長(zhǎng)鏈非編碼RNA HOTTIP 通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡水平促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌增殖

周發(fā)忱，趙 磊，白宇新，遲鑫明，周 欣

1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科，遼寧 大連 116011；2.大連醫(yī)科大學(xué)組織胚胎學(xué)教研室，遼寧 大連 116044

長(zhǎng)鏈非編碼RNA HOTTIP 通過(guò)調(diào)控細(xì)胞凋亡水平促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌增殖

周發(fā)忱1，趙 磊1，白宇新2，遲鑫明2，周 欣2

1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科，遼寧 大連 116011；2.大連醫(yī)科大學(xué)組織胚胎學(xué)教研室，遼寧 大連 116044

背景與目的：探索非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)有效的早期診斷及預(yù)后標(biāo)志物具有重要的科學(xué)意義和臨床價(jià)值。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)在腫瘤中的作用逐漸引起研究者的關(guān)注。本研究擬分析lncRNA HOTTIP在NSCLC中的表達(dá)情況及對(duì)NSCLC細(xì)胞增殖水平的影響和機(jī)制。方法：采用實(shí)時(shí)定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)檢測(cè)方法檢測(cè)54例NSCLC組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織的HOTTIP表達(dá)情況，分析NSCLC組織HOTTIP表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性；MTT方法檢測(cè)肺癌細(xì)胞增殖水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率的改變；蛋白［質(zhì)］印跡法(Western blot)檢測(cè)目的基因的蛋白表達(dá)變化。結(jié)果：與癌旁組織比較，HOTTIP在肺癌組織中的表達(dá)率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HOTTIP表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)。轉(zhuǎn)染HOTTIP siRNA至A549肺癌細(xì)胞后，結(jié)果顯示，與未轉(zhuǎn)染組和陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-HOTTIP 的A549細(xì)胞HOTTIP 表達(dá)明顯降低；HOTTIP表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞增殖速度減慢，凋亡率增加，凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)減少。結(jié)論：HOTTIP是一種新的NSCLC生物標(biāo)志物，可作為潛在的治療新靶點(diǎn)。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA；HOTTIP；非小細(xì)胞肺癌；增殖；細(xì)胞凋亡

肺癌是當(dāng)今世界對(duì)人類(lèi)健康危害最大的惡性腫瘤之一。在全世界范圍內(nèi)，由肺癌引起的死亡率在各種癌癥類(lèi)型中居首位［1］。在所有的肺癌中，非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占75%～80%，盡管關(guān)于NSCLC的研究目前取得了很多新進(jìn)展，但是其預(yù)后差仍是目前面臨的嚴(yán)峻問(wèn)題。因此，尋找NSCLC有效的早期診斷及預(yù)后標(biāo)志物具有重要的科學(xué)意義和臨床價(jià)值。將發(fā)現(xiàn)的特征性分子作為抗腫瘤靶點(diǎn)，可為肺癌的臨床預(yù)防和治療開(kāi)辟新途徑。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類(lèi)轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200 nt的RNA，位于細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)，不具有編碼蛋白質(zhì)的功能［2］。繼microRNA之后，lncRNA的發(fā)現(xiàn)再次推動(dòng)了非編碼RNA領(lǐng)域的研究進(jìn)展。近年的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，lncRNA參與X染色體的基因沉默、基因組印跡、染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄激活、核內(nèi)運(yùn)輸?shù)榷喾N方式調(diào)控基因的表達(dá)［3］。有研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等生物學(xué)過(guò)程，在人類(lèi)疾病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用［4］。最近，關(guān)于lncRNA在腫瘤中的作用已引起人們關(guān)注［5］。

