BV致病菌群分布狀況及BV快速檢測試劑盒診斷細(xì)菌性陰道病的價值

郝家明，刁志宏，黎永新，楊志勇，李明友

（1.中國人民解放軍第187中心醫(yī)院檢驗科，海南 ?？?71157；2.廣東省第二人民醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州510317)

BV致病菌群分布狀況及BV快速檢測試劑盒診斷細(xì)菌性陰道病的價值

郝家明1，刁志宏2，黎永新2，楊志勇2，李明友2

（1.中國人民解放軍第187中心醫(yī)院檢驗科，海南 海口571157；2.廣東省第二人民醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州510317)

目的評價快速檢測試劑診斷細(xì)菌性陰道病(BV)的價值，并分析BV致病菌群的分布狀況。方法使用BV快速檢測試劑檢測108例疑似BV患者的陰道分泌物，以Amsel為金標(biāo)準(zhǔn)對其檢測結(jié)果進(jìn)行評價；同時進(jìn)行病原菌培養(yǎng)，分析其致病菌群情況。結(jié)果BV快速檢測試劑的敏感性、特異性、陽性預(yù)期值和陰性預(yù)期值分別為97.3%、95.8%、92.3%和98.6%，與金標(biāo)準(zhǔn)符合率高達(dá)96.3%(Kappa系數(shù)=0.879，P=0.001)；細(xì)菌培養(yǎng)檢出病原菌77例，23例(21.3%)發(fā)生合并感染，以假絲酵母菌合并其他病原菌體感染為多見。結(jié)論BV快速檢測試劑診斷BV具有較高的特異性和敏感性，但BV致病菌群呈現(xiàn)出多樣性，不能忽視需氧性菌所致BV的存在。

細(xì)菌性陰道?。魂幍兰拥录{菌；陰道菌群

細(xì)菌性陰道病(Bacterial vaginosis，BV)是目前臨床上婦科最常見的感染性疾病之一[1]，其典型病理特征為陰道微生態(tài)失調(diào)，正常菌群比例改變[2-4]，表現(xiàn)為產(chǎn)H2O2乳酸桿菌數(shù)量減少，而類桿菌、支原體等厭氧菌、加德納菌等數(shù)量過度增加。如不及時治療，易于發(fā)生泌尿系感染、不良妊娠及盆腔炎等婦科疾病，故而其早期明確診斷至關(guān)重要。唾液酸酶由陰道菌群中的厭氧菌產(chǎn)生，最新研究證實其活性升高可反映陰道內(nèi)厭氧菌過度生長，與BV的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。BV快速檢測試劑對活性唾液酸酶具有高度特異性，本研究以Amsel法為金標(biāo)準(zhǔn)，對其診斷效能進(jìn)行評估，同時進(jìn)行陰道菌群病原菌培養(yǎng)，分析BV的致病菌群特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1～6月期間在廣東省第二人民醫(yī)院婦科門診接受診治疑似為BV的女性患者108例，患者年齡20～55歲，平均(33.6±4.2)歲。所有受檢者均未使用過灌注療法或陰道乳劑；排除72 h內(nèi)有性生活史者，妊娠期和行經(jīng)期女性。

1.2 檢測試劑和儀器 BV細(xì)菌性陰道病快速檢測試劑由廣東珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號：YZB/粵0395-2008)。血液瓊脂培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、雙糖鐵瓊脂等常規(guī)試劑購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司。儀器采用美國BD公司的Phoenix100細(xì)菌鑒定系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1 樣本收集 外陰消毒后，用兩支棉拭子(無菌生理鹽水浸濕)于陰道深部或后穹隆取材并立即送檢。一支行BV細(xì)菌性陰道病快速檢測、Amsel法檢測及陰道分泌物常規(guī)檢查；另一支行細(xì)菌培養(yǎng)和菌種分析。樣本陰道分泌物常規(guī)檢查按衛(wèi)生部《臨床檢驗操作規(guī)程》第三版進(jìn)行。BV細(xì)菌性陰道病快速檢測按試劑使用說明書操作，以陰陽性判定結(jié)果。

