八月桂花籽的化學(xué)成分研究

喬春林，秦玉琴，張春燕，張 旭，白雪梅，周奮進(jìn)，李珊憶，黃 靜

(四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都 610041)

桂花，亦稱木犀、山桂、巖桂，屬木犀科(Oleaceae)木犀屬植物，是主要分布于中國(guó)大陸長(zhǎng)江流域及其以南地區(qū)的特有植物，資源十分豐富［1］。八月桂(Osmanthus fragrans‘Bayuegui’)為桂花種下的一個(gè)類群，包括金桂、銀桂、丹桂。

桂花植物的花、果實(shí)、籽、枝干、根或根皮均具有藥用價(jià)值［2－3］。其中關(guān)于桂花籽的藥用情況，如《本草綱目》中記載為:桂花籽，味甘、辛，性溫，能暖胃、平肝、益胃、散寒;《植物名實(shí)圖考長(zhǎng)編》中記載為能治心痛以及《江蘇藥材志》中記載“暖胃，平肝，益腎，散寒，止噦”。

Chart 1

目前，有關(guān)桂花植物的化學(xué)成分有一定研究，康文藝等［4］總結(jié)了截止2008年，從桂花植物中已發(fā)現(xiàn)的化合物約有45種，分別屬于環(huán)烯醚萜類、木脂素類、酚類、苯乙醇類、苯丙素類等，主要來(lái)自于金桂、銀桂的樹(shù)皮或樹(shù)葉。有關(guān)桂花籽的化學(xué)成分研究，僅見(jiàn)李異政［5］報(bào)道的從桂花籽中分離出6個(gè)化合物，但該文中未注明桂花品種。

鑒于桂花植物資源的豐富和藥用價(jià)值，本課題組開(kāi)展了對(duì)桂花植物的系統(tǒng)研究。在前期，本課題組首先對(duì)桂花家族中的一新變種日香桂的花和根進(jìn)行了研究［6－9］，發(fā)現(xiàn)了一些有意義的化合物。為了更多地了解桂花植物的化學(xué)成分以及為闡明桂花植物的藥用物質(zhì)，本文以八月桂花籽為研究對(duì)象，開(kāi)展了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。利用多種柱層析法(硅膠，RP-18反相，MCI，Sephadex LH-20)和重結(jié)晶法從八月桂花籽的95%乙醇提取物中分離出9個(gè)單體化合物［熊果酸(1)，苯甲酸(2)，對(duì)羥基苯乙醇(3)，β-谷甾醇(4)，β-胡蘿卜苷(5)，紅景天苷(6)，紅景天苷酯(7)，(－)-methylelenolate(8)和 4，4'-二甲基-3，3'-二甲氧羰基-5，5'-(1″-甲基-1，3″-丙基)-二吡啶(9)］(Chart 1)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR，DEPT，HMQC和HMBC確證。1～9均為首次從八月桂花籽中分離得到;7～9為首次以天然產(chǎn)物形式分離得到。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

ACE200型和Varian INO-VA400/54型核磁共振儀(DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo));Sephadex LH-20凝膠柱(MCI樹(shù)脂，RP-18反相硅膠)，薄層層析硅膠GF254和柱層析用硅膠G(100目～200目和200目～300目)，青島海洋化工有限公司。

八月桂花籽，2012年采自四川省江油市，由黃靜教授鑒定為八月桂花(Osmanthus fragrans‘Bayuegui’)籽;其余所用試劑為分析純。

1.2 提取與分離

將干燥八月桂籽粗粉16 kg用石油醚(60℃ ～90℃)脫脂后，再用95%乙醇回流提取(5×2 h)。過(guò)濾，濾液減壓濃縮得粗浸膏2.9 kg。粗浸膏用2%鹽酸溶解，過(guò)濾，濾液用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯層，減壓脫溶得浸膏A 646.6 g。乙酸乙酯萃取后的酸水層用5%氫氧化鈉溶液調(diào)至pH 9～11，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯層，脫溶得浸膏 B 103.5 g。

浸膏A 646.6 g經(jīng)硅膠柱層析［梯度洗脫劑:A=V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=1 ∶0～0 ∶1］洗脫得7個(gè)部分(A1～A7)。A3經(jīng)硅膠柱層析(梯度洗脫劑:A=30∶1～4∶1)洗脫得4個(gè)部分(A3-1～A3-4)。A3-2經(jīng)減壓濃縮，放置析晶，過(guò)濾，濾餅用甲醇重結(jié)晶得2 19 mg。A3-3經(jīng)硅膠柱層析［梯度洗脫劑:B=V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1 ∶0～1 ∶1］分離得1 8 mg。A3-4減壓濃縮，放置折晶，過(guò)濾，濾餅用甲醇重結(jié)晶得4 87 mg。A7經(jīng)硅膠柱層析(梯度洗脫劑:A=20∶1～1∶1)分離得白色粉末，用甲醇重結(jié)晶得5 102 mg。

