藥后與未處理的模型組小鼠比較，活動路程和單位時間的活動量明顯減少（P＜0.05）。同時，各給藥組小鼠經(jīng)過藥物處理后，探究行為和自主活動都?xì)w于正常，活動量和空白組小鼠類似，其中，合并組小鼠的探究行為和自主活動甚至減少到了模型組小鼠活動量的一半。提示利培酮單獨使用不僅使小鼠的活動量下降，甚至抑制小鼠的正常活動，而消幻湯單獨使用則呈現(xiàn)較為溫和的作用，并且利培酮與消幻湯合用時，它們的作用是加合的。上述結(jié)果與李光華等[16]實驗結(jié)果相符。消幻湯成分中的磁石水煎劑對小鼠的自主活動有明顯的抑制作用。同時，與本課題組之前報道的，消幻湯和利培酮合并使用會降低谷氨酸功能低下所致的小鼠高活動性[7]是一致的。另外，本課題組前期的實驗結(jié)果也表明，消幻湯中所含鉤藤的有效成分去氫鉤藤堿對小鼠的自主活動和探究行為有明顯的抑制作用[3]。除了上述有關(guān)消幻湯對精神分裂癥模型小鼠行為學(xué)的影響以外，消幻湯的含藥血清還可以保護(hù)人神經(jīng)瘤母細(xì)胞（SH-SY5Y細(xì)胞）的正常增殖和形態(tài)[6]。并且本課題組還發(fā)現(xiàn)，消幻湯所含柴胡皂苷B是抑制過氧化氫誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞損傷的有效成分[4]；消幻湯參與了紋狀體內(nèi)的五羥色胺含量的調(diào)節(jié)可能是改善精神分裂癥癥狀的可能重要機(jī)制之一[17]。

本研究提示，利培酮藥效雖強(qiáng)，但對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯抑制作用，而消幻湯藥效溫和，僅對中樞系統(tǒng)起調(diào)節(jié)作用，消幻湯合并利培酮使用療效優(yōu)于利培酮或消幻湯單獨使用，在相同時間內(nèi)控制精神分裂癥模型小鼠的紊亂行為優(yōu)于單獨使用消幻湯，這對于合適時期選用合適藥物治療精神分裂癥有十分重要的意義。

[1]Hall CS.Emotional behavior in the rat.I.defecation and urination as measures of individval differences in emotionality[J].J Comparative Psychol，1934，18（3）：385-403.

[2]Denenberg VH.Open-field behavior in the rat：what does it mean?[J].Ann NY Acad Sci，1969，159（3）：852-859.

[3]肖凡，師建國，張燕，等.去氫鉤藤堿對谷氨酸功能低下精神分裂癥模型小鼠自主活動和探究行為的影響[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（30）：1-3.

[4]王重陽，徐堂輝，張燕，等.柴胡皂苷B抑制過氧化氫誘導(dǎo)的SH_SY5Y神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J].中醫(yī)學(xué)報，2014，29（B07）：13-14.

[5]劉濤，才謙，付玉芹.中藥龍膽的研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志，2004，31（1）：85-86.

[6]張燕，冀翠玲，徐堂輝，等.消幻湯含藥血清對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖及形態(tài)的影響[J].神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生，2013，13（4）：335-338.

[7]張燕，楊春娟，劉飛虎，等.利培酮和消幻湯合并使用對谷氨酸功能低下致小鼠高活動性與偏好行為的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2013，10（28）：7-10.

[8]StefanovicA，BrandnerB，KlaassenE，etal.Acuteandchronic effectsofketamineonsemanticpriming：modelingschizophrenia[J].J Clin Psychopharmacol，2009，29（2）：124-133.

[9]Manahan-Vauqhan D，Von HD，Winter C，et al.A single application of MK801 causes symptoms of acute psychosis，deficitsinspatialmemory，andimpairmentof synaptic plasticity in rats[J].Hippocampus，2008，18（2）：125-134.

[10]張燕，劉飛虎，師建國，等.利培酮合并安腦丸治療精神分裂癥臨床療效觀察[J].中國民族民間醫(yī)藥，2012，21（22）：46-48.

[11]周小寧.近10年來精神分裂癥的中醫(yī)研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1998，4（7）：53-56.

[12]蘇晶，郝麗莉.精神分裂癥的中醫(yī)藥研究及展望[J].中醫(yī)藥信息，1994，1（5）：5-7.

[13]黃青松，王秋菊.中西醫(yī)結(jié)合治療難治性精神分裂癥100例臨床觀察[J].四川中醫(yī)，2007，25（10）：63-64.

[14]溫益雄，甘記興，黃英民，等.蓮子清心糖合并氯氮平治療精神分裂癥臨床療效分析[J].中國民康醫(yī)學(xué)，2008，20（1）：30-31.

[15]王立志.中西醫(yī)結(jié)合治療精神分裂癥30例對照研究[J].中國民康醫(yī)學(xué)，2008，20（11）：1207-1208.

[16]李光華，周旭，賀弋.龍骨、磁石對小鼠鎮(zhèn)靜催眠作用的研究[J].寧夏醫(yī)學(xué)：學(xué)報，2001，23（2）：82-83.

[17]劉祥芹，師建國，田玉梅，等.消幻湯對分裂癥模型自主活動、空間學(xué)習(xí)記憶及紋狀體內(nèi)五羥色胺水平的影響[J].中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志，2011，20（8）：690-692.

Effect of Xiaohuantang combined with Risperidone on the open field behavior of schizophrenic mice model

ZHANG Yan1*▲YANG Chunjuan2*LIU Feihu1XIAO Fan1ZHANG Man1QUAN Wei1WANG Hui1
1.Xi'an Mental Health Center,Shaanxi Province,Xi'an710061,China;2.Xi'an Medical University,Shaanxi Province, Xi'an710068,China

Objective To observe the effect of Xiaohuantang combined with Risperidone on locomotor activity and explorative behavior of schizophrenia mice model using open field test.Methods 60 Kunming mice were randomly divided into 5 groups,each group had 12 rats.Except the blank group,mice of model group,Risperidone group,Xiaohuantang group and Risperidone combined Xiaohuantang group(combined group)were ip MK-801 continuously for 14 days to establishment of schizophrenic mice model.Mice of each group were given corresponding drugs for 4 weeks,and in the blank group and the model group were given normal saline.The changes of locomotor activity and explorative behavior were observed by open field test.Results Compared with the model group,locomotor activity and explorative behavior reduced in the Risperidone group,Xiaohuantang group and the combined group,with statistically significant differences(P＜0.05).Compared with the Xiaohuantang group,explorative behavior reduced in the Risperidone group,with statistically significant differences(P＜0.05);locomotor activity and explorative behavior reduced in the combined group, with statistically significant differences(P＜0.01 or P＜0.05).There were no obvious difference in locomotor activity and explorative behavior between the combined group and Risperidone group(P＞0.05).Conclusion Xiaohuantang combined with Risperidone has obvious inhibitory effect on locomotor activity and explorative behavior of schizophrenia mice model. Also Xiaohuantang combined with Risperidone has stronger and better effect than only treated with Xiaohuantang.

Open field test;Schizophrenic;Xiaohuantang;Risperidone

R338

A

1673-7210（2015）07（c）-0008-04

2015-04-08本文編輯：程銘）

國家自然科學(xué)基金項目（81202938）；陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計劃項目（2011KJXX65，2012K19-05-01）。*為共同第一作者

▲通訊作者