狹葉獐牙菜化學成分研究

陳麗元，李水仙，夏從龍*

（1.大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000；2.大理學院基礎醫(yī)學院，云南大理 671000）

狹葉獐牙菜（Swertia angustifoliaBuch.）屬于龍膽科獐牙菜屬植物，分布于云南、廣西、貴州等地，常生長于海拔為1 500～3 300 m的田邊、草坡及荒地，民間常用全草代替青葉膽入藥，具有清熱解毒、健胃、除濕利膽的功效，用于治療黃疸型肝炎、膽囊炎等疾病〔1-2〕。由于目前對狹葉獐牙菜研究較少，為了解其藥用成分的結構特點，我們對狹葉獐牙菜的主要化學成分進行了初步的研究，從95%乙醇提取物的氯仿部位分離鑒定了4個化合物。分別鑒定為齊墩果酸（1）、烏蘇酸（2）、羽扇豆醇（3）、β-羥基-11α，12α-環(huán)氧齊敦果-28，13β-內(nèi)酯（4）。見圖1。

圖1 化合物1～4的化學結構

1 儀器與材料

1.1 實驗材料 實驗材料于2008年10月采自云南省大理市鳳陽橋后山，由藥學與化學學院夏從龍教授鑒定為龍膽科狹葉獐牙菜（Swertia angustifoliaBuch.）的全草。

1.2 儀器與試劑 Bruker AM-400型核磁共振波譜儀，四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標；瑞士Büchi R-210型旋轉蒸發(fā)儀；柱層析硅膠、薄層層析板硅膠G和GF254（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20（Pharmacia公司）；其他化學試劑均為化學純。顯色方法為10%硫酸乙醇溶液處理后烘烤顯色或碘蒸氣熏蒸顯色。

2 提取與分離

狹葉獐牙菜自然晾干（9.8 kg），粉碎后用95%乙醇回流提取，每次3 h，共提取3次，提取液合并濃縮得浸膏，加水分散后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯分配，氯仿部位濃縮（150 g），以少量粗硅膠拌樣后用200～300目硅膠柱層析，石油醚-丙酮混合溶劑（30∶1，20∶1，15∶1，10∶1，5∶1，1∶1）梯度洗脫，得到5個組分FrA～E。組分FrA反復經(jīng)硅膠柱層析（石油醚/氯仿、氯仿/丙酮）洗脫、凝膠柱Sephadex LH-20層析，得到化合物1（11.584 8 g）、化合物2（20 mg）、組分FrB經(jīng)反復硅膠柱層析（石油醚/丙酮、石油醚/氯仿）洗脫、凝膠柱Sephadex LH-20純化得到化合物3（15 mg）、化合物4（15 mg）。

3 實驗結果

化合物1：C30H48O3；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：183.33（C-28），143.60（C-13），122.64（C-12），79.04（C-3），55.22（C-5），47.64（C-9），46.53（C-19），45.88（C-17），41.59（C-14），40.98（C-18），39.28（C-8），38.76（C-4），38.40（C-1），37.09（C-10），33.80（C-21），33.07（C-29），32.61（C-22），32.44（C-7），30.68（C-23），28.10（C-20），27.69（C-2），27.18（C-15），25.94（C-27），23.58（C-16），23.40（C-30），22.92（C-11），18.30（C-9），17.15（C-26），15.54（C-24），15.32（C-25）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.28（1H，t，J=3.47 Hz，12-H），3.22（1H，dd，J=4.07，5.23 Hz，3-H），2.82（1H，dd，J=4.07，4.68 Hz，18-H），1.13，0.99，0.93，0.91，0.90，0.77，0.75（各3H，s，-CH3×7）。以上數(shù)據(jù)與文獻〔3〕報道對比，鑒定化合物1為齊墩果酸。

