MKK4蛋白在骨肉瘤中表達(dá)的意義

袁海洪

摘要：目的 探討檢測(cè)絲裂原活化蛋白激酶激酶-4（MKK4）在骨肉瘤中的表達(dá)、發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后的關(guān)系。方法 選取我院骨肉瘤標(biāo)本28例，應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)其MKK4的表達(dá)。結(jié)果 在骨肉瘤細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中MKK4的表達(dá)明顯，MKK4在骨肉瘤細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)與臨床分期成正相關(guān)（r=0.72， P=0.000），MKK4在有轉(zhuǎn)移的骨肉瘤細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)明顯高于無轉(zhuǎn)移的骨肉瘤（P<0.05），而在細(xì)胞核中無明顯差異， 細(xì)胞核中MKK4表達(dá)的陽性率與骨肉瘤與臨床分期無相關(guān)性。結(jié)論 MKK4對(duì)骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展可能有促進(jìn)作用，MKK4與骨肉瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，可作為一個(gè)潛在的判斷骨肉瘤預(yù)后的一種指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：MKK4； 骨肉瘤；表達(dá)

MAPK具有傳導(dǎo)增殖信號(hào)和凋亡信號(hào)的功能，其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在調(diào)控細(xì)胞分裂、增殖和凋亡過程起著重要的作用，是目前人們認(rèn)識(shí)的最重要的細(xì)胞分裂調(diào)節(jié)系統(tǒng)，人們也越加關(guān)注對(duì)MAPK通路與腫瘤調(diào)控關(guān)系。唯一能同時(shí)磷酸化并激活MAPK通路中的P38/MAPK通路和JNK/MAPK通路的激酶是絲裂原活化蛋白激酶激酶-4（MKK4）[1，2]，以往的大量研究證實(shí)了在腫瘤的形成及發(fā)展過程中，MKK4 扮演著復(fù)雜的角色。研究表明大腸癌、乳腺癌等腫瘤中MKK4表達(dá)均有異常，但其在骨肉瘤中的表達(dá)情況尚不清楚。本文收集我院2001年1月～2012年12月28例骨肉瘤標(biāo)本，利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)骨肉瘤標(biāo)本中MKK4蛋白的表達(dá)，探討MKK4與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后的關(guān)系，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1一般資料 收集我院2001年1月～2012年12月28例骨肉瘤標(biāo)本，均經(jīng)病理確診，男18例，女10例，年齡9～52歲，平均年齡20.09歲；28例標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定后，Rapid·Immuno脫鈣液脫鈣，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 方法 應(yīng)用鏈霉菌素-生物素（SP）免疫組化技術(shù)分別檢測(cè)骨肉瘤組織中MKK4的表達(dá)，陽性對(duì)照用已知陽性切片，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，操作步驟均按試劑盒說明書進(jìn)行。Rapid·Immuno脫鈣劑為福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品，Mkk4兔單克隆抗體試劑為美國Epitomics公司產(chǎn)品。

1.3 結(jié)果判定 MKK4蛋白表達(dá)以細(xì)胞核和/或細(xì)胞漿出現(xiàn)黃色或棕黃色染色為陽性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)。著色強(qiáng)度分為4級(jí)：3級(jí)為棕褐色，2級(jí)為棕黃色，1級(jí)為淺黃色和黃色，O級(jí)為無色；陽性細(xì)胞比例分為5級(jí)：陽性細(xì)胞比例>80%為4，陽性細(xì)胞比例51～80%為3，陽性細(xì)胞比例11%～50%為2，陽性細(xì)胞比例≤10%為1，無陽性細(xì)胞為0。采用IRS評(píng)分法[3]對(duì)切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)評(píng)分，即陽性細(xì)胞比例（PP）與染色深度（SI）的乘積（IRS=PP×SI）。兩項(xiàng)合計(jì)乘積陰性為0～3，弱陽性為4～6，中等陽性為8，強(qiáng)陽性為9～12。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理用的是SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析及χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。

