非線性化學(xué)指紋圖譜法測(cè)定軟膏劑含量①

董 宇，蔡 雨，方 丹，劉 麗，彭玉生，王東艷，李守君*

(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯154007;2.佳木斯中心醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154007)

0 引 言

中藥復(fù)方祛痘軟膏劑是由黃芩、苦參和蘆薈三種藥材按比例混合提取所得浸膏，與基質(zhì)配制成O/W 型膏劑.基質(zhì)成分主要為有機(jī)試劑，與主藥分離非常困難，對(duì)含量測(cè)定產(chǎn)生干擾，因此，為了準(zhǔn)確測(cè)得軟膏劑含量，而主藥與基質(zhì)的分離技術(shù)要求高，從而增加了軟膏劑分析的難度［1～3］.非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)在中藥分析領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，是一種方便有效分析中藥的方法［4，5］.李守君等人采用非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)優(yōu)化大黃最佳提取工藝及鑒別黃連［6，7］，張海珍等人采用非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)測(cè)定蜂蜜中糖含量［8］.本文利用中藥有效活性成分參與化學(xué)振蕩反應(yīng)而軟膏基質(zhì)不參與反應(yīng)這一特點(diǎn)，對(duì)中藥?kù)疃卉浉鄤┙嗪窟M(jìn)行測(cè)定.該方法不需要進(jìn)行主藥和基質(zhì)分離的前處理［9］，具有操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)，為中藥軟膏劑質(zhì)量評(píng)價(jià)研究開拓新思路.

1 材 料

超聲波清洗器(KQ－500DE 型，昆山市超聲儀器有限公司);超級(jí)恒溫器(SC－15 型，寧波海曙天恒儀器廠);電化學(xué)工作站(LK2005 型，天津蘭力克科技有限公司);鉑電極(213 型，上海精密科學(xué)儀器有限公司);甘汞電極(217 型，上海精密科學(xué)儀器有限公司);天平(BP211D，德國(guó)Sartorius);硫酸、硫酸錳、丙酮、溴酸鉀等試劑均為分析純，水均為二次蒸餾水;苦參、黃芩、蘆薈購(gòu)于藥材市場(chǎng)(由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院陳效忠鑒定).

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

2.1.1 對(duì)照樣品溶液的制備

取中藥浸膏1.0031g，用20mL 蒸餾水45℃超聲溶解15min，置于容量瓶中定容，作為原液，在原液中取1，2，3，4，5mL 分別置于25mL 容量瓶中定容，即為對(duì)照品溶液.

取空白基質(zhì)5g，用10mL 蒸餾水稀釋，30℃超聲分散20min，置于容量瓶中定容，即為空白對(duì)照品溶液.

2.1.2 供試品溶液的制備

取中藥復(fù)方祛痘軟膏5g，用10mL 蒸餾水稀釋，30℃超聲分散20min，置于容量瓶中定容，即為供試品溶液.

2.2 非線性化學(xué)指紋圖譜測(cè)定方法

開啟電化學(xué)工作站，設(shè)定實(shí)驗(yàn)參數(shù).當(dāng)溫度達(dá)到37±0.02℃時(shí)，依次加入一定濃度的硫酸溶液、硫酸錳溶液、丙酮溶液各10mL，加入待測(cè)溶液4mL，600r/min 攪 拌20min，加 入 KBrO3溶 液10mL，計(jì)時(shí)開始.以鉑電極作指示電極，以217 型飽和甘汞電極為參比電極，記錄電勢(shì)(E)隨時(shí)間(t)的變化，獲得非線性化學(xué)指紋圖譜，以誘導(dǎo)時(shí)間為技術(shù)考察指標(biāo)，對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行測(cè)量.

2.3 空白對(duì)照品與供試品的非線性化學(xué)指紋圖譜比較

精密移取空白對(duì)照品溶液和供試樣品溶液，按照2.2 實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè).由圖1 可知，在0 ～8000s 內(nèi)空白基質(zhì)的非線性化學(xué)指紋圖譜沒有產(chǎn)生振蕩波形，是一條平滑曲線，而供試樣品在5000 ～7000s產(chǎn)生化學(xué)振蕩圖譜，表明空白基質(zhì)在軟膏劑檢測(cè)計(jì)量范圍內(nèi)不產(chǎn)生化學(xué)振蕩，對(duì)中藥復(fù)方軟膏劑含量測(cè)定沒有影響.

圖1 空白對(duì)照品與供試品的非線性化學(xué)指紋圖譜比較

2.4 單味藥材提取物軟膏劑與供試樣品的非線性化學(xué)指紋圖譜比較

精密稱取苦參、黃芩、蘆薈提取物與空白基質(zhì)，分別配制成苦參、黃芩、蘆薈提取物含量為50mg/g 的軟膏劑，按照2.1 方法制備苦參、黃芩、蘆薈軟膏供試品溶液，按照2.2 方法，分別以苦參、黃芩、蘆薈軟膏供試品溶液為耗散底物進(jìn)行檢測(cè)，作非線性化學(xué)振蕩指紋圖譜，比較苦參、黃芩、蘆薈軟膏劑與供試樣品圖譜的變化.如圖2 可以看出，同一實(shí)驗(yàn)條件下，苦參、黃芪、蘆薈單味藥提取物軟膏劑與供試樣品在非線性化學(xué)指紋圖譜的特征參數(shù)誘導(dǎo)時(shí)間、起振電壓、最大振幅和振蕩壽命有明顯的差別.因此，通過(guò)非線性化學(xué)指紋圖譜可以明顯看出本復(fù)方軟膏劑中藥是否全被加入.