浸膏B 103.5 g經(jīng)硅膠柱層析(梯度洗脫劑:B=1∶0～0∶1)分享得 5個(gè)部分(B1～B5)。B1經(jīng)多次硅膠柱層析［梯度洗脫劑:C=V(石油醚)∶V(丙酮)=50 ∶1～10 ∶1］分離得8 228 mg。B2減壓濃縮后，放置析晶，過(guò)濾，濾餅干燥后用甲醇重結(jié)晶得3 851 mg。濾液經(jīng)多次硅膠柱層析(梯度洗脫劑:C=30∶1～5∶1)分離得9 26 mg。B3經(jīng)多次硅膠柱層析(梯度洗脫劑:B=50∶1～20∶1)分離，用甲醇重結(jié)晶得7 43 mg。B5經(jīng)硅膠柱層析(梯度洗脫劑:B=30∶1～1∶1)分離，甲醇重結(jié)晶得 6 2.7 g。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

1:白色無(wú)定形粉末(10%硫酸/乙醇顯紫紅色);1H NMR δ:0.67(s，3H，25-H)，0.73(d，J=13.2 Hz，3H，29-H)，0.81(d，J=6.0 Hz，3H，30-H)，0.85(s，3H，23-H)，0.87(s，3H，24-H)，0.89(s，3H，26-H)，1.04(s，3H，27-H)，4.29(brs，1H，3-H)，5.15(s，1H，12-H);13C NMR δ:38.4(C1)，27.1(C2)，77.0(C3)，39.1(C4)，54.9(C5)，18.1(C6)，32.8(C7)，38.5(C8)，47.1(C9)，36.4(C10)，23.9(C11)，124.7(C12)，138.3(C13)，41.8(C14)，27.7(C15)，23.0(C16)，47.0(C17)，52.5(C18)，38.7(C19)，38.6(C20)，30.3(C21)，36.7(C22)，28.4(C23)，15.2(C24)，15.4(C25)，17.0(C26)，23.4(C27)，178.4(C28)，16.4(C29)，21.2(C30)。NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10－11］數(shù)據(jù)吻合，故鑒定1為熊果酸。

2:無(wú)色針晶(重結(jié)晶溶劑甲醇);1H NMR(CDCl3)δ:8.14(d，J=7.5 Hz，2H，2，6-H)，7.49(t，J=7.5 Hz，2H，3，5-H)，7.63(m，1H，4-H)。上述NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］數(shù)據(jù)吻合，故鑒定2為苯甲酸。

3:無(wú)色針晶(三氯化鐵/鐵氰化鉀顯色反應(yīng)呈陽(yáng)性示存在酚羥基);1H NMR δ:2.59(t，J=7.2 Hz，2H，7-H)，3.52(dt，J=7.2 Hz，5.4 Hz，2H，8-H)，4.56(t，J=5.4 Hz，1H，CH2OH)，6.65(d，J=8.4 Hz，2H，3，5-H)，6.98(d，J=8.4 Hz，2H，2，6-H)，9.11(s，1H，OH);13C NMR δ:155.7(C4)，129.9(C2，6)，129.7(C1)，115.2(C3，5)，62.9(C8)，39.6(C7)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］數(shù)據(jù)吻合，故鑒定3為對(duì)羥基苯乙醇。

4:無(wú)色針晶(甲醇);Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性，顯示該化合物為三萜或甾體類化合物。將4與β-谷甾醇對(duì)照品薄層色譜對(duì)照，多種溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，兩者的Rf值均一致，斑點(diǎn)顏色相同故鑒定為β-谷甾醇。

5:白色粉末(甲醇);Libermann-Burchard反應(yīng)陽(yáng)性，Molish反應(yīng)陽(yáng)性;1H NMR δ:譜圖在高場(chǎng)區(qū)顯示6個(gè)CH3信號(hào)［δ:0.65(s，3H，18-H)，0.79 ～0.84(m，9H，26，27，29-H)，0.91(d，J=6.4 Hz，3H，21-H)，0.96(s，3H，19-H)］，一個(gè)烯氫信號(hào)［δ:5.33(brs，1H，6-H］，一組糖的端基信號(hào)［4.22(d，J=7.6 Hz，1H，1'-H)］以及一個(gè)含氧取代氫信號(hào)［δ:3.43(m，1H，3-H］。其NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］數(shù)據(jù)吻合。與 β-胡蘿卜苷對(duì)照品共薄層，多種溶劑系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，Rf值一致，且斑點(diǎn)顏色相同，故確定5為β-胡蘿卜苷。