HOTTIP是2011年被科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的一種新lncRNA［6］，HOTTIP在前列腺癌和肝癌等腫瘤中的研究已經(jīng)取得一定進(jìn)展，提示其可能在調(diào)控腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，但在NSCLC中的作用及機(jī)制如何，目前未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)NSCLC組織及癌旁組織中HOTTIP表達(dá)，并比較表達(dá)差異，分析HOTTIP與NSCLC患者臨床病理參數(shù)相關(guān)性，進(jìn)一步通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，干預(yù)NSCLC細(xì)胞中HOTTIP表達(dá)水平，分析細(xì)胞增殖和凋亡水平的改變。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 臨床標(biāo)本

收集大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科2009—2014年手術(shù)切除的54例NSCLC患者的癌組織，并選取距離腫瘤邊緣2 cm以上的癌旁組織(鏡下未見(jiàn)癌細(xì)胞)作為對(duì)照。其中：男性34例，女性20例；年齡范圍45～78歲，中位年齡59.8歲；鱗癌31例，腺癌23例；腫瘤直徑≤3 cm 20例，＞3 cm 34例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例；Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期23例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)29例，Ⅱ～Ⅲ級(jí)25例。所有患者術(shù)前均為經(jīng)過(guò)放、化療，標(biāo)本術(shù)后取材后置于液氮中保存。

1.1.2 細(xì)胞系

正常支氣管上皮細(xì)胞系16HBE、NSCLC腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、SPC-A1和鱗癌細(xì)胞系SKMES-1購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫(kù)。

1.1.3 主要試劑

RPMI-1640培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Hyclone 公司；TRIzol 試劑、PrimeScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒以及 SYBR PCR Master Mix 均購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司；siRNA-HOTTIP和陰性對(duì)照siRNA以及轉(zhuǎn)染試劑LipofecamineTM2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；MTT試劑購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；Bax、Bcl-2單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)CST公司；PVDF膜購(gòu)自美國(guó)Millipore公司；凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自晶美生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

上述細(xì)胞系傳代培養(yǎng)于RPMI-1640完全培養(yǎng)基，其內(nèi)含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素以及100 mg/mL鏈霉素，置于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每1～2 d更換新鮮培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)到80%～90%時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.2.2 定量實(shí)時(shí)PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)檢測(cè)

應(yīng)用TRIzol試劑提取細(xì)胞總RNA，根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄獲得 cDNA，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)驗(yàn)，以ΔΔCt法進(jìn)行定量分析，以 GAPDH作為內(nèi)參，HOTTIP產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度比GAPDH擴(kuò)增產(chǎn)物熒光強(qiáng)度相對(duì)量代表HOTTIP相對(duì)表達(dá)水平。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以H2O為模板作為陰性對(duì)照。HOTTIP的上游引物5’-CCTAAAGCCACGCTTCTTTG-3’，下游引物5’-TGCAGGCTGGAGATCCTAGT-3’。

1.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將NSCLC細(xì)胞接種到6孔板中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞融合至70%進(jìn)行轉(zhuǎn)染。分別設(shè)立HOTTIP干擾組(si-HOTTIP)、陰性轉(zhuǎn)染組(si-NC)、空白對(duì)照組(blank control)。將LipofecamineTM2000與si-HOTTIP或si-NC混合(終濃度為100 nmol/L)后加入細(xì)胞中，溫育6 h后，換完全RPMI-1640繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 MTT方法檢測(cè)細(xì)胞增殖

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，按每孔5 000個(gè)細(xì)胞鋪96孔板，接種培養(yǎng)24、48、72及96 h后終止培養(yǎng)。終止培養(yǎng)前4 h，加入MTT溶液(5 mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)，除去孔中培養(yǎng)基，加入DMSO，振蕩至結(jié)晶溶解。酶標(biāo)儀檢測(cè)490 nm波長(zhǎng)時(shí)各孔吸光度(D)值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，消化后收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBC洗滌2次，以1 mL結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106個(gè)/mL，將100 μL的細(xì)胞懸液加入5 mL流式管中，每管加入10 μL Annexin-Ⅴ-FITC染色，隨后加入10 μL PI染色，室溫下避光溫育15 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6 蛋白［質(zhì)］印跡法(Western blot)檢測(cè)

