甲胎蛋白定量方法研究進(jìn)展

孫雪晴，宋德偉，徐 蓓，武利慶，胡高飛，李紅梅

(1.北京化工大學(xué)，北京100029;2.中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，北京100013)

甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)是原發(fā)性肝癌的標(biāo)志物[1]，為了準(zhǔn)確檢測(cè)血清中AFP的含量，提高檢測(cè)結(jié)果的可比性，亟需建立AFP準(zhǔn)確測(cè)定的量值溯源體系，這對(duì)于肝癌患者的早期診斷和病情監(jiān)測(cè)非常重要。本文將對(duì)AFP的定量方法進(jìn)行綜述。

AFP是人胚胎期血清中的主要蛋白成分[2-3]，是一種糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量約70 000[4]。在正常的情況下，這種蛋白主要來自于胚胎的肝細(xì)胞[5]。在胎兒出生大約2周后，AFP會(huì)從血液中消失，所以正常人的血清中 AFP的含量不足20 μg/L。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，會(huì)恢復(fù)產(chǎn)生這種蛋白的功能，并且其在血清中的含量會(huì)隨著病情的惡化而急劇增加[6]，因此AFP就成為診斷原發(fā)性肝癌的一個(gè)特異性臨床指標(biāo)[7]。另外，AFP在睪丸非精原生殖細(xì)胞腫瘤[5]及卵巢生殖細(xì)胞腫瘤[8]等患者血清中亦可出現(xiàn)不同程度的升高，因此AFP作為一種重要的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于臨床檢測(cè)。

一、AFP含量的量值溯源體系

AFP檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響著肝癌等疾病的診斷、治療及預(yù)防，因此得到準(zhǔn)確且具有跨時(shí)空可比性的臨床檢驗(yàn)結(jié)果是防病、治病和提高人類健康水平的基本需要。而實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的最有效方法是建立和保證檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性[9]。因此實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果溯源到國(guó)際基本單位是蛋白質(zhì)計(jì)量追求的最終目標(biāo)之一[10]。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是量值的載體，是實(shí)現(xiàn)溯源體系的關(guān)鍵要素，是保證測(cè)量結(jié)果在時(shí)間和空間上準(zhǔn)確和可比的重要基礎(chǔ)，也是實(shí)現(xiàn)有效測(cè)量即準(zhǔn)確、可比、可溯源測(cè)量的根本保證。

1975年世界衛(wèi)生組織與各個(gè)國(guó)家的研究機(jī)構(gòu)合作，研制出臍帶血清凍干的AFP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(72/225)，經(jīng)8個(gè)國(guó)家的11個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)比對(duì)及國(guó)際專家討論后，將其確定為國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用于世界各國(guó)研制分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溯源。臨床檢驗(yàn)中的分析方法眾多，不同原理的檢驗(yàn)方法或不同試劑的使用都可能引起測(cè)定結(jié)果的不同，因此也需要國(guó)際通用的方法來配合使用。標(biāo)準(zhǔn)方法的研制對(duì)臨床檢驗(yàn)AFP具有重要的意義。

目前，我國(guó)尚未研制出AFP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的飛速進(jìn)步，越來越多的臨床分析檢驗(yàn)儀器引入我國(guó)，不同廠家也研制出了許多AFP臨床檢驗(yàn)試劑盒，由于缺乏高等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，檢驗(yàn)結(jié)果無法溯源到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，往往出現(xiàn)同一樣本不同醫(yī)院檢驗(yàn)結(jié)果不一致，甚至導(dǎo)致疾病診斷結(jié)果相反的情況。因此，為了保證AFP分析檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確和可比，我國(guó)亟需研制出AFP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其相關(guān)的檢測(cè)參考方法，使AFP的標(biāo)準(zhǔn)化得以實(shí)現(xiàn)。

二、AFP的定量檢測(cè)方法

自1956年在人體血清中發(fā)現(xiàn)AFP的存在以來，AFP的檢測(cè)已發(fā)展了多種方法[11-22]，幾乎現(xiàn)有的免疫學(xué)檢測(cè)方法均可用于AFP的測(cè)定。目前國(guó)內(nèi)的臨床檢測(cè)主要是利用蛋白定量試劑盒及免疫測(cè)定分析儀通過免疫的方法體外測(cè)定人血清或血漿中AFP的含量。穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展為準(zhǔn)確定量AFP提供了可能。同位素稀釋質(zhì)譜法由于具有可絕對(duì)測(cè)量、敏感性高、測(cè)量動(dòng)態(tài)范圍寬且測(cè)量值能直接溯源到國(guó)際基本單位等優(yōu)點(diǎn)，近年來被國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室廣泛用作蛋白準(zhǔn)確定量的方法，也是目前公認(rèn)的蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值的基準(zhǔn)方法。以下分別就免疫分析法及質(zhì)譜法在定量AFP研究中的應(yīng)用進(jìn)行概述。