6:無(wú)色方晶(甲醇);1H NMR δ:9.16(s，1H，p-OH)，7.04(d，J=8.1 Hz，2H，2，6-H)，6.66(d，J=8.1 Hz，2H，3，5-H)，4.80 ～ 5.00(m，3H，2'，3'，4'-OH)，4.48(t，J=5.7 Hz，1H，6'-OH)，4.16(d，J=7.8 Hz，1H，1'-H)，2.90～3.90(m，8H，2'～6'-H)，2.73(m，2H，7-H);13C NMR δ:128.8(C1)，130.0(C2，6)，115.2(C3，5)，155.8(C4)，35.1(C7)，70.3(C8)，Glc:103.0(C1')，73.7(C2')，77.0(C3')，70.2(C4')，77.1(C5')，61.3(C6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］數(shù)據(jù)吻合，故鑒定6為紅景天苷。

7:白色粉末(重結(jié)晶溶劑甲醇);1H NMR δ:9.16(s，1H，p-OH)，7.03(d，J=8.4 Hz，2H，2，6-H)，6.66(d，J=8.4 Hz，2H，3，5-H)，5.14(d，J=5.2 Hz，1H，1'-H)，5.03(m，2H，8-H)，4.24(m，2H，7-H)，3.28 ～4.14(m，4H，2'～5'-H)，2.90 ～3.26(m，3H，2'～4'-OH)，2.73(t，J=6.4 Hz，2H，6'-H)，2.00(s，3H，CH3CO);13C NMR δ:129.0(C1)，130.1(C2，6)，115.4(C3，5)，155.9(C4)，35.2(C7)，70.4(C8)，170.7(CO)，21.1(CH3)，Glc:103.3(C1')，73.9(C2')，76.8(C3')，70.4(C4')，73.7(C5')，64.1(C6')。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］數(shù)據(jù)吻合，故鑒定7為紅景天苷酯。

8:無(wú)色油狀液體，［α］20D－ 94.3°(c 0.698，CHCl3);1H NMR(CDCl3)δ:9.65(s，1H，8-H)，7.64(s，1H，6-H)，4.21(q，J=6.0 Hz，1H，2-H)，3.73(s，3H，13-H)，3.70(s，3H，12-H)，3.39(m，1H，4-H)，2.93(dd，J=16.4 Hz，3.0 Hz，1H，9a-H)，2.27(dd，J=16.4 Hz，11.1 Hz，1H，9b-H)，2.65(s，1H，3-H)，1.58(d，J=6.0 Hz，3H，7-H);13C NMR(CDCl3)δ:199.5(C8)，156.6(C6)，106.5(C5)，28.0(C4)，38.3(C9)，171.6(C10)，69.4(C2)，50.8(C3)，166.9(C11)，17.9(C7)，51.4(C12)，51.8(C13)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］數(shù)據(jù)吻合，故鑒定8為(－)-methylelenolate。

9:白色無(wú)定形粉末;碘化鉍鉀試劑檢測(cè)呈橙紅色，示該化合物為生物堿類;1HNMR:譜圖顯示了3個(gè)甲基信號(hào)［δ:1.29(d，J=6.6 Hz，3H，4″-H)，2.44，2.38(s，each，3H，8，8'-H)］，2 個(gè)甲氧基信號(hào)［δ:3.88，3.87(s，3H each，9，9'-H)］，4個(gè)脂肪族氫信號(hào)［δ:3.17，2.69，2.54(m，1H each，1″，3a″，3b″-H)，1.89(m，2H，2″-H)］，以及 4 個(gè)芳?xì)湫盘?hào)［δ:8.69，8.67，8.66，8.42(s，1H each，2，2'，6，6'-H)］;13CNMR(DMSO-d6)譜圖顯示了20個(gè)碳信號(hào)。HMBC譜圖顯示了各種氫信號(hào)與碳信號(hào)的遠(yuǎn)程相關(guān)關(guān)系，其中主要的相關(guān)為3個(gè)甲基氫信號(hào)［δ 1.29，2.44和2.38 分別與 δ 32.7(C1″)，37.2(C2″)和 141.3(C5);δ 127.0(C3)，141.3(C5)和145.0(C4);δ 127.2(C3')，137.0(C5')和 145.8(C4')等碳信號(hào)之間存在遠(yuǎn)程相關(guān);以及2個(gè)甲氧基氫信號(hào)δ 3.88，3.87則分別與 δ 167.4(C7)和 167.1(C7')存在遠(yuǎn)程相關(guān)。進(jìn)一步結(jié)合1H，13C NMR，DEPT，HMQC和 HMBC譜圖進(jìn)行分析，并將NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］數(shù)據(jù)比較，確認(rèn)兩者基本一致，故鑒定9 為 4，4'-二甲基-3，3'-二甲氧羰基-5，5'-(1″-甲基-1，3″-丙基)-二吡啶。

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