將不同處理因素組的細(xì)胞培養(yǎng)48 h后，裂解并提取蛋白，用Western blot檢測(cè)目的蛋白表達(dá)。將蛋白印跡顯影圖掃描，利用凝膠自動(dòng)分析成像FluorChem V2.0軟件(Alpha Innotech Corp., USA)對(duì)蛋白帶進(jìn)行灰度值(分別以目的蛋白的整合密度值比內(nèi)參GAPDH的整合密度值)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，數(shù)值用x±s 表示。實(shí)驗(yàn)最少重復(fù)3次。兩組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。多組間比較采用單因素方差分析方法統(tǒng)計(jì)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HOTTIP在NSCLC組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況

本研究采用qRT-PCR方法檢測(cè)54例肺癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁組織中的HOTTIP表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HOTTIP在癌旁組織中呈低表達(dá)，在肺癌組織中表達(dá)明顯增加(圖1A)。這提示HOTTIP在NSCLC組織中持續(xù)高表達(dá)。

本研究分析了HOTTIP與患者臨床病理參數(shù)相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HOTTIP在分期較高(T3、T4)患者腫瘤組織中的表達(dá)水平明顯高于低分期者(T1、T2)(圖1B)。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其腫瘤組織中HOTTIP表達(dá)亦明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(圖1C)。

此外，本研究檢測(cè)了不同NSCLC細(xì)胞中HOTTIP表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常支氣管上皮細(xì)胞系16HBE相比，HOTTIP 在A549、SPC-A1和SK-MES-1細(xì)胞中的表達(dá)分別增高4.2倍、3.4倍和2.6倍(圖1D)。

2.2 抑制NSCLC細(xì)胞中HOTTIP 表達(dá)后增殖減慢

本研究首先驗(yàn)證siRNA對(duì)細(xì)胞中HOTTIP 表達(dá)的干擾效率。通過(guò)qRT-PCR方法檢測(cè)A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA-HOTTIP后HOTTIP 的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未轉(zhuǎn)染組和陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-HOTTIP的A549細(xì)胞，其HOTTIP表達(dá)明顯降低，說(shuō)明該siRNA可沉默A549細(xì)胞中HOTTIP的表達(dá)(圖2A)。

此外，本研究采用MTT的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染siRNA-HOTTIP后細(xì)胞增殖水平的改變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A549細(xì)胞中HOTTIP沉默后，細(xì)胞增殖活性明顯降低，說(shuō)明HOTTIP參與NSCLC細(xì)胞增殖活性的調(diào)控(圖2B)。

2.3 抑制NSCLC細(xì)胞中HOTTIP 表達(dá)后細(xì)胞凋亡增加

采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA-HOTTIP后細(xì)胞凋亡率的改變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與陰性轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-HOTTIP細(xì)胞的凋亡率明顯增加(圖3A)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，圖3)；同時(shí)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)增加，抗凋亡蛋白 Bcl-2表達(dá)減少。這提示HOTTIP可能通過(guò)影響B(tài)ax和Bcl-2蛋白表達(dá)調(diào)控細(xì)胞凋亡(圖4)。

圖 1 HOTTIP在NSCLC中的表達(dá)及臨床意義Fig. 1 HOTTIP expression in NSCLC and its clinical significance

圖 2 HOTTIP對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響Fig. 2 The efffect of lncRNA HOTTIP on the cell proliferation in vitro

圖 3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)抑制A549中HOTTIP 表達(dá)后細(xì)胞凋亡水平Fig. 3 Apoptosis of cells was measured by FACScan after HOTTIP silencing in A549 cell line

圖 4 Western blot方法檢測(cè)抑制A549中HOTTIP 表達(dá)后凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)Fig. 4 Apoptosis–related proteins were measured by Western blot after HOTTIP silencing in A549 cell line