(一)免疫分析法

自從1959年YALOW等[23]將放射性同位素與免疫反應(yīng)結(jié)合建立了放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)后，發(fā)展了一系列免疫分析法，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)[24-26]、熒光免疫分析法(fluorescence immunoassay，F(xiàn)IA)[27-28]和化學(xué)發(fā)光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay，CLIA)[29]等。

1.RIA RIA是利用同位素標(biāo)記的和未標(biāo)記的抗原與抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)的方法。1960年YALOW等[30]第1次用RIA檢測(cè)了血漿胰島素的含量。隨后RIA受到了許多科研人員和醫(yī)學(xué)工作者的關(guān)注，得到了廣泛應(yīng)用。

通過RIA檢測(cè)血清中AFP含量成功診斷出了許多早期肝癌。FORRESTER等[11]把用溴化氫活化后的凝膠結(jié)合上AFP抗體作為免疫吸附劑，將從臍帶血清中提取出的AFP碘化后，進(jìn)行了雙抗體放射免疫測(cè)定，得到的標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線線性范圍為 50 ～1 000 ng/mL。KEMP 等[12]用125I標(biāo)記的抗體和纖維素耦合的抗體對(duì)母體血清中的AFP進(jìn)行了雙位點(diǎn)RIA檢測(cè)，該方法與傳統(tǒng)的RIA相比，大大縮短了檢測(cè)的時(shí)間。

RIA以其敏感性高、特異性好和實(shí)用性強(qiáng)等特點(diǎn)吸引著全國(guó)的生物醫(yī)學(xué)工作者，但由于操作中始終存在放射性污染、同位素半衰期短及試劑盒性能不穩(wěn)定等問題，人們發(fā)展了一系列非放射性標(biāo)記技術(shù)，如酶標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光等。

2.FIA FIA是歷史最悠久的一種標(biāo)記免疫分析法，敏感性很高，在傳染病診斷上有著極為廣泛的用途。ZHU等[13]用血紅素代替辣根過氧化酶作為對(duì)羥基苯和過氧化氫熒光反應(yīng)的標(biāo)記物。血紅素標(biāo)記的和未標(biāo)記的AFP與AFP單克隆抗體結(jié)合后，通過熒光分析進(jìn)行檢測(cè)，得到其檢測(cè)的線性范圍是0～380 ng/mL，檢出限為1.0 ng/mL。YANG等[14]用四磺酸基酞菁鐵作為熒光反應(yīng)的標(biāo)記物對(duì)血清中的AFP進(jìn)行檢測(cè)，得到了類似的結(jié)果。AO等[15]基于涂了單克隆抗體的納米球顆粒在異硫氰酸鹽作用下產(chǎn)生熒光淬滅的原理，發(fā)展了一種利用金納米磁性小球快速準(zhǔn)確檢測(cè)抗原的方法，該方法檢測(cè)AFP的檢出限為0.17 nmol/L。

3.免疫酶法(enzyme immunoassay，EIA)EIA是借助酶細(xì)胞化學(xué)等手段顯示組織抗原或抗體的新技術(shù)，這種方法在醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室、監(jiān)管機(jī)構(gòu)等領(lǐng)域是一種家喻戶曉的方法，它是在FIA的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。由于FIA具有熒光標(biāo)本不能長(zhǎng)期保存以及需要價(jià)格昂貴的熒光顯微鏡才能觀察的不足，1966年NAKANE等[31]嘗試了用酶代替熒光素來標(biāo)記抗體的方法，從而成功地開創(chuàng)了酶標(biāo)記抗體的新技術(shù)，經(jīng)過70和80年代的發(fā)展，EIA有了很大的進(jìn)步，成為了當(dāng)今使用最為廣泛的免疫組織化學(xué)技術(shù)。AIZAWA等[32]利用過氧化酶標(biāo)記的AFP和非標(biāo)記的AFP與抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合發(fā)明了一種傳感器，其AFP檢測(cè)的線性范圍為10-11～10-8g/mL。

