枸杞中甜菜堿含量測定方法研究進展

閆麗麗

摘要：綜述枸杞中甜菜堿含量測定方法的研究進展，介紹薄層掃描法、高效液相色譜法、比色法、液相色譜-質譜聯(lián)用法等分析測定條件、精密度、回收率，旨在為開展甜菜堿相關研究提供理論參考。

關鍵詞：枸杞子；甜菜堿；含量測定；精密度；回收率

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：1674-1161（2017）09-0069-02

枸杞為茄科植物寧夏枸杞的干燥成熟果實，是傳統(tǒng)的藥食同源天然植物，具有滋補肝腎、益精明目的功效。現(xiàn)代研究表明，甜菜堿是枸杞的主要生物堿之一，具有降脂、抗癌、抗氧化等作用。甜菜堿是一種季銨型水溶性生物堿，易溶于水和甲醇，常溫下極易吸濕潮解，因具有良好的生物活性及理化性質且無毒無害，因而被廣泛用于化工制藥、種植養(yǎng)殖及食品生產。目前，甜菜堿檢測方法主要有薄層掃描法、高效液相色譜法、比色法、液相色譜-質譜聯(lián)用法等。綜述甜菜堿檢測方法研究進展，為甜菜堿開發(fā)利用提供參考。

1 枸杞中甜菜堿含量測定方法

1.1 層掃描法

薄層掃描法是2015版《中國藥典》（一部）中規(guī)定的枸杞子中甜菜堿含量測定方法。具體的檢測方法為：甲醇回流提取后，用活性炭濾過，加硫氰酸鉻銨溶液攪拌，再用垂熔漏斗濾過制得供試品溶液；對照品加鹽酸甲醇溶液（0.5→100）制成每1 mL含4 mg的溶液；精密吸取供試品溶液5 μL、對照品溶液3 μL與6 μL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸（10‥6‥1）為展開劑，預飽和30 min后展開，取出，揮干溶劑，立即噴新配制的改良碘化鉍鉀試液，放置1～3 h至斑點清晰，在波長515 nm，590 nm下掃描，測量供試品吸光度積分值與對照品吸光度積分值并計算。按干燥品計算，含甜菜堿（C5H11NO2）不得少于0.30%。

雙波長薄層掃描法是指采用兩種不同波長的光束，先后掃描所要測定的斑點，并記錄下此兩波長吸光度之差。對欲測斑點進行原位光譜掃描，根據斑點的吸收光譜選擇最大吸收峰波長作為樣品的測定波長λS；選擇斑點吸收光譜的基線部分，為該化合物無吸收處的波長，即樣品的參比波長λR。雙波長掃描可使薄層背景不均勻性得到補償，顯著改善基線的平穩(wěn)性和精度。

譚亮等通過優(yōu)化枸杞子樣品提取、脫色時間等前處理條件，建立測定不同來源枸杞子甜菜堿含量的雙波長薄層掃描法（TLCS法）。使用80%甲醇和快速溶劑萃取儀（ASE350）提取枸杞子甜菜堿后，經活性炭脫色、雷氏鹽沉淀、丙酮溶解沉淀，采用改進的薄層掃描法測定其含量，檢測波長為530 nm，參比波長為625 nm。測定結果為：清晰的薄層色譜斑點無干擾；甜菜堿點樣量在3.84～38.40 μg范圍內時，線性關系良好，r=0.999 5；平均加樣回收率為98.30%，RSD=2.55%（n=9）。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度高等優(yōu)點，是目前中藥材含量測定中最常用的分析方法。

方麗等采用高效液相色譜法測定甜菜堿的含量，色譜柱選用Nucleodur Hilic（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%三乙胺（82‥18，用磷酸調pH至7），流速0.6 mL/min，檢測波長196 nm。測定結果表明：甜菜堿在1.737～34.744 μg范圍內線性關系良好，r=0.999 9，平均回收率為99.5%，RSD為1.5%。

劉增根等采用反相高效液相色譜法測定柴達木枸杞和黑果枸杞中甜菜堿的含量，色譜柱選用Hypersil NH2（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈∶水（83‥17，V/V）為流動相，流速0.7 mL/min，檢測波長195 nm，柱溫30 ℃，外標法定量。測定結果表明：甜菜堿線性范圍為2.94～29.40 μg（r=0.998 7），枸杞和黑果枸杞的平均回收率（n=5）分別為98.57%和99.07%。

1.3 比色法

比色法通過比較或測量有色物質溶液顏色深度來確定待測組分含量，具有簡單、快速、靈敏等優(yōu)點。

吳燕等建立比色法測定枸杞中甜菜堿含量的分析方法，采用活性炭脫色、雷氏鹽沉淀、無水乙醚淋洗、70%丙酮溶解沉淀后，在525 nm波長處檢測。分析結果表明，甜菜堿的線性范圍為0.1～1.0 mg/mL，在0.1，0.2，0.5 mg/mL添加水平的回收率為108%～112%，相對標準偏差為2.3%～3.7%。