3 討 論

lncRNA起初被認(rèn)為是基因組轉(zhuǎn)錄的“噪聲”，是RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的副產(chǎn)物，并不具有任何生物學(xué)功能。lncRNA異常表達(dá)與癌癥發(fā)生關(guān)系密切，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。lncRNA異常表達(dá)可以存在于正常組織、不典型增生組織以及腫瘤組織中，而特異性表達(dá)的lncRNA還可作為腫瘤診斷的標(biāo)志物［7］。目前基因組分析已發(fā)現(xiàn)了大量的lncRNAs，但是只有少部分lncRNA的功能被研究。其中較為突出的是HOTAIR、MALAT-1。目前已在多種腫瘤如胃癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌等組織中發(fā)現(xiàn)HOTAIR、MALAT-1的異常表達(dá)［8-9］。MALAT-1是第一個(gè)在肺癌中被研究的lncRNA，研究發(fā)現(xiàn)其可作為早期肺腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立標(biāo)志物［10］。此外，有研究報(bào)道，HOTAIR高表達(dá)狀態(tài)與NSCLC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分級(jí)密切相關(guān)，并提示患者的不良預(yù)后［11］。本研究中發(fā)現(xiàn)了一種新的lncRNA，即HOTTIP，其可能參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展。

HOTTIP基因定位于染色體7p15.2，轉(zhuǎn)錄本含有4 665個(gè)核苷酸，在胚胎發(fā)育過(guò)程中可通過(guò)與WDR5/MLL復(fù)合物作用促進(jìn)H3K4基因甲基化及臨近的HOXA基因的轉(zhuǎn)錄激活。Li等［12］發(fā)現(xiàn)，HOTTIP可通過(guò)調(diào)控HOXA13的表達(dá)促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的進(jìn)展和對(duì)吉西他濱的耐藥性。還有研究發(fā)現(xiàn)，肝癌細(xì)胞中HOTTIP過(guò)表達(dá)可促進(jìn)肝癌的發(fā)生、侵襲力增加，可被miR-125b負(fù)性調(diào)控［13］。肝癌組織中的HOTTIP過(guò)表達(dá)與患者侵襲和不良預(yù)后相關(guān)，可能是預(yù)測(cè)肝癌預(yù)后的生物標(biāo)志物［14］。Liu等［15］的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在胃癌細(xì)胞中人類(lèi)同源異型盒(HOX)基因座的反義RNA(HOTAIR)作為ceRNA，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)miR-331-3p，調(diào)節(jié)HER-2的表達(dá)，影響胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組織相比，在NSCLC組織和細(xì)胞中HOTTIP的表達(dá)均顯著上調(diào)，提示HOTTIP基因可能在NSCLC 的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮類(lèi)似癌基因的作用。進(jìn)一步觀察HOTTIP與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)HOTTIP與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、臨床分期相關(guān)，提示HOTTIP高表達(dá)可能參與肺癌的惡性增殖過(guò)程。通過(guò)生存分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HOTTIP高表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)。HOTTIP可能成為判斷NSCLC預(yù)后的參考指標(biāo)。

為進(jìn)一步探討HOTTIP在NSCLC中的生物學(xué)功能，本研究開(kāi)展了體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在NSCLC細(xì)胞中HOTTIP表達(dá)被抑制后，顯著降低了腫瘤細(xì)胞的增殖能力，說(shuō)明HOTTIP可能主要通過(guò)促進(jìn)增殖參與腫瘤的形成。