2 結(jié)果

可見異型細(xì)胞散在分布在HE染色后的肉瘤組織切片中，并可見由肉瘤細(xì)胞直接產(chǎn)生的骨樣組織分布細(xì)胞周圍，出現(xiàn)不典型核分裂相（見圖1），MKK4蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，呈棕黃色或棕褐色，細(xì)胞核的染色更深（見圖2）。

骨肉瘤不同臨床分期細(xì)胞質(zhì)中MKK4的表達(dá)有明顯差異（χ2=18.18， P=0.001），且與臨床分期呈正相關(guān)（r=0.72， P=0.000）；細(xì)胞核中MKK4表達(dá)的陽性率與骨肉瘤不同臨床分期無明顯差異（χ2=4.17， P=0.20），且與臨床分期無相關(guān)性（P=0.08）。MKK4在初診轉(zhuǎn)移、初診未轉(zhuǎn)移及術(shù)后轉(zhuǎn)移骨肉瘤中的表達(dá)有顯著差異（χ2=9.69， P=0.033）；在三者細(xì)胞核中表達(dá)無明顯差異（χ2=1.00， P=1.00）。

對(duì)骨肉瘤患者進(jìn)行l(wèi)ogistic分析，提示臨床分期（OR=3.22，P=0.08）、MKK4 在細(xì)胞質(zhì)中高表達(dá)（OR=3.01，P=0.12）為骨肉瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。（見表1）

3 討論

骨肉瘤發(fā)病率占骨原發(fā)性惡性腫瘤第一位，它的發(fā)生涉及到多基因的調(diào)控和細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。絲裂活化蛋白激酶（MAPK）能將細(xì)胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，在調(diào)控細(xì)胞增殖、分裂和凋亡過程中有重要的作用。MKK4是唯一能磷酸化并激活MAPK中的P38通路和JNK通路的激酶，作為MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的重要上游激酶，參與到細(xì)胞的增殖、分化、衰老等過程，從而在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等過程中起到調(diào)控作用[4]。

目前，尚不明確MKK4是抑癌基因還是原癌基因。部分研究顯示， MKK4 為抑癌基因， 具有腫瘤抑制作用[5]。但也有研究指出MKK4為癌基因，具有致腫瘤作用[6]。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)骨肉瘤中MAPK上游激酶MKK4蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)MKK4在骨肉瘤組織的細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中均有明顯表達(dá)，骨肉瘤不同臨床分期細(xì)胞質(zhì)中MKK4的表達(dá)有明顯差異，且與臨床分期呈正相關(guān)；細(xì)胞核中MKK4表達(dá)的陽性率與骨肉瘤不同臨床分期無明顯差異，且與臨床分期無相關(guān)性。證明了MKK4在骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展中起一定的促進(jìn)作用，MKK4表達(dá)越多，下游底物活化越多，且與腫瘤惡性程度相關(guān)。MKK4在初診轉(zhuǎn)移、初診未轉(zhuǎn)移及術(shù)后轉(zhuǎn)移骨肉瘤中的表達(dá)：MKK4在三者細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)有顯著差異；在三者細(xì)胞核中表達(dá)無明顯差異，MKK4在初診轉(zhuǎn)移骨肉瘤組織細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)高于初診無轉(zhuǎn)移的，而細(xì)胞核中的表達(dá)情況無明顯差異，提示骨肉瘤細(xì)胞質(zhì)中MKK4高表達(dá)可能與骨肉瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)，可作為一個(gè)潛在的判斷骨肉瘤預(yù)后的指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)提示MKK4在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展中有促進(jìn)作用，且與骨肉瘤的預(yù)后有關(guān)，可能為原癌基因。

到目前為止， MKK4尚不能被定義為一個(gè)單純的原癌基因或抑癌基因，其與腫瘤關(guān)系還存在爭(zhēng)議， 這需我們對(duì)其更進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/王海靜