圖2 單味藥提取物軟膏劑與供試品的非線性化學(xué)指紋圖譜比較

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密移取2.1 的5 個(gè)對(duì)照品溶液，按2.2 方法進(jìn)行檢測(cè)，以誘導(dǎo)時(shí)間為指標(biāo)，繪制誘導(dǎo)時(shí)間(t)與濃度(c)的曲線，獲得回歸方程:t=6898－183.6c，R=0.9972，由圖3 可知，不同含量中藥復(fù)方祛痘軟膏劑的誘導(dǎo)時(shí)間隨含量增大而減小，中藥浸膏濃度在6 ～34 mg·mL－1范圍內(nèi)線性相關(guān)良好.

圖3 中藥復(fù)方軟膏劑標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.6 精密度考察

精密稱取濃度為70mg/g 中藥復(fù)方祛痘軟膏劑10g，按照2.1 制備待測(cè)溶液，按照2.2 方法測(cè)量，重復(fù)5 次，隔日同法測(cè)量5 次，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得日內(nèi)RSD 為1.08%，日間RSD 為1.69%.

2.7 加樣回收率考察

精密稱取浸膏及空白基質(zhì)，配成含量為50mg/g，70mg/g，90mg/g 軟膏，每種軟膏精密稱取5g，按照2.1 方法配成溶液，按照2.2 方法測(cè)量，每個(gè)樣品平行測(cè)量3 次，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得回收率在99 ～102%之間，平均回收率在99 ～101%之間，RSD ＜1%.

2.8 復(fù)方中藥?kù)疃卉浉鄤┲兴幗嗪繙y(cè)定

按照2.2 方法，對(duì)三批樣品進(jìn)行測(cè)量，每批樣品平行測(cè)量3 次，參照《中國(guó)藥典》2010 版，軟膏劑含量限度制定為標(biāo)示量的90 ～110%.由表1 可知，三批樣品含量平均值依次為:5.07%、4.93%、4.97%，三批樣品的含量檢測(cè)限度在98.6 ～101.4%，均在90 ～110%之間，符合藥典軟膏劑含量限度的規(guī)定，達(dá)到試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求.

表1 樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討 論

3.1 攪拌速度對(duì)復(fù)方中藥軟膏劑非線性化學(xué)指紋圖譜的影響

攪拌速度主要影響體系物質(zhì)混合的均勻程度.由于軟膏劑制備時(shí)原料大多為油脂類，具有粘稠性，當(dāng)被加入反應(yīng)溶液體系時(shí)，提高了體系溶液的黏度，增加溶液混合難度.因此采用非線性化學(xué)指紋圖譜測(cè)量軟膏劑時(shí)，攪拌速度的選擇較為重要，攪拌速度過(guò)快或過(guò)慢，導(dǎo)致混合不均勻現(xiàn)象，獲得的非線性化學(xué)指紋圖譜不理想.本實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為600r/min 時(shí)，獲得指紋圖譜較理想.

3.2 非線性化學(xué)指紋圖譜鑒別中藥復(fù)方軟膏劑真?zhèn)蔚奶接?/h3>

含量測(cè)定的難點(diǎn)在于基質(zhì)的干擾，采用高效液相色譜測(cè)定時(shí)，需要選擇適當(dāng)?shù)娜苊饺芙饣|(zhì)或主藥［1］，應(yīng)該將主藥與基質(zhì)分離.非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)的特點(diǎn)是對(duì)中藥群集信息的研究［10］，不必對(duì)樣品有效部位分離，尤其在中藥復(fù)方分析研究時(shí)，這一特點(diǎn)表現(xiàn)出極大的優(yōu)勢(shì).本文綜合考慮上述因素，利用非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)具有解決上述問(wèn)題的特點(diǎn).通過(guò)對(duì)比基質(zhì)、單味藥和成品指紋圖譜的比較區(qū)別，可以用來(lái)鑒別中藥復(fù)方軟膏劑是否含有處方藥材，從而，可建立一種簡(jiǎn)單鑒別中藥復(fù)方軟膏劑真?zhèn)蔚男路椒?

4 結(jié) 論

在主藥與基質(zhì)不分離的前提下，采用非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)，對(duì)中藥復(fù)方軟膏劑含量進(jìn)行測(cè)定，獲得重現(xiàn)性良好的中藥復(fù)方軟膏劑非線性化學(xué)指紋圖譜，此圖譜能夠很好地表征中藥復(fù)方軟膏劑的中藥有效成分.以誘導(dǎo)時(shí)間和中藥加樣量為指標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系.應(yīng)用非線性化學(xué)指紋圖譜技術(shù)，以誘導(dǎo)時(shí)間為技術(shù)指標(biāo)檢測(cè)中藥復(fù)方軟膏劑含量的方法可行，該方法科學(xué)合理、操作簡(jiǎn)便快捷、重現(xiàn)性良好，可作為中藥復(fù)方軟膏劑含量檢測(cè)的新方法.

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