腫瘤是細(xì)胞增殖和凋亡均異常的疾病。有學(xué)者指出細(xì)胞凋亡的異常比細(xì)胞過(guò)度增殖在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用更為重要［4］。對(duì)此，本研究檢測(cè)了細(xì)胞凋亡的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HOTTIP表達(dá)下調(diào)后，細(xì)胞凋亡數(shù)增加。由于Bax/Bcl-2比率是啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的分子開(kāi)關(guān)，本研究還檢測(cè)了凋亡蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑制HOTTIP表達(dá)后可增加促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，抑制Bcl-2蛋白的表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)了HOTTIP的抑制凋亡作用。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)HOTTIP在NSCLC細(xì)胞及組織中高表達(dá)，其高表達(dá)與患者的不良預(yù)后相關(guān)；下調(diào)NSCLC細(xì)胞中HOTTIP的表達(dá)后可抑制肺癌細(xì)胞增殖并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，提示HOTTIP可能通過(guò)影響細(xì)胞增殖與凋亡促進(jìn)NSCLC的發(fā)生、發(fā)展。這些新的研究發(fā)現(xiàn)將為今后深入研究NSCLC分子機(jī)制及治療新靶點(diǎn)提供新思路。

［1］ JEMAL A, BRAY F, CENTER M M, et al. Global cancer statistics［J］. CA Cancer J Clin, 2011, 61(2): 69-90.

［2］ OKAZAKI Y, FURUNO M, KASUKAWA T, et al. Analysis of the mouse transcriptome based on functional annotation of 60,770 full-length cDNAs［J］. Nature, 2002, 420(6915): 563-573.

［3］ VILLEGAS V E, ZAPHIROPOULOS P G. Neighboring gene regulation by antisense long non-coding RNAs［J］. Int J Mol Sci, 2015, 16(2): 3251-3266.

［4］ CHEN L L, ZHAO J C. Functional analysis of long noncoding RNAs in development and disease［J］. Adv Exp Med Biol,2014, 825: 129-158.

［5］ YANG G, LU X, YUAN L. LncRNA: a link between RNA and cancer［J］. Biochim Biophys Acta, 2014, 1839(11): 1097-1109.

［6］ WANG K C, YANG Y W, LIU B. A long noncoding RNA maintains active chromatin to coordinate homeotic gene expression［J］. Nature, 2011, 472(7341): 120-124.

［7］ DENG G, SUI G. Noncoding RNA in oncogenesis: a new era of identifying key players［J］. Int J Mol Sci, 2013, 14(9): 18319-18349.

［8］ WU Y, ZHANG L, WANG Y, et al. Long noncoding RNA HOTAIR involvement in cancer［J］. Tumour Biol, 2014, 35(10): 9531-9538.

［9］ WANG F, REN S, CHEN R, et al. Development and prospective multicenter evaluation of the long noncoding RNA MALAT-1 as a diagnostic urinary biomarker for prostate cancer［J］. Oncotarget, 2014, 5(22): 11091-11102.

［10］ SCHMIDT L H, SPIEKER T, KOSCHMIEDER S, et al. The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth［J］. J Thorac Oncol, 2011, 6(12): 1984-1992.

［11］ LOEWEN G, JAYAWICKRAMARAJAH J, ZHUO Y. Functions of lncRNA HOTAIR in lung cancer［J］. J Hematol Oncol, 2014, 7(1): 90.

［12］ LI Z, ZHAO X, ZHOU Y, et al. The long non-coding RNA HOTTIP promotes progression and gemcitabine resistance by regulating HOXA13 in pancreatic cancer［J］. J Transl Med, 2015, 13: 84.

［13］ TSANG F H, AU S L, WEI L, et al. Long non-coding RNA HOTTIP is frequently up-regulated in hepatocellular carcinoma and is targeted by tumour suppressive miR-125b［J］. Liver Int, 2015, 35(5): 1597-1606.

［14］ QUAGLIATA L, MATTER M S, PISCUOGLIO S, et al. Long noncoding RNA HOTTIP/HOXA13 expression is associated with disease progression and predicts outcome in hepatocellular carcinoma patients［J］. Hepatology, 2014, 59(3): 911-923.

［15］ LIU X H, SUN M, NIE F Q, et al. LncRNA HOTAIR functions as a competing endogenous RNA to regulate HER2 expression by sponging miR-331-3p in gastric cancer［J］. Mol Cancer, 2014, 13: 92.