1.3.2 細(xì)菌培養(yǎng)方法 分別將檢材接種于血瓊脂、巧克力及麥康凱平板，35℃孵育24～48 h后，可疑菌落涂片，行革蘭染色、選擇性氧化酶試驗、觸酶試驗后選擇合適的ATB鑒定板條或使用美國BD公司的Phoenix100細(xì)菌鑒定系統(tǒng)行細(xì)菌鑒定。

1.3.3 Amsel法 以Amsel法作為確診BV的金標(biāo)準(zhǔn)：(1)陰道分泌物稀薄奶樣；(2)陰道pH＞4.5；(3)胺試驗陽性；(4)線索細(xì)胞陽性；以上4項有3項陽性即為BV陽性。

1.3.4 陰道加德納菌的鑒定 按文獻(xiàn)[5]將標(biāo)本劃種于含有50ml/L人血瓊脂平板上，在37℃、50ml/L CO2環(huán)境中生長良好，形成針尖大小、圓形、光滑、半透明、形似露滴狀的菌落，有狹窄的β溶血環(huán)，48 h后菌落直徑增大。挑取典型菌落作氧化酶、觸酶試驗陰性，進(jìn)一步作葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等發(fā)酵試驗產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵肌醇和棉子糖，能水解馬尿酸和淀粉，硝酸鹽還原試驗陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實驗結(jié)果中的計數(shù)資料以頻數(shù)和百分率表示，兩種方法之間的比較采用Kappa一致性檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法的BV檢測結(jié)果比較108例樣本中，Amsel法檢測陽性39例，陽性率為36.1%，BV細(xì)菌快速檢測試劑檢測陽性37例，陽性率為34.3%。以Amsel法為金標(biāo)準(zhǔn)，BV細(xì)菌快速檢測試劑特異性為95.8%(68/71)，敏感性為97.3%(36/37)，陽性預(yù)測值為92.3%(36/39)，陰性預(yù)測值為98.6%(68/69)，兩種方法符合率為96.3%[(36+68)/108]，Kappa=0.879，P=0.001，P=0.001，見表1。

表1108例患者的兩種方法BV檢測結(jié)果比較（例）

2.2 病原菌培養(yǎng)結(jié)果108例標(biāo)本中，檢出病原菌77例(71.3%)，其中，假絲酵母菌31例(28.7%)，大腸埃希氏菌20例(18.5%)，陰道加德納菌16例(14.8%)，金黃色葡萄球菌8例(7.4%)，變形桿菌7例(6.5%)，枸緣酸桿菌和糞腸球菌各4例(3.7%)，克雷伯氏菌和淋病奈瑟氏菌各3例(2.8%)，不動桿菌1例(0.9%)。此外，經(jīng)檢查發(fā)現(xiàn)23例(21.3%)發(fā)生合并感染，并以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見，其中合并陰道毛滴蟲(6例)，大腸埃希桿菌(3例)，加德納菌(3例)、克雷伯氏菌(1例)；其次加德納菌合并陰道毛滴蟲(4例)、大腸埃希氏菌(1例)；少數(shù)合并金黃色葡萄球菌、糞腸球菌或淋病奈氏菌感染。

