提高綿羊冷凍胚胎移植受胎率的方法

閔寒香，李 偉，劉長彬

(1.新疆生產(chǎn)建設兵團第十師一八三團畜牧獸醫(yī)工作站，新疆 北屯市836000;2.新疆生產(chǎn)建設兵團第十師畜牧獸醫(yī)站，新疆 北屯市836000;3.新疆農墾科學院 畜牧獸醫(yī)研究所，新疆 石河子832000)

綿羊胚胎移植技術的快速發(fā)展在動物種質資源保護和運輸過程中節(jié)約了成本，減少了疫病的傳播，降低了人力的投入和進出口的防疫隔離等不利因素，逐漸被廣大科研院所和育種企業(yè)接受，成為從國外或國內引進良種最有效的手段之一。2015年3月從國內引進良種胚胎608 枚，并分組進行了胚胎移植試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

受體羊為購進6 個月的湖羊，進行了兩病檢疫，均為陰性; 冷凍胚胎品種為黑頭杜泊羊和黑頭薩?？恕?/p>

1.2 器械藥品及耗材

氯前列烯醇(PG)、海綿栓、孕酮、holding液、蔗糖液、乙二醇、酒精、碘酒、新潔爾滅。

內窺鏡、胚胎移植消毒桶(架)、子宮鉗、手術刀片和刀柄、三棱針、10 號縫合線、子宮角打孔器、恒溫水浴鍋、1 mL 注射器、撿胚針、四孔板、35 mm 培養(yǎng)皿、實體顯微鏡、恒溫臺、彎頭止血鉗、紗布等。

1.3 方法

1.3.1 同期發(fā)情方法 采用海綿栓+PG 的處理方法進行同期發(fā)情處理。選擇膘情中等以上，無疾病的受體羊。以任意一天放置陰道海綿栓為第0 天，第11 天撤出陰道海綿栓時肌肉注射PG 1 mL，第13 天早晨開始試情，連續(xù)試情2 d，發(fā)現(xiàn)發(fā)情羊及時記錄耳號或打標記，待第22 天空腹，第23 天進行移植。

1.3.2 移植方法 采用鈍性打孔和子宮角打孔器移植(專利號: 201520272750.4)。通過內窺鏡系統(tǒng)將子宮角輕輕牽出至創(chuàng)口外，利用子宮角打孔器在子宮角上打孔，將胚胎移植至子宮體和子宮角方向，溫生理鹽水沖洗子宮角和打孔器。移植結束后迅速將子宮角推回腹腔，縫合并嚴格消毒窗口。第7 天拆除縫合線，并檢查傷口恢復情況，如有化膿等及時處理。

2 試驗結果

2.1 胚胎移植的不同方向對受胎率的影響

試驗中將受體羊分為3 組，采取不同的移植方向，將胚胎移植子宮體方向的受胎率低于子宮角方向的受胎率，且差異顯著(P ＜0.05)。見表1。

表1 不同移植方向對湖羊受胎率的影響

2.2 不同打孔方法對湖羊受胎率的影響

根據(jù)打孔方法的不同將受體湖羊隨機分為3組，采用不同的打孔方法進行移植。子宮角打孔器法優(yōu)于鈍性打孔，且差異顯著(P ＜0.05)。見表2。

表2 不同打孔方法對受胎率的影響

3 討論與分析

3.1 影響胚胎移植受胎率的因素分析

胚胎移植成功率受多種因素影響，如胚胎質量［1，2］、氣候、天氣、品種［3］、營養(yǎng)、飼養(yǎng)管理、手術過程、發(fā)情同步差以及移植后的飼養(yǎng)管理等。謝獻勝等認為，供體、受體發(fā)情同步差在±12 h范圍內移植，受胎率顯著高于±24 h，同步差為-12 h移植受胎率顯著高于12 h 移植受胎率。在胚胎移植過程中同步差越小成功率越高，受胎率越高，反之亦然［4，5］。夏先林等研究認為，采取內窺鏡移植的方法因為具有創(chuàng)口小、損傷小、恢復快，對卵巢刺激小、對子宮的牽引較輕和不易產(chǎn)生粘連等優(yōu)點有助于胚胎發(fā)育著床，且速度快、效果好［6］。胚胎移植過程中手術熟練程度直接影響到胚胎移植的成功率，如果操作不當可引起受體羊死亡(打孔時打中腹主動脈)、供體羊生殖系統(tǒng)粘連等嚴重后果。研究表明，受體羊在移植過程中隨時間延長胚胎移植成功率逐漸減低［7］。孫尚信等研究認為，影響胚胎移植成功率的因素很多，環(huán)境因素是影響胚胎移植成功的重要因素之一。給胚胎提供良好的成活和生長發(fā)育條件，可以提高胚胎移植成功率。另外，胚胎移植部位的一致性也將決定胚胎移植的受胎率。孫尚信等認為，供體沖胚時胚胎所處的子宮位置，在移植時也要將胚胎移植到相應的位置，才能保障較高的受胎率［8］。本試驗中為了避免人為干擾試驗數(shù)據(jù)，撿胚和移植固定2 個人進行。通過試驗數(shù)據(jù)可以看出，將胚胎移植至子宮角端的受胎率明顯高于子宮體方向的受胎率。在今后的試驗研究中將繼續(xù)加大這方面的工作，為此提供更多的數(shù)據(jù)支撐。

3.2 不同打孔方式對胚胎移植受胎率的影響

本次試驗中采用了兩種不同的器械進行子宮角打孔，即回形針鈍性打孔和子宮角打孔器(專利號: 201520272750.4)打孔。從試驗結果看，子宮角打孔器明顯優(yōu)于回形針鈍性打孔的方式。能夠取得這樣的結果主要是因為，回形針打孔時手術操作技術人員需要將子宮角捏在拇指、食指和中指之間，以固定子宮角避免其滑動。由于回形針需要一定的力度才能將子宮壁穿透，在這個過程中需要使用較大的力度，手指也要用力擠壓子宮角避免滑落，因此子宮角受損傷程度較重。而子宮角打孔器則避免了以上所有不足，利用子宮角打孔器可以輕松將子宮壁穿透，且基本沒有出血現(xiàn)象。另外，子宮壁上的小孔約5 ～15 s 即恢復為肉眼難以觀察到，對子宮損傷恢復極為有利，且不易形成子宮角粘連。由此保障了受體羊的重復利用效率，降低了受體羊的飼養(yǎng)和淘汰成本。

［1］袁東波，尹念春，陳家樹.影響羊胚胎移植受胎率的主要因素［J］.養(yǎng)殖與飼料，2014，9: 23-24.

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