《中國(guó)癌癥雜志》2016年征訂啟事

《中國(guó)癌癥雜志》是由國(guó)家教育部主管、復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院主辦的全國(guó)性腫瘤學(xué)術(shù)期刊，讀者對(duì)象為從事腫瘤基礎(chǔ)、臨床防治研究的中高級(jí)工作者。主要報(bào)道內(nèi)容：國(guó)內(nèi)外研究前沿的快速報(bào)道、專(zhuān)家述評(píng)、腫瘤臨床研究、基礎(chǔ)研究、文獻(xiàn)綜述、學(xué)術(shù)討論、臨床病理討論、病例報(bào)道、講座和簡(jiǎn)訊等?！吨袊?guó)癌癥雜志》已入選中文核心期刊、中國(guó)科技核心期刊及全國(guó)腫瘤類(lèi)核心期刊，并為中國(guó)科技論文統(tǒng)計(jì)源期刊，先后被“中國(guó)期刊網(wǎng)”、“萬(wàn)方數(shù)據(jù)——數(shù)字化期刊群”和“解放軍醫(yī)學(xué)圖書(shū)館數(shù)據(jù)庫(kù)(CMCC)”等收錄。

《中國(guó)癌癥雜志》為月刊，大16開(kāi)，80頁(yè)銅版紙(隨文彩圖)，每月30日出版，單價(jià)15元，全年180元。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)出版物號(hào)1007-3639，國(guó)內(nèi)統(tǒng)一連續(xù)出版物號(hào)CN 31-1727/R，郵發(fā)代號(hào)4-575。

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主 編：沈鎮(zhèn)宙

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The long non-coding RNA HOTTIP promotes the proliferation of non-small cell lung cancer cells through the regulation of apoptosis

ZHOU Fachen1, ZHAO Lei1, BAI Yuxin2, CHI Xinming2, ZHOU Xin2

(1. Department of Thoracic Surgery, the First Hospital Affiliated to Dalian Medical University, Dalian 116011, Liaoning, China; 2. Department of Histology and Embryology, Dalian Medical University, Dalian 116044, Liaoning, China)

Correspondence to: ZHOU Xin E-mail: dl_zhoufch@126.com

Background and purpose: Exploration of the effective early diagnostic and prognostic markers of non-small cell lung cancer (NSCLC) has important scientific significance and clinical value. Recently, the role of long chain non-coding RNA (lncRNA) in the tumor attracts widespread attention. This study intended to investigate the level of lncRNA HOTTIP in NSCLC, the effect of HOTTIP on cell proliferation and its mechanisms. Methods: Expression of lncRNA HOTTIP in tumor and their matched non-tumor tissues were determined by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) in NSCLC patients. Then, we analyzed the potential correlation of lncRNA HOTTIP expression levels in tumor tissues with clinicopathological features of NSCLC and clinical outcome. The effects of HOTTIP on NSCLC cell proliferation and apoptosis were tested using in vitro MTT and flow cytometric assays. Western blot method was uesd to detect the expressions of proteins. Results: LncRNA HOTTIP expression level was significantly decreased in NSCLC tissues in comparison to adjacent non-tumor tissues (P＜0.05). It was also proved that HOTTIP expression was associated with NSCLC histological grade and lymph node metastasis. Moreover, knockdown of HOTTIP expression in A549 cell line decreased proliferation and enhanced apoptosis compared with transfected negative control. Western blot assay showed that the level of Bax protein was significantly increased, whereas Bcl-2 was significantly decreased in HOTTIP-silencing A549 cell. Conclusion: HOTTIP is a novel prognostic biomarker and a potential therapeutic candidate forNSCLC.

lncRNA; HOTTIP; Non-small cell lung cancer; Proliferation; Apoptosis

10.3969/j.issn.1007-3969.2015.09.002

R734.2

A

1007-3639(2015)09-0652-07

2015-04-09

2015-07-20）

吳階平基金(320675014037)。

周欣 E-mail:dl_zhoufch@126.com