3 討論

Amsel法是目前診斷BV唯一公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”[6-7]，但此法操作繁瑣、取材較多、難度大、費用高，最大的缺陷是結(jié)果以主觀判斷為主[8]。正常情況下婦女陰道內(nèi)存在二十多種微生物，其相互制約、相互協(xié)調(diào)，共同維持陰道微生態(tài)相對平衡。當(dāng)某種或某幾種微生物異常增多時，產(chǎn)H2O2的乳酸桿菌減少甚至消失，大量致病性厭氧菌取代了正常乳酸桿菌，粘附在上皮細(xì)胞表面使細(xì)胞溶解，是發(fā)生BV的主要原因。BV快速診斷試劑盒的檢測原理是試劑與病原菌產(chǎn)生的唾液酸酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成唾液酸，再加入顯色劑即可診斷BV。本研究對所有樣本同時采用Amsel法和BV快速檢驗法進(jìn)行診斷，經(jīng)Kappa一致性檢驗，發(fā)現(xiàn)兩種方法的診斷結(jié)果具有良好的一致性。BV快速檢驗法取得了較高敏感性和特異性，且具有操作簡便、耗時短、易于掌握、結(jié)果直觀、試劑可室溫保存等優(yōu)點。

本研究在樣本收集過程中，未能進(jìn)行沙眼衣原體、解脲支原體感染的檢驗，而其他細(xì)菌、真菌、陰道毛滴蟲感染狀況與文獻(xiàn)報道基本相符。但本研究還發(fā)現(xiàn)，BV患者存在相當(dāng)一部分混合感染，本組病例的混合感染率為21.3%，以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見，除合并其他細(xì)菌外，也可能合并陰道毛滴蟲、真菌等其他病原體。提示細(xì)菌性陰道病大多為非單一性感染，病原體可能顯示多態(tài)性。原因可能是BV病原菌可產(chǎn)生高水平磷脂酶A、唾液酸酶、黏蛋白酶等[9-10]，上述酶對陰道保護(hù)性黏液層具有較強(qiáng)的溶解作用，破壞了陰道的自我保護(hù)機(jī)制，增加了致病性病原體的附著力；而琥珀酸的產(chǎn)生又可抑制趨化效應(yīng)，阻止中性粒細(xì)胞向病原體聚集，使其他致病性病原體能夠逃避免疫攻擊，大量繁殖。二者共同作用，進(jìn)一步加重BV的感染和炎癥癥狀。本研究發(fā)現(xiàn)，部分金標(biāo)準(zhǔn)檢測陽性病例采用BV快速試劑盒為陰性，可能是因為BV感染過程中尚未形成產(chǎn)生唾液酸酶的優(yōu)勢菌，唾液酸酶產(chǎn)量未達(dá)到檢測限；也有部分BV快速診斷試劑盒檢測為陽性的病例金標(biāo)準(zhǔn)診斷為陰性，可能是因為其他少數(shù)產(chǎn)唾液酸酶的細(xì)菌導(dǎo)致了假陽性反應(yīng)。

值得注意的是，BV并非完全由厭氧菌引發(fā)，不能忽視需氧菌導(dǎo)致BV的可能，本組病例細(xì)菌培養(yǎng)也發(fā)現(xiàn)了金黃色葡萄球菌、糞腸球菌等需氧菌或兼性厭氧菌。Shamim等[11]研究需氧菌致病陰道炎(Aerobe vaginosis，AV)的致病細(xì)菌和抗生素的敏感性發(fā)現(xiàn)，該病的主要致病菌為金黃色葡萄球菌(40%)、E.coli(13%)，糞腸球菌(20%)和B族鏈球菌(6%)。這些細(xì)菌對青霉素類和磺胺類抗生素的敏感性均在90%以上，為AV的診斷和治療提供了詳實的微生物學(xué)方面的實驗數(shù)據(jù)。因此Gilbert提出的AV的診斷，主要采用經(jīng)Tempera等[12]修改的綜合診斷方法，其中，AV評分為必備指標(biāo)，需綜合陰道分泌物中乳酸桿菌分級、白細(xì)胞數(shù)量以及中毒白細(xì)胞所占比例、背景菌落數(shù)等指標(biāo)。需氧性細(xì)菌所致陰道炎也不容忽視。

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1003—6350（2015）22—3412—02

2014-11-28)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1236

郝家明。E-mail：haojm@sina.com