與FIA相比，EIA敏感性較高，標(biāo)本能夠長(zhǎng)期保存，并且能夠假設(shè)HE染色等其他付染，有利于將被檢測(cè)物質(zhì)與病變的形態(tài)學(xué)改變聯(lián)系起來，彌補(bǔ)了FIA的不足。但同時(shí)EIA也有其不足之處，因此又在其基礎(chǔ)上發(fā)展了ELISA和CLIA等。

4.ELISA ELISA中最常用的是雙抗體夾心法，其是利用連接于固相載體上的抗體和酶標(biāo)抗體分別與標(biāo)本中被檢測(cè)抗原分子上的2個(gè)抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體免疫復(fù)合物，通過測(cè)定生成的有色底物的質(zhì)量來確定待測(cè)抗原的含量。XU等[16]發(fā)展了一種夾心式的流動(dòng)注射異構(gòu)酶免疫分析法，用電流檢測(cè)在酶促反應(yīng)的過程中生成的對(duì)氨基苯酚的含量，從而檢測(cè)血清中AFP的含量，測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)＜8.2%，檢出限達(dá)到了0.163 μg/L。焦奎等[17]提出了鄰氨基酚-過氧化氫-辣根過氧化物酶伏安酶聯(lián)免疫分析測(cè)定人體血清AFP的新方法，克服了傳統(tǒng)ELISA光度法測(cè)定干擾因素多的缺點(diǎn)，以生物酶作為標(biāo)記物，利用電化學(xué)檢測(cè)得到的AFP測(cè)定線性范圍為1.25 ～400 mg/L。陳曲波等[18]分別采用微陣列ELISA和電化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)AFP、癌胚抗原及前列腺特異性抗原等6種臨床常見腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示2種方法檢測(cè)AFP的陽(yáng)性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，檢測(cè)結(jié)果具有較好的一致性。

5.CLIA CLIA是分子發(fā)光光譜分析法中的一類，是指物質(zhì)在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，由于吸收了反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)能，而使反應(yīng)產(chǎn)物分子激發(fā)至激發(fā)態(tài)，當(dāng)受激分子由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，便會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的光。根據(jù)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在某一時(shí)刻的發(fā)光強(qiáng)度或發(fā)光總量來確定組分含量的分析方法即為 CLIA。THORPE 等[19]用 3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧環(huán)乙烷二鈉鹽[3-(2-spiroadamatane)-4-methoxy-4-(3-phosphoryloxy)-phenyl-1，2-dioxetane，AMPPD]作為CLIA的基質(zhì)來檢測(cè)人體血清中AFP的含量，AMPPD與酶發(fā)生反應(yīng)時(shí)會(huì)在477 nm處發(fā)光。這種方法的AFP定量檢出限為33～470 ng/L。此方法與用堿性磷酸酶的酶免疫比色分析法相比，敏感性提高了67倍，檢出限達(dá)到 0.03 μg/mL。ARAKAWA 等[20]將一個(gè)抗體標(biāo)記上 β-d-半乳糖苷酶，另一個(gè)抗體涂在聚苯乙烯管上，用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖苷做CLIA的基質(zhì)來測(cè)定人體血清中的AFP含量，檢出限達(dá)到0.5 ng/mL，與RIA檢測(cè)的線性相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.99。榮揚(yáng)等[21]分別利用光激化學(xué)發(fā)光法和酶促化學(xué)發(fā)光法測(cè)定了血清中AFP和癌胚抗原的含量，得到光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)AFP的敏感性為0.112 ng/mL，線性范圍為2.6～950.2 ng/mL，與酶促化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果高度相關(guān)，可滿足臨床檢驗(yàn)的要求。

6.免疫傳感器(immunosensor) 免疫傳感器是由偶聯(lián)抗原/抗體分子的生物敏感膜與信號(hào)轉(zhuǎn)換器組成的，其是基于抗原和抗體特異性免疫反應(yīng)的一種生物傳感器[33]。作為一種新興的生物傳感器，具有高度的特異性和極低的檢出限，能夠很好地適應(yīng)很多領(lǐng)域的分析要求。免疫傳感器可分為無標(biāo)記型和標(biāo)記型2種類型，其中無標(biāo)記型按其測(cè)定原理主要分為光學(xué)免疫傳感器、電化學(xué)免疫傳感器以及壓電免疫傳感器。近年來，發(fā)展了許多用免疫傳感器檢測(cè)AFP含量的方法。