化合物2：C30H48O3；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：181.95（C-28），139.82（C-13），123.08（C-12），79.01（C-3），55.50（C-5），53.15（C-18），47.99（C-17），47.6（C-9），42.56（C-14），41.35（C-8），40.66（C-19），38.94（C-20），38.88（C-4），38.23（C-1），37.64（C-10），37.56（C-22），34.58（C-7），31.05（C-21），29.10（C-23），28.96（C-15），28.38（C-2），23.59（C-16），23.40（C-11），22.90（C-27），21.93（C-30），18.22（C-6），17.22（C-26），17.02（C-24），16.66（C-29），15.38（C-25）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.29（1H，s，H-12），3.24（1H，m，H-3），2.84（1H，d，J=15.05 Hz，H-18），1.28，1.15，0.88，0.79，0.77（3H，s，-CH3×5），1.00（3H，d，J=6.61 Hz，H-30），0.94（3H，d，J=7.41 Hz，H-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻〔4〕報道對比，鑒定化合物2為烏蘇酸。

化合物3：C30H48O；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：150.89（C-20），109.38（C-29），80.56（C-3），55.40（C-5），50.35（C-9），48.30（C-18），48.01（C-19），43.00（C-17），42.84（C-14），40.86（C-8），40.01（C-22），39.82（C-1），38.27（C-4），38.07（C-13），37.10（C-10），35.59（C-16），34.23（C-7），29.72（C-21），27.98（C-23），27.45（C-2），26.95（C-15），25.19（C-12），20.96（C-11），19.30（C-30），18.28（C-6），18.01（C-28），16.18（C-26），15.99（C-25），15.55（C-24），14.53（C-27）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：4.67（1H，d，J=2.07 Hz，H-29），4.56（1H，d，J=2.08Hz，H-29），3.22（1H，dd，J=4.07，5.23Hz，3-H），2.36（1H，m，H-19），1.25，1.03，0.97，0.94，0.86，0.83，0.79（各3H，s，7×CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻〔5〕報道對比，鑒定化合物3為羽扇豆醇。

化合物4：C30H46O4；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：179.35（C-28），87.53（C-13），78.77（C-3），57.10（C-12），54.60（C-5），52.73（C-11），50.71（C-9），49.61（C-18），43.86（C-17），41.30（C-8），40.53（C-14），38.86（C-4），38.15（C-1），37.76（C-19），36.47（C-10），34.29（C-21），33.19（C-29），31.45（C-20），31.10（C-7），27.78（C-23），27.00（C-22），26.79（C-2），26.70（C-15），23.59（C-30），21.27（C-16），20.04（C-26），18.84（C-27），17.58（C-6），17.18（C-25），15.09（C-24）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.27（1H，m，3-H），3.05（2H，t，J=5.30 Hz，H-11，12），2.34（1H，dd，J=3.41，2.79 Hz，H-18），2.15（1H，m，H-16），1.92（1H，m，H-19），1.57（1H，s，H-19），1.12，1.08，1.04，1.01，0.94，0.82（各3H，s，-CH3×6）。以上數(shù)據(jù)與文獻〔6〕報道對比，鑒定化合物4為3β-羥基-11α，12α-環(huán)氧齊墩果-28，13β-內(nèi)酯。

4 討論

青葉膽為龍膽科獐牙菜屬植物青葉膽的干燥全草，味苦、微寒、歸肝膽經(jīng)，具有清肝利膽、清熱利濕的功效，用于黃疸尿赤、熱淋澀痛。具有保肝、解毒、降酶、抗菌消炎等多種藥理作用。近年來青葉膽被大量采挖，資源逐年減少，但該屬其他種資源豐富，民間用其同屬植物代替青葉膽，狹葉獐牙菜就是其中之一，關于狹葉獐牙菜的化學成分研究報道較少，本研究從狹葉獐牙菜中分離得到的4個化學成分中，化合物1齊墩果酸的含量最多，據(jù)文獻報道齊墩果酸能抑制環(huán)磷酰胺所致的肝細胞培養(yǎng)上清液谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶及乳酸脫氫酶活性增強，肝細胞MTT（噻唑藍）值減小，同時可降低谷氨酸誘導的海馬神經(jīng)元〔Ca2+〕升高，對谷氨酸誘導的海馬神經(jīng)元損傷有一定的保護作用〔7-10〕。這為狹葉獐牙菜能代替青葉膽作為治療肝炎類藥物使用提供了依據(jù)。

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