1.4 液相色譜-質譜聯(lián)用法

液相色譜與質譜聯(lián)機技術結合了色譜的高分離效能和質譜的高選擇性、高靈敏度特點，廣泛應用于中藥材含量測定研究。

李元元等采用LC-MS-MS法測定寧夏枸杞子提取物中甜菜堿的含量，色譜柱選用氨基柱（2.1 mm×150 mm，3 μm），柱溫35 ℃，流動相為乙腈-水（80‥20），流速為0.3 mL/min1，進樣量5 μl。質譜條件為電噴霧離子源（ESI），正離子模式（Positive），多反應監(jiān)測（MRM），干燥氣350 ℃，霧化器壓力50 psi，干燥氣流速12 L/min，毛細管電壓4 000 V，Agilent UV檢測器，Agilent三重四級桿質子檢測器。試驗結果表明：甜菜堿線性范圍為20～700 ng/mL，平均回收率為99.77%，RSD為2.1%（n=6）。

1.5 離子色譜法

離子色譜法是把離子交換色譜與高效液相色譜技術相結合，將改進后的電導檢測器安裝在離子交換樹脂柱后面，以連續(xù)檢測色譜分離的方法，主要用于測定各種離子含量，具有迅速、連續(xù)、高效、靈敏、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。

莊紅艷等采用Thermofisher Ion Pac CS19（250 mm×4 mm）陽離子交換色譜柱和CG19（50 mm×4 mm）陽離子保護柱，以甲基磺酸（MSA）為流動相，等度洗脫，流速1.0 mL/min。測定結果表明：10 min內可完成枸杞中甜菜堿的分離檢測；甜菜堿質量濃度為10～500 mg/L時，標準曲線具有良好的線性關系；最低檢出限為1.8 mg/L；精密度良好，保留時間和峰面積的RSD（n=6）分別為0.15%和1.7%；枸杞和大棗的加樣回收率在85.1%～93.4%之間（n=6），平均加樣回收率分別為88.8%和89.7%；樣品在室溫下放置12 h仍穩(wěn)定。endprint

1.6 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器測定方法（HPLC-ELSD）適用于無紫外吸收或紫外末端吸收的樣品檢測。該法具有極大的優(yōu)越性：響應值不依賴于樣品的光學性質，不論具有何種官能團，所有樣品檢測幾乎具有相同的響應分子，未知物和純度測定比紫外檢測更容易更準確。目前，該檢測方法廣泛應用于醫(yī)藥、食品、化工等行業(yè)。

劉靈卓等建立枸杞子中甜菜堿含量的HPLC-ELSD測定方法，采用Hypersil NH2色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-四氫呋喃-0.2%三氟乙酸（30‥60‥10），流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃。試驗結果表明：甜菜堿進樣量為1.28～12.80 μg時，色譜峰面積具有良好的線性關系（r=0.999 2）；平均加樣回收率為98.60%，RSD為2.8%（n=6）；樣品中甜菜堿的含量為0.528 1～1.205 4 mg/g。

梁景輝采用HPLC-ELSD測定枸杞子中甜菜堿的含量，色譜柱選用Venusil HILIC 丙基酰胺鍵合硅膠色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.2%冰醋酸溶液（87‥13）。測定結果表明：甜菜堿在0.403 6～5.045 μg范圍內呈良好線性關系，Y=

1.542 5X+4.072 4，r=0.999 9，平均回收率101.57%，RSD=1.05%（n=6）。

2 結語

近年來，對枸杞子中甜菜堿含量測定的研究取得了較大進展，包括薄層掃描法、高效液相色譜法、比色法、液相色譜-質譜聯(lián)用法等。然而，還需要通過大量試驗進行深入研究，探索更為精準、快速的檢測方法，為枸杞子資源的進一步開發(fā)利用提供理論基礎。

參考文獻

[1] 譚亮，冀恬，曹靜亞，等.雙波長薄層掃描法測定不同來源枸杞子中甜菜堿的含量[J].天然產物研究與開發(fā)，2014，26（3）：388-391.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[3] 劉增根，陶燕鐸，邵赟，等.柴達木枸杞和黑果枸杞中甜菜堿的測定[J].光譜實驗室，2012， 29（2）：694-697.

[4] 莊紅艷，姜振邦，潘廣文，等.離子色譜法測定枸杞子和大棗中甜菜堿含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017（9）：65-70.

[5] 梁景輝，賈芙蓉，時璐.HPLC-ELSD測定枸杞子中甜菜堿的含量[J].中國處方藥，2016（2）：32-33.

Abstract： The articlesummarized the research progress on the method fordeterminating betaine in lycium， and introduced analysis and determinating condition， precision and recovery by the methods including TLCS， HPLC， Colorimetryand LC-MSn.The purpose is to provide a theoretical reference for carrying out further correlation study of betaine.

Key words： lycium；betaine； content determination； precision； recoveryendprint