光學(xué)免疫傳感器結(jié)合了免疫分析與光學(xué)生物傳感器的優(yōu)點(diǎn)，具有良好的特異性和較低的檢出限。YANG等[34]發(fā)展了一種簡(jiǎn)便的熒光生物傳感器定量AFP，該傳感器的原理是基于免疫色譜測(cè)試條(immunochromatography test strip，ICTS)上的夾心免疫反應(yīng)，結(jié)合量子點(diǎn)發(fā)強(qiáng)光和高的耐光性以及ICTS的優(yōu)點(diǎn)，該方法在10 min內(nèi)50μL AFP標(biāo)準(zhǔn)品的檢出限可達(dá)到1 ng/mL，對(duì)1 000份臨床血清AFP進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與AFP電化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒檢測(cè)結(jié)果相比有良好的一致性。

壓電免疫傳感器是近20年發(fā)展起來的新型生物傳感器，它能夠動(dòng)態(tài)檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)，非常利于免疫反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)分析。TYAN等[35]將AFP單克隆抗體通過水溶性的N-乙基-N-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和羥基琥珀酼亞胺作為連接試劑，連接在自組裝單層膜上，從而把AFP單克隆抗體固定在金表面，制成壓電生物傳感器來檢測(cè)AFP的含量。該方法的檢出限和線性范圍分別為15和15～850 ng/mL。與RIA測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較，該方法檢測(cè)AFP標(biāo)準(zhǔn)品和血清AFP的線性相關(guān)系數(shù)分別為0.990 3和0.975 0，且具有檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、耗時(shí)較短、無需多重標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)。

電化學(xué)免疫傳感器是結(jié)合了電化學(xué)發(fā)光測(cè)量與免疫傳感器的應(yīng)用，由于其結(jié)合了電化學(xué)發(fā)光的高敏感性和免疫分析的高選擇性優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)吸引許多科研人員的關(guān)注[36]。納米材料獨(dú)特的理化特性使之在高性能的電化學(xué)和電化學(xué)發(fā)光傳感器的發(fā)展中有很廣闊的應(yīng)用前景[37]。電化學(xué)免疫分析與納米材料的結(jié)合可以放大電化學(xué)信號(hào)，為更敏感地檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物提供了全新的方法[38]。SU 等[39]用硫堇/納米金疊層自組裝膜和單層碳納米管做免疫探針，用雙功能金納米顆粒增強(qiáng)信號(hào)制成電化學(xué)免疫傳感器來檢測(cè)人體血清中AFP的含量，并與其他常用臨床免疫學(xué)檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，無明顯差異。該方法檢測(cè)AFP的動(dòng)態(tài)線性范圍是0.25～45 ng/mL，檢出限是0.05 ng/mL。WANG 等[40]用脂質(zhì)體包裹Ru(bpy)32+作為標(biāo)記，將電極涂上金納米顆粒，金納米顆?？梢蕴峁┐蟮幕钚员砻?，而脂質(zhì)體可以封閉大量的報(bào)道分子，從而能夠增強(qiáng)電化學(xué)信號(hào)。這樣的免疫傳感器檢測(cè)血清中AFP含量的線性范圍為 0.005～0.2 pg/mL，檢出限可達(dá)到0.001 pg/mL。GUO 等[41]首次將石墨烯-硫化鎘量子點(diǎn)-瓊脂糖復(fù)合物用3-氨基丙基三乙氧基硅烷與玻璃碳電極結(jié)合，可增強(qiáng)電化學(xué)發(fā)光的信號(hào)，從而發(fā)展出一個(gè)快速、超敏感的AFP檢測(cè)方法，該方法的檢出限和定量限分別是0.000 2和0.000 5 pg/mL。

免疫分析法雖然是一種廉價(jià)且有效的分析檢測(cè)方法，但由于其具有耗時(shí)長(zhǎng)，不同的供應(yīng)商會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，檢測(cè)結(jié)果不具有跨時(shí)空的可比性等缺點(diǎn)，必須發(fā)展一種能直接追溯到國(guó)際基本單位、有堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和嚴(yán)格的數(shù)學(xué)表達(dá)的權(quán)威方法來保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確和溯源。

