獻血人群人類血小板抗原1～5系統(tǒng)基因多態(tài)性分布特點

徐向華

江蘇省泰州市中心血站檢驗科,江蘇泰州 225300

人類血小板抗原（HPA)位于血小板膜糖蛋白上，這些膜糖蛋白是由遺傳基因決定的，在臨床和輸血實踐中具有重要的研究意義。血小板上有血小板特性性抗原，是血小板抗原重要抗原之一[1]。一般情況下血小板抗原可以分為兩種類型，一類是血小板抗原與其他組織或細胞共有的抗原，一類是血小板本身所特有的抗原，就是我們所說的HPV，血小板抗原不合能夠導致血小板輸注無效、出血后呈現(xiàn)不良癥狀以及新生兒免疫性血小板減少紫癜等。傳統(tǒng)的血清學分析方法不能清晰的獲取高質量、高特異性抗血清多多種因素的制約，影響血小板分型工作的深入發(fā)展[2]。該研究特選取200例泰州市獻血人群人資料進行血小板抗原1～5系統(tǒng)基因多態(tài)性研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究的檢測標本隨機選取泰州市沒有血緣關系的200例健康獻血者靜脈血0.5 mL（EDTA抗凝)。在進行血小板采集的所有人的身體健康指標必須符合《獻血者健康檢查標準》，單采前獻血者外周血PLT≥150×10 9/ L，HCT≥0.36，獻血過程中的間隔至少要大于1個月，在5 d內不能服用消炎類藥品[3]。

檢測儀器選用由Promega公司生產(chǎn)的Tap DNA聚合酶；HPA1～5系統(tǒng)基因特異性引物由美國GT公司合成；凝膠圖像分析系統(tǒng)采用UVP公司提供的系統(tǒng)；PCR擴增儀采用德國公司生產(chǎn)的產(chǎn)品；DNA提取采用德國QIAamp DNA Mini Kit[4]。

1.2 方法

1.2.1 DNA血樣提取 獻血人群的外周血提出方法采用Pel-freez公司的快速鹽析法進行提取，操作方式按照說明書嚴格執(zhí)行。

1.2.3 電泳 對HPA基因擴增產(chǎn)物進行電泳處理需要配置2%的瓊脂糖凝膠，然后從HPV產(chǎn)物中取5 l 的量，將它直接點樣到凝膠孔中，采用0.5×TEB緩沖液，然后以10 V/cm電泳處理20 min。然后在紫外光下拍攝記錄凝膠圖像，觀察處理結果，并做好記錄工作。

1.3 統(tǒng)計方法

該研究中所有獻血人群的基因頻率按照基因計數(shù)法進行統(tǒng)計，采用c2檢驗，不同人群基因頻率分布的差異比較也采用c2檢驗，當P＜0.05時，表示兩組數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義[5]。

2 結果

該研究中200名獻血人群HPA-1a、2a、3a、4a、5a基因頻率分別為：0.942、0.741、0.926、0.945、0.773，HPA-1b、2b、3b、4b、5b基因頻率分別為:0.058、0.286、0.084、0.045、0.227，各系統(tǒng)均呈多態(tài)性分布，ab雜合子依次為64和30例,-2bb類型4例;HPA-3和-15高度雜合,aa基因型依次為112和80例,很多獻血人群屬于bb基因型。見表1。

3 討論

人體血液HPA一般有染色體雙等位共顯性基因組成，其基因遺傳性一般呈多態(tài)性分布（除了3個堿基因缺失以外），其他抗原一般是由單核苷酸組成，就是醫(yī)學上所說的單核苷酸多態(tài)性，其多態(tài)性分布一般具有某種差異[6]。另外，血小板特異性抗原具高度多態(tài)性，它的多態(tài)性是由位于血小板上的糖蛋白上的單個堿基取代而導致相應氨基酸的改變而形成，血小板抗原多態(tài)性分析在疾病的防治中有著重要的指導意義。特發(fā)性血小板減少性紫癜是血小板減少性紫癜中的一種，也是一種常見的自身免疫性疾病，人體血液對其具有重要的治療意義[7]。