(二)質(zhì)譜法

基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)定量方法已經(jīng)逐漸成為生物醫(yī)學(xué)和臨床研究的重要組成部分[42]，在腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)分析中也得到了廣泛的應(yīng)用[43]。質(zhì)譜技術(shù)可以和免疫分析結(jié)合檢測(cè)血清中腫瘤標(biāo)志物的含量。ZHANG等[22]用Eu3+和 Sm3+分別標(biāo)記AFP和人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin，HCG)抗體后，通過電感耦合等離子體質(zhì)譜儀同時(shí)檢測(cè)了AFP和人絨毛膜促性腺激素的含量，得到測(cè)量線性范圍分別是2.6 ～500 和 5.0 ～170 μg/L，檢出限分別為 1.2和1.7 μg/L。NICOL 等[44]用類似的方法對(duì)肺癌標(biāo)志物——癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)進(jìn)行了定量檢測(cè)。

同位素稀釋質(zhì)譜法是將已知質(zhì)量和豐度的穩(wěn)定同位素作為稀釋劑加入標(biāo)本中，混合均勻后用質(zhì)譜測(cè)定混合前后同位素豐度的變化，由此計(jì)算出標(biāo)本中該元素含量的方法。目前國(guó)際公認(rèn)的化學(xué)測(cè)量權(quán)威方法有精密庫(kù)侖法、同位素稀釋質(zhì)譜法、重量法、容量法和凝固點(diǎn)下降法等。其中，同位素稀釋質(zhì)譜法是唯一一種微量、痕量和超痕量元素權(quán)威測(cè)量方法。蛋白裂解同位素稀釋質(zhì)譜法可以用來準(zhǔn)確定量蛋白質(zhì)。早在20年前，科研工作者已經(jīng)第1次嘗試用氘標(biāo)記的合成肽段作為內(nèi)標(biāo)物檢測(cè)目標(biāo)蛋白質(zhì)[45]。BARNIDGE 等[46]合成了用2個(gè)13C和1個(gè)15N標(biāo)記甘氨酸的前列腺特異抗原(prostate specific antigen，PSA)的1個(gè)肽段(IVGGWECEK)，用其作為內(nèi)標(biāo)肽段檢測(cè)了5種不同濃度的血清PSA含量，所得R2值為0.971。BONDAR等[47]用合成的標(biāo)記肽段作為內(nèi)標(biāo)檢測(cè)了血清 Zn-α-2-糖蛋白的含量，所得檢出限為0.08 mg/L。WILLIAMS 等[48]利用同位素稀釋質(zhì)譜法測(cè)定了患有子宮癌的患者血清中C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)含量，得到的結(jié)果與ELISA測(cè)定結(jié)果的R2值為0.970 8，且發(fā)現(xiàn)利用蛋白裂解同位素稀釋質(zhì)譜法能檢測(cè)到的CRP濃度是ELISA可檢測(cè)的10倍。KUHN等[49]用13C標(biāo)記的CRP特征肽段對(duì)患有風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者血清中的CRP含量進(jìn)行測(cè)定，并與健康人體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比。

雖然應(yīng)用同位素稀釋質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)準(zhǔn)確定量分析的研究已經(jīng)發(fā)展了很多年，但由于糖蛋白的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，將其應(yīng)用于糖蛋白測(cè)定的相關(guān)報(bào)道還較少。目前還未有同位素稀釋質(zhì)譜法應(yīng)用于AFP定量研究的報(bào)道。

三、展望

隨著生命科學(xué)的進(jìn)步和生物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，生物技術(shù)被越來越多地應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，其中蛋白質(zhì)作為一類重要的生物大分子，其分析技術(shù)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展和應(yīng)用，尤其是臨床檢驗(yàn)中腫瘤標(biāo)志物的測(cè)定受到了廣大科研工作者的重視。目前，我國(guó)還沒有AFP相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和參考方法，檢驗(yàn)結(jié)果無法實(shí)現(xiàn)溯源，這對(duì)臨床診斷和篩查結(jié)果會(huì)產(chǎn)生較大的影響。因此，建立AFP含量量值溯源傳遞體系是亟待解決的問題。同位素稀釋質(zhì)譜法因其具有敏感性高、準(zhǔn)確度高且測(cè)量結(jié)果可溯源至國(guó)際基本單位等優(yōu)點(diǎn)，是AFP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制的潛在方法。AFP是一種糖蛋白，在準(zhǔn)確定量技術(shù)上還有很大的研究和探討空間。中國(guó)計(jì)量院科技支撐計(jì)劃目前已經(jīng)開展AFP等腫瘤標(biāo)志物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究，以期為腫瘤標(biāo)志物標(biāo)準(zhǔn)化奠定基礎(chǔ)。

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