近幾年，隨著醫(yī)療技術以及微生物學的發(fā)展，人們對人體血小板抗原的研究不斷 深入，促進血小板檢測方法的進步，目前人類已經(jīng)掌握以DAN為基礎的HPA基因分型方法，利用新型基因檢測方法能夠準確的檢測、分析人類血小板抗原1～5系統(tǒng)基因多態(tài)性分布的特點，能夠檢測出人體血液中血小板抗原1～5系統(tǒng)10個等位基因，進而分析他們在不同的個體中合子表達狀態(tài)，為臨床醫(yī)學做出很大的貢獻。該文采用PCR-SSP方法對泰州市獻血人群HPA1-5系統(tǒng)進行基因分型處理，結果發(fā)現(xiàn)泰州市人群中HPA1-5系統(tǒng)10個等位基因據(jù)能夠檢測到，這10個基因在不同的個體中以純合子和純雜合子狀態(tài)表達，而且HPA2-5系統(tǒng)的雜合度比較高，處理HPA4系統(tǒng)系統(tǒng)以外，其余系統(tǒng)均檢測出bb型純合子個體。從泰州市獻血人群的血液不配合率來看，HPA4、5系統(tǒng)的不賠率相對比較高，提示臨床上有重要的免疫學意義，在血小板的輸注中首先要警惕此類基因系統(tǒng)的血液，以免發(fā)生注射風險[8]。

應用PCR-SSP技術對健康獻血者HPA1-5系統(tǒng)等位基因分型，能夠清晰的掌握部分已知血小板血型獻血者的資料，既可為臨床上因血小板免疫反應導致的PTP、PTR等患者及需反復、多次輸血的患者提供HPA相配合的血小板，提高血小板輸注的安全、有效性，又可根據(jù)已知的HPA基因型組建HPA譜細胞系，對特異性抗體進行鑒定等。HPA基因多態(tài)性的分子基礎的闡明及基因分型技術的普及，為篩選及建立已知HPA供者庫奠定了基礎，同時為診斷、治療同種免疫血小板減少癥提供了研究手段，該資料在作為群體遺傳學資料的同時，也將有利于臨床血小板輸注治療。

該研究中200名獻血人群HPA1-5基因系統(tǒng)均呈多態(tài)性分布，ab雜合子依次為64和30例,-2bb4例;HPA-3和-15高度雜合,aa基因型依次為112和80例,很多獻血人群屬于bb基因型。其中本地區(qū)人群的HPA-1-5系統(tǒng)的不配合率為14.35%、28.94%，所以說血小板抗原檢測在臨床上具有重要的免疫學意義，在以后的臨床輸血中要特別注意HPA5系統(tǒng)多態(tài)性到指定額血小板輸注風險。HPA-1-5是導致免疫性血小板減少的主要血型系統(tǒng)，而且HPA-5系統(tǒng)在5各系統(tǒng)中的雜合度最高，此類基因系統(tǒng)比較容易發(fā)生血小板免疫反應，在臨床應用中應該高度重視。

表1 本地區(qū)獻血人群HPA-1-5基因型和等位基因頻率[n（%）]

綜上所述，該地區(qū)獻血人群HPA1-5系統(tǒng)基因均呈多態(tài)性分布,其中HPA-3、-2和-5的a與b基因雜合率較高。提示在臨床血液輸注過程中應該特別注意此類血液的輸注，防止不良事件的發(fā)生。

[1] 楊蘭，梁秀云，曾江輝.廣西地區(qū)壯族瑤族人群人類血小板抗原基因的多態(tài)性分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2013(20)：2644-2647.

[2] 張剛,曹麗群,謝毓濱,等.長沙地區(qū)漢族人血小板抗原(HPA1-17)基因多態(tài)性調查[J].中國實驗診斷學,2013(2):331-333.

[3] 劉群.機采血小板獻血不良反應的誘因分析及護理體會[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè),2013(4):32.

[4] 梁秀云.廣西瑤族人群血小板抗原1～17系統(tǒng)基因多態(tài)性研究[J].廣西醫(yī)學,2011(12):156-158.

[5] 蔣鈺瑤,黃宏亮.鹽城地區(qū)漢族人血小板抗原HPA-1～17,Caba基因多態(tài)性分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2014(23):3266-3268.

[6] 周丹，張印則，李大成.北方漢族人群血小板抗原1～6、15系統(tǒng)基因多態(tài)性分析[J].中國輸血雜志,2014(10)：1009-1013.

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[8] 楊芳，黃吉娥，曾小菁，等.貴州省黔東南州侗族獻血人群HPA-1～5多態(tài)性分析及隨機輸血不配合率研究[J].中國輸血雜志,2013(